Kan sovende perimenopausale ovariefollikler bli FSH-responsive?

Introduksjon Kvinner slutter å menstruere ved gjennomsnittlig alder av 51, men graviditeter blir mye mindre utbredt etter 40, med graviditet ved 43 år som en relativ sjeldenhet. Nåværende vanlig oppfatning tilskriver regresjon av fertilitet til uttømming av de primordiale folliklenes pool (Burger et al. 2008). Nedgangen i fertilitet kan ikke nødvendigvis skyldes en kraftig uttømming av den primordiale follikkelpoolen (Hansen et al. 2008), men kan skyldes svikt i adekvat overgang fra primordiale til antrale, gonadotropin-responsive follikler. Det er ikke sjeldent å møte en fertilitetspasient i slutten av trettiårene eller begynnelsen av førtiårene, som ikke ville respondert på de mest ekstreme dosene av eksogent FSH, men som likevel vil fortsette å menstruere til fylte 50 år. Vanlig praksis er å henvise disse pasientene til oocyttdonasjonsprogrammer.

Nylig har Li et al. (2010) demonstrerte at inkubering av neonatale museovariefragmenter med en hemmer av fosfatase med TENsin-homologi slettet i kromosom 10 (PTEN) fosfatase og et PI3K-aktiverende peptid, økte kjernefysisk eksklusjon av Foxo3 og drev et stort antall primordiale dorlicts fra F. -responsive antralfollikler. Videre, i nakne musemodellen (mus som mangler immunsystem) viste de at transplanterte menneskelige eggstokkfragmenter som hovedsakelig inneholder primordiale follikler fra kirurgiske prøver, behandlet med samme inkubasjon, også gjennomgikk aktivering av sovende follikler for å utlede preovulatoriske follikler som inneholder modne oocytter.

Basert på alt det ovennevnte antar vi at eggstokkene til kvinner i deres perimenopausale år kan drives til å bli FSH-responsive, ved å bruke inkubasjon med PTEN-hemmer og PI3K-aktiverende peptid for å aktivere sovende primordiale follikler.

Hvis den blir funnet gjennomførbar, kan denne teknikken gi håp om å oppnå fruktbarhet til pasienter som ellers ville blitt henvist til å motta oocyttdonasjon.

Målet med den foreslåtte studien Å skaffe ovariekortikale fragmenter fra perimenopausale pasienter, som gjennomgår gynekologisk kirurgi, og teste om behandling med PTEN-fosfatase og PI3K-aktiverende peptid ville indusere disse fragmentene til å produsere FSH-responsive follikler i nakenmusemodellen.

Undersøkelsespersoner og innhøsting av prøver Opptil ti kvinner over 45 år som er planlagt til gynekologisk operasjon, vil bli bedt om å gi halvparten av en eggstokk til studien. Vevet vil deretter kuttes til flere fragmenter, egnet for kryokonservering.

Laboratoriemetoder Kryokonservering av ovariefragmenter vil bruke en forglasningsprotokoll som ligner på tidligere rapport for kryolagring av oocytter (Yoon et al. 2003). Fordi kryokonserveringsreagensene lett kan penetrere primordiale follikler sammenlignet med de store oocyttene, forventer vi effektiv bevaring av disse folliklene. Hos unge pasienter inneholder en 1 mm kortikale kuber ~50 primordiale follikler.

Tre vevsprøver fra hver pasient vil bli overført til Hsueh-laboratoriet i Stanford (vedlagt brev), og vil bli tint for in vitro-aktivering etterfulgt av xeno-transplantasjon ved bruk av samme protokoll som beskrevet av Li et al. fra det laboratoriet. (Li et al. 2010). In vitro-inkubasjonen vil være i bpV(pic) (Calbiochem), en PTEN-hemmer, som tillater aktivering av sovende follikler. og et celle-permeabelt fosfo-peptid (740Y-P) (Tocris) som er i stand til å binde seg til SH2-domenet til den p85-regulatoriske underenheten til PI3K for å stimulere enzymaktivitet. Aktivert PI3K konverterer fosfatidylinositol (4, 5)-bisfosfat (PIP2) til fosfatidylinositol (3-5)-trisfosfat (PIP3), mens PTEN-hemmeren forhindrer konvertering av PIP3 tilbake til PIP2. Akkumulert PIP3 kan på sin side stimulere fosforyleringen av Akt og øke den nukleære eksklusjonen av transkripsjonsfaktoren Foxo3.