Могут ли бездействующие перименопаузальные фолликулы яичников стать чувствительными к ФСГ?

Введение У женщин прекращаются менструации в среднем в возрасте 51 года, однако беременность после 40 лет становится гораздо менее распространенной, а беременность в 43 года является относительной редкостью. Современное общепринятое мнение связывает регресс фертильности с истощением пула примордиальных фолликулов (Burger et al. 2008). Снижение фертильности может быть результатом не обязательно резкого истощения пула примордиальных фолликулов (Hansen et al. 2008), но может быть связано с неспособностью адекватного перехода от примордиальных к антральным гонадотропин-чувствительным фолликулам. Нередко можно встретить пациентку с фертильностью в возрасте от тридцати до сорока лет, которая не реагирует на самые экстремальные дозы экзогенного ФСГ, но, тем не менее, продолжает менструировать до 50 лет. Обычной практикой является направление таких пациенток в программы донорства ооцитов.

Недавно Ли и соавт. (2010) продемонстрировали, что инкубация фрагментов яичников новорожденных мышей с ингибитором фосфатазы с гомологией TENsin, делетированной в фосфатазе хромосомы 10 (PTEN), и пептидом, активирующим PI3K, увеличивала исключение из ядра Foxo3 и стимулировала большое количество спящих примордиальных фолликулов к превращению в ФСГ. -отзывчивые антральные фолликулы. Кроме того, в модели голых мышей (мыши с отсутствием иммунной системы) они показали, что трансплантированные фрагменты яичников человека, содержащие в основном примордиальные фолликулы из хирургических образцов, обработанные той же инкубацией, также подвергались активации спящих фолликулов с образованием преовуляторных фолликулов, содержащих зрелые ооциты.

На основании всего вышеизложенного мы предполагаем, что яичники женщин в перименопаузальном возрасте могут стать чувствительными к ФСГ, используя инкубацию с ингибитором PTEN и активирующим пептидом PI3K для активации спящих примордиальных фолликулов.

Если эта техника будет признана осуществимой, она может дать надежду на достижение фертильности пациентам, которым в противном случае было бы рекомендовано получить донорские ооциты.

Цель предлагаемого исследования Получить фрагменты коры яичников у пациенток в перименопаузе, перенесших гинекологическую операцию, и проверить, будет ли лечение фосфатазой PTEN и пептидом, активирующим PI3K, индуцировать эти фрагменты для производства фолликулов, чувствительных к ФСГ, на модели голых мышей.

Субъекты исследования и сбор образцов До десяти женщин старше 45 лет, которым планируется гинекологическая операция, будет предложено предоставить половину яичника для исследования. Затем ткань будет разрезана на несколько фрагментов, подходящих для криоконсервации.

Лабораторные методы При криоконсервации фрагментов яичников будет использоваться протокол витрификации, аналогичный предыдущему отчету о криохранилище ооцитов (Yoon et al. 2003). Поскольку реагенты для криоконсервации могут легко проникать в примордиальные фолликулы по сравнению с крупными ооцитами, мы ожидаем эффективного сохранения этих фолликулов. У молодых пациентов один 1 мм кортикальный куб содержит ~50 примордиальных фолликулов.

Три образца тканей от каждого пациента будут переданы в лабораторию Hsueh в Стэнфорде (письмо прилагается) и будут разморожены для активации in vitro с последующей ксенотрансплантацией с использованием того же протокола, который описан Li et al. из той лаборатории. (Ли и др., 2010). Инкубация in vitro будет проводиться в bpV(pic) (Calbiochem), ингибиторе PTEN, который позволяет активировать спящие фолликулы. и проникающий в клетки фосфопептид (740Y-P) (Tocris), способный связываться с доменом SH2 регуляторной субъединицы p85 PI3K для стимуляции активности фермента. Активированный PI3K превращает фосфатидилинозитол (4, 5)-бисфосфат (PIP2) в фосфатидилинозитол (3-5)-трифосфат (PIP3), тогда как ингибитор PTEN предотвращает превращение PIP3 обратно в PIP2. Накопленный PIP3, в свою очередь, может стимулировать фосфорилирование Akt и усиливать исключение из ядра транскрипционного фактора Foxo3.