益生菌片对学龄前儿童口腔健康的预防作用

背景 尽管龋齿普遍下降，但儿童早期龋齿 (ECC) 仍然是一个严重的全球性问题，具有社会和行为梯度 [1, 2]。 该疾病是多因素造成的，但关键事件是口腔环境中 pH 诱导的压力，导致口腔生物膜多样性降低 [3]。 生物膜只是适应这种情况，代表有益和促进健康的细菌过度生长与龋齿相关的酸性菌株。 因此，添加益生菌已被建议作为维持口腔健康的新方法，作为现有循证方法的辅助手段 [4, 5]。 先前的临床试验表明，每天摄入乳杆菌衍生的乳制品可以降低学龄前儿童的龋齿发病率、改善整体健康状况并减少抗生素的使用 [6, 7, 8]。 然而，需要对益生菌概念进行进一步研究；所有儿童都不喝牛奶，迄今为止还没有对非乳制品和链球菌菌株进行过关于儿童龋齿的研究。

目的 本项目的目的是评估每日服用含有益生菌 (Probiora3) 的咀嚼片对学龄前儿童牙菌斑数量、牙龈健康和龋齿发病率的影响。 此外，还将收集有关一般健康的信息。 零假设是口腔健康与摄入类似安慰剂片剂的学龄前儿童没有差异。 另一个目的是在基线和干预过程中监测唾液样本中的微生物组成。

研究设计 该研究设计是一项具有两个平行臂的前瞻性随机、双盲、安慰剂对照试验。 持续时间为12个月。 干预组和对照组的分配将通过 A 组或 B 组中基于计算机的随机化进行。

材料 研究小组将在 2 岁儿童中招募，这些儿童是瑞典马尔默 Rosengård 公共牙科诊所的常规患者。 该诊所位于社会经济水平较低的多元文化郊区。 该地区的移民比例很高，大多数人讲阿拉伯语。 入选标准是 i) 总体健康状况良好，ii) 没有蛀牙或严重的牙科疾病，以及 iii) 没有精神或身体残疾。 排除不合作或完全拒绝牙科检查的儿童。 在父母签署知情同意书（口头和书面）后，孩子们将被连续录取，并通过计算机程序生成的预先编号的信封分配到测试组或对照组。 当一名新患者进入研究时，临床医生会拿走下一个编号的信封，将患者分配到 A 组或 B 组。该方案已提交区域伦理委员会并获得批准。

功效计算 将 alpha 设置为 0.05 且 beta = 0.2 的临床评分的功效计算估计每组需要 85 名受试者才能揭示治疗组之间 30% 的临床评分差异（Fleiss Statistical Methods for rates and比例，第 2 版，John Wiley and Sons New York 1981）。 由于预期搬迁和未能遵守协议，目标将是招募最少 220 名和最多 250 名儿童。

干预和持续时间 在基线之前，所有家庭都将接受牙科保健员对口腔健康信息的全面强化。 重点将放在每天监督下使用含氟牙膏刷牙。 在基线检查中，牙菌斑指数、刷牙后出血和龋齿在光学阅读的特殊表格上进行评分。 正在进行的药物治疗等数据将从牙科记录中提取。 此外，根据 Stecksén-Blicks 等人的说法，借助计算机化程序 (Cariogram) 进行龋齿风险评估。 2007 [8]. 测试组（A 组）儿童的父母将被指示每天一次给他们的孩子一片 EvoraKids® 片剂，最好在刷牙后服用，持续 12 个月。 对照组（B 组）儿童的父母将收到相同的关于服用不含活益生菌的药片的说明。 家长和研究人员都不知道小组分配，只有在统计计算后才会公开。 配置隐蔽由制造商保存。 鼓励所有家长保持所有习惯性口腔卫生习惯，并在整个研究期间使用含氟牙膏。

测试片剂含有浓度为 3x108 CFU 的 Probiora3，它是三种益生菌链球菌菌株（乳房链球菌 KJ2、口腔链球菌 KJ3 和大鼠链球菌 JH145）的商标。 赤藓糖醇是一种对牙齿有益的多元醇（有关营养成分，请参阅附录 B），使药片变甜。 咀嚼片（测试和安慰剂）的味道和外观相同，将由制造商（美国 Oragenics）提供，包装由字母“A”或“B”分隔。 届时将为参与的家庭提供三个月使用的平板电脑，并在每次跟进时检查并登记依从性。 父母将被指示立即向牙科工作人员报告任何感知到的副作用或不良反应并停止摄入。

临床检查

将在基线时以及 6 个月和 12 个月后进行临床检查。 每三个月联系一次家庭进行访谈和交付研究产品。 检查和评分将由牙科诊所的两名训练有素和经过校准的牙科保健员进行视觉和触觉检查。 在基线时，将通过包含 10 个问题的问卷收集有关家庭口腔卫生习惯、婴儿奶瓶使用和习惯性甜食摄入量的信息。 对以下端点进行评分：

主要结果指标：

• 可见菌斑指数（VPI）
• 牙龈炎症的患病率（刷牙后出血，BAB）
• 龋齿患病率（空洞病变和白斑病变）

次要结果指标：

• 上呼吸道或下呼吸道感染的次数
• 中耳炎数量
• 腹泻天数
• 看医生
• 抗生素处方
• 过敏、哮喘或湿疹的发生率

详细方法 可见菌斑指数 (VPI)：沿上切牙和尖牙牙龈边缘是否存在牙菌斑 刷牙后出血 (BAB)：用软牙刷轻柔刷牙后是否有出血 是否存在龋齿：有空洞和根据公共牙科服务的标准，非空洞性病变在所有牙齿中登记，并表示为 dmft 和 dmfs

次要终点每六个月通过给父母打电话并根据父母日志进行评分。

临床取样 为了在研究过程中监测两个研究组的口腔微生物群，根据 Barfod 和同事的说法，将在基线（干预前）以及 6 个月和 12 个月的随访中收集唾液样本 [ 9]. 在临床工作人员的监督下，父母将棉签放入孩子的口中。 浸泡后，花蕾会被转移到标有患者研究编号的小塑料管中，并立即冷冻保存。 试验完全完成后，所有样品将由制造商运往美国佛罗里达州 Oragenics 进行进一步处理和加工，费用由制造商承担。 临床采样的运行费用由单独的协议支付。

统计方法 所有数据均使用 IBM-SPSS 软件（19.0 版，芝加哥伊利诺伊州，美国）进行处理。 分类数据经过卡方检验。 将借助非参数测试计算连续测量值。 龋齿发生率计算为随访和基线之间 dmfs/dmft 的差异。 在基线时和随访时在研究组之间进行比较。 群体隐藏要经过统计计算后才能揭晓。 小于 0.05 的 p 值被认为具有统计学意义。

结果报告 无效假设将被拒绝或接受。 研究结果将毫不拖延地在国际大会上报告，并提交给适当的同行评审科学期刊发表。 供应商将有机会在提交前阅读手稿并发表评论。

伦理方面的考虑 在干预方面没有可预见的副作用或不利影响。 在项目期间和之后，所有患者均由牙医或经过专门培训的牙科保健员根据“最佳临床实践”进行管理。 龋齿的快速发展将通过非手术和手术治疗来管理，而与组别无关。 所有治疗都将免费进行，家属无需支付任何费用。 这些平板电脑是免费分发的。 与所提供治疗相关的所有不良事件都将记录在不良事件表中。 调查将根据赫尔辛基宣言关于涉及人类受试者的实验的原则进行。