Les follicules ovariens dormants de la périménopause peuvent-ils devenir sensibles à la FSH ?

Introduction Les femmes cessent d'avoir leurs règles à l'âge moyen de 51 ans, mais les grossesses deviennent beaucoup moins fréquentes au-delà de 40 ans, les grossesses à 43 ans étant une rareté relative. La perception commune actuelle attribue la régression de la fertilité à l'épuisement du pool des follicules primordiaux (Burger et al. 2008). Le déclin de la fertilité peut ne pas résulter nécessairement d'un épuisement brutal du pool de follicules primordiaux (Hansen et al. 2008), mais peut être dû à l'échec d'une transition adéquate des follicules primordiaux aux follicules antraux sensibles aux gonadotrophines. Il n'est pas rare de rencontrer une patiente infertile à la fin de la trentaine ou au début de la quarantaine, qui ne répondrait pas aux doses les plus extrêmes de FSH exogène, mais qui continuerait néanmoins à avoir ses règles jusqu'à l'âge de 50 ans. La pratique habituelle consiste à orienter ces patientes vers des programmes de don d'ovocytes.

Récemment, Li et al. (2010) ont démontré que l'incubation de fragments d'ovaires de souris néonatales avec un inhibiteur de la phosphatase avec homologie TENsin supprimée dans la phosphatase du chromosome 10 (PTEN) et un peptide activateur PI3K, augmentait l'exclusion nucléaire de Foxo3 et propulsait un grand nombre de follicules primordiaux dormants à devenir FSH - follicules antraux réactifs. De plus, dans le modèle de souris nues (souris dépourvues de système immunitaire), ils ont montré que des fragments d'ovaires humains transplantés contenant principalement des follicules primordiaux provenant d'échantillons chirurgicaux, traités par la même incubation, subissaient également une activation des follicules dormants pour dériver des follicules préovulatoires contenant des ovocytes matures.

Sur la base de tout ce qui précède, nous émettons l'hypothèse que les ovaires des femmes en période de périménopause pourraient être propulsés pour devenir sensibles à la FSH, en utilisant l'incubation avec un inhibiteur de PTEN et un peptide activateur de PI3K pour activer les follicules primordiaux dormants.

Si elle est jugée faisable, cette technique pourrait donner l'espoir d'atteindre la fertilité chez les patientes qui seraient autrement référées pour recevoir un don d'ovocytes.

Objectif de l'étude proposée Obtenir des fragments corticaux ovariens de patientes en périménopause, qui subissent une chirurgie gynécologique, et tester si un traitement avec la phosphatase PTEN et le peptide activateur PI3K induirait ces fragments à produire des follicules sensibles à la FSH dans le modèle de souris nude.

Sujets de l'étude et prélèvement d'échantillons Jusqu'à dix femmes, âgées de plus de 45 ans, qui doivent subir une opération gynécologique, seront invitées à fournir la moitié d'un ovaire pour l'étude. Le tissu sera ensuite coupé en plusieurs fragments, adaptés à la cryoconservation.

Méthodes de laboratoire La cryoconservation des fragments ovariens utilisera un protocole de vitrification similaire au rapport précédent pour le stockage cryogénique des ovocytes (Yoon et al. 2003). Parce que les réactifs de cryo-conservation peuvent facilement pénétrer les follicules primordiaux par rapport aux gros ovocytes, nous prévoyons une conservation efficace de ces follicules. Chez les jeunes patients, un cube cortical de 1 mm contient environ 50 follicules primordiaux.

Trois échantillons de tissus de chaque patient seront transférés au laboratoire Hsueh à Stanford (lettre jointe), et seront décongelés pour une activation in vitro suivie d'une xéno-transplantation en utilisant le même protocole que celui décrit par Li et al. de ce laboratoire. (Li et al. 2010). L'incubation in vitro se fera dans le bpV(pic) (Calbiochem), un inhibiteur de PTEN, qui permet l'activation des follicules dormants. et un phospho-peptide perméable aux cellules (740Y-P) (Tocris) capable de se lier au domaine SH2 de la sous-unité régulatrice p85 de PI3K pour stimuler l'activité enzymatique. La PI3K activée convertit le phosphatidylinositol (4, 5)-bisphosphate (PIP2) en phosphatidylinositol (3-5)-trisphosphate (PIP3), tandis que l'inhibiteur de PTEN empêche la reconversion de PIP3 en PIP2. Le PIP3 accumulé, à son tour, pourrait stimuler la phosphorylation d'Akt et augmenter l'exclusion nucléaire du facteur transcriptionnel Foxo3.