评估健康志愿者单剂量 RoActemra/Actemra (Tocilizumab) 后中性粒细胞分布动力学和功能的药效学研究
2015年10月14日 更新者：Hoffmann-La Roche
评估健康受试者单剂量托珠单抗治疗后中性粒细胞分布动力学和功能的单盲 IV 期药效学研究
这项 IV 期、单盲、随机、双臂研究将探讨 RoActemra/Actemra（托珠单抗）对健康受试者中性粒细胞再分布、功能和生存的药效学影响。
受试者将在研究第 0 天接受单剂量静脉注射 (IV) RoActemra/Actemra，剂量为 8 mg/kg，超过一小时或安慰剂。
将收集所有受试者的中性粒细胞动力学数据，直到研究的第 10 天。
在第 10 天的最后一次研究访问之后，所有受试者将在第 28 天和第 56 天参加两次进一步的安全跟进访问。
研究概览
研究类型
介入性
注册 (实际的)
18
阶段
- 第四阶段
联系人和位置
本节提供了进行研究的人员的详细联系信息，以及有关进行该研究的地点的信息。
学习地点
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Cambridge、英国、CB2 0QQ
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参与标准
研究人员寻找符合特定描述的人，称为资格标准。这些标准的一些例子是一个人的一般健康状况或先前的治疗。
资格标准
适合学习的年龄
18年 至 65年 (成人、年长者)
接受健康志愿者
不
有资格学习的性别
男性
描述
纳入标准：
- 18岁至65岁男性
- 由筛选评估确定为健康
- 体重指数 (BMI) 18 至 30 kg/m2（含）
- 非吸烟者
- 必须同意在治疗期间和最后一剂研究药物后至少 150 天内使用辅以杀精子剂的屏障避孕方法
排除标准：
- 在给药前 3 个月内或至少 5 个半衰期（以较长者为准）参与试验药物的临床研究
- 当前或过去 6 个月内的吸烟史
- 在筛选前的过去 6 个月内曾接触过治疗性单克隆抗体
- 任何条件的当前或具有临床意义的病史，在研究者看来，将： 将受试者置于不适当的风险中；使知情同意无效；干扰 PK 或 PD 数据；或干扰受试者完成研究的能力
- 对人源化或鼠单克隆抗体有严重过敏或过敏反应史
- 任何反复感染；给药前 6 周内需要抗生素治疗的感染；给药前 6 个月内的单核细胞增多症；已知的 HIV、乙型肝炎或丙型肝炎；或筛选时的活动性感染
- 在过去 3 年内需要治疗的活动性结核病 (TB)。
- 有活动性恶性疾病的证据，过去10年内诊断出恶性肿瘤（已切除并治愈的皮肤基底细胞癌除外），或过去20年内诊断出乳腺癌
- 原发性或继发性免疫缺陷
- 自身免疫性疾病
- 使用或依赖滥用物质
- 酗酒或平均每周摄入量超过每天 2 个单位
- 筛查或基线静息心率 < 45 或 >90 次/分钟
- 筛选前 8 周内进行过大手术
- 给药前 3 个月内患有重大疾病
- 胆道梗阻
- 当前或过去的憩室炎病史
学习计划
本节提供研究计划的详细信息，包括研究的设计方式和研究的衡量标准。
研究是如何设计的？
设计细节
- 分配：随机化
- 介入模型：并行分配
- 屏蔽：单身的
武器和干预
参与者组/臂 |
干预/治疗 |
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安慰剂比较：安慰剂
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单次静脉注射输液
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实验性的：RoActemra/阿克泰姆拉
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单次 8 mg/kg i.v.输液
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研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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第 4 天的中性粒细胞再分布分析（中性粒细胞最低点）
大体时间：第四天
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在第 4 天，参与者从 100 毫升 (mL) 柠檬酸葡萄糖 (ACD) 抗凝自体静脉血中分离出中性粒细胞，并在自体血浆中用高达 2.5 兆贝克勒尔 (MBq) 111 铟 (111In)-托酚酸标记，然后再进行标记重新注入。
参与者在注射后休息 45 分钟 (min)，以允许循环和边缘嗜中性粒细胞池之间的嗜中性粒细胞平衡。
全身分析是在一个带有 2 个高灵敏度闪烁检测器的高度屏蔽的专用全身计数器中进行的，记录的计数针对 111In 的物理衰变进行了校正，以允许测量 TCZ 对中性粒细胞正常再分布模式的影响并评估在 TCZ 存在下嗜中性粒细胞的边缘化。
第 4 天（重新注射后 45 分钟）放射性标记的中性粒细胞在血液、肝脏/脾脏和骨盆骨髓中的分布，以占全身计数 (TBC) 的百分比表示。
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第四天
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第 5 天的中性粒细胞再分布分析
大体时间：第五天
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在第 4 天，参与者从 100 mL ACD 抗凝自体静脉血中分离出中性粒细胞，并在重新注射前用高达 2.5 MBq 111In-托酚酸标记。
参与者在注射后休息 45 分钟，以允许循环和边缘化嗜中性粒细胞池之间的嗜中性粒细胞平衡。
全身分析是在一个带有 2 个高灵敏度闪烁检测器的高度屏蔽的专用全身计数器中进行的，记录的计数针对 111In 的物理衰变进行了校正，以允许测量 TCZ 对中性粒细胞正常再分布模式的影响并评估在 TCZ 存在下嗜中性粒细胞的边缘化。
在第 5 天（再注射后 24 小时），肝脏/脾脏和骨盆骨髓中放射性标记的嗜中性粒细胞的分布和峰值计数被衰减校正并表示为第 4 天（再注射后 45 分钟）的百分比。
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第五天
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第 10 天的中性粒细胞再分布分析
大体时间：第 10 天
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在第 4 天，参与者从 100 mL ACD 抗凝自体静脉血中分离出中性粒细胞，并在重新注射前用高达 2.5 MBq 111In-托酚酸标记。
参与者在注射后休息 45 分钟，以允许循环和边缘化嗜中性粒细胞池之间的嗜中性粒细胞平衡。
全身分析是在一个带有 2 个高灵敏度闪烁检测器的高度屏蔽的专用全身计数器中进行的，记录的计数针对 111In 的物理衰变进行了校正，以允许测量 TCZ 对中性粒细胞正常再分布模式的影响并评估在 TCZ 存在下嗜中性粒细胞的边缘化。
在第 10 天（重新注射后 6 天），肝脏/脾脏和骨盆骨髓中放射性标记的嗜中性粒细胞的分布和峰值计数被衰减校正并表示为第 4 天（重新注射后 45 分钟）的百分比。
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第 10 天
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中性粒细胞吞噬作用：eFluor670 阳性 (eFluoro670+) 中性粒细胞百分比从基线到最低点（第 4 天）的变化
大体时间：基线，第 4 天
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使用用 eFluor670 标记的热灭活的肺炎链球菌 (S.pneumonia) 细菌，通过流式细胞术评估中性粒细胞吞噬作用。
通过测量来自含有吞噬细菌的嗜中性粒细胞的 eFluor670 荧光来量化吞噬作用。
仅使用嗜中性粒细胞 (PMN)、PMN 加肺炎链球菌在 4 摄氏度 (°)（以控制非特异性细菌粘附到 PMN 细胞表面）和 PMN 加肺炎链球菌在 37°C 下进行实验.
在第 4 天计算 eFluor670+ 中性粒细胞百分比相对于基线的变化。
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基线，第 4 天
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中性粒细胞吞噬作用：eFluor670+ 中性粒细胞的中值荧光强度 (MFI) 从基线到最低点（第 4 天）的变化
大体时间：基线，第 4 天
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使用标有 eFluor670 的热灭活肺炎球菌通过流式细胞术评估中性粒细胞吞噬作用。
通过测量来自含有吞噬细菌的嗜中性粒细胞的 eFluor670 荧光来量化吞噬作用。
实验仅使用嗜中性粒细胞 (PMN)、PMN 加肺炎链球菌在 4˚C（以控制非特异性细菌粘附到 PMN 细胞表面）和 PMN 加上肺炎链球菌在 37˚C。
在第 4 天计算 eFluor670+ MFI 相对于基线的变化。
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基线，第 4 天
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中性粒细胞呼吸爆发：通过化学发光（相对光单位 - 绝对值）测量的活性氧产生从基线到最低点（第 4 天）的变化
大体时间：基线，第 4 天
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中性粒细胞利用活性氧 (ROS) 产生呼吸爆发来杀死入侵的病原体。
当鲁米诺用作 ROS 的底物时，会产生化学反应，在甲酰基-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸 (fMLP) 刺激后，引发和未引发的中性粒细胞中产生光子发射（化学发光），这是可量化的。
fMLP 对呼吸爆发的刺激是通过活化中性粒细胞中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (NADPH) 氧化酶来介导的。
在启动的中性粒细胞中观察到最大 fMLP 反应，并且是中性粒细胞对致病性刺激物反应能力的离体测量。
在当前的实验中，嗜中性粒细胞被肿瘤坏死因子 α (TNFα) 引发。
在光度计上记录光发射。
报告了第 4 天 ROS 产生相对于基线的绝对变化。
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基线，第 4 天
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中性粒细胞存活率：通过显微形态学测量的凋亡中性粒细胞百分比从基线到最低值（第 4 天）的变化
大体时间：基线，第 4 天
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使用显微镜方法测量中性粒细胞凋亡，载玻片用 Diff-Quik（改良的 Wright Giemsa 染色）染色，并在放大 100 倍的油浸光学显微镜下检查形态。
中性粒细胞在离体培养时会发生细胞凋亡，这可以通过添加粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF) 或 TNFα 等试剂来延迟。
与存活的嗜中性粒细胞相比，凋亡的嗜中性粒细胞具有深色和固缩的细胞核特征。
报告了第 4 天通过显微镜测量的凋亡中性粒细胞百分比相对于基线的变化。
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基线，第 4 天
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中性粒细胞存活：流式细胞术测量的凋亡中性粒细胞百分比从基线到最低点的变化
大体时间：基线，第 4 天
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在细胞凋亡的早期阶段，衰老的中性粒细胞将磷脂酰丝氨酸从质膜的内层转移到外层。
由于膜联蛋白 V (AV) 结合暴露的磷脂酰丝氨酸的亲和力，可以测量这种易位。
碘化丙啶 (PI) 通常是膜不可渗透的，但当细胞质膜变得渗漏时，它会在细胞凋亡晚期进入细胞。
中性粒细胞在离体培养时会发生细胞凋亡，这可以通过添加粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF) 或 TNFα 等试剂来延迟。
使用异氰酸荧光素标记的重组人 AV (AV-FITC) 和 PI 染色通过流式细胞术评估细胞凋亡，并报告第 4 天通过流式细胞术测量的凋亡中性粒细胞百分比相对于基线的变化。
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基线，第 4 天
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中性粒细胞形态学：使用流式细胞术测量形状变化的中性粒细胞数量从基线到最低点的变化
大体时间：基线，第 4 天
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中性粒细胞形状变化是中性粒细胞对炎症部位作出反应并迁移到炎症部位的趋化能力的指标。
为测定中性粒细胞形状变化，新鲜（0 分钟对照）、磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 对照（30 分钟对照）和甲酰基-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸 (fMLP) 刺激的（30 分钟 fMLP）PMN（5 × 10^6 PMNs/毫升 [mL]) 用 CellFIX（用作贴壁细胞固定剂的有机溶剂）固定，90 微升 (μL) 转移到每个样品管中，加入冷 PBS 以停止进一步反应。
通过测量流式细胞仪上的前向散射 (FSC) 来评估形状变化。
报告了第 4 天形状改变的嗜中性粒细胞数量相对于基线的变化。
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基线，第 4 天
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中性粒细胞形态学：通过流式细胞术（FSC-高细胞）测量的具有形状变化的中性粒细胞百分比从基线到最低点（第 4 天）的变化
大体时间：基线，第 4 天
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中性粒细胞形状变化是中性粒细胞对炎症部位作出反应并迁移到炎症部位的趋化能力的指标。
为了测定中性粒细胞的形状变化，将新鲜（0 分钟对照）、PBS 对照（30 分钟对照）和 fMLP 刺激（30 分钟 fMLP）PMN（5 × 10^6 PMN/mL）用 CellFIX 固定，转移 90 μL到每个样品管中，加入冷 PBS 以停止进一步反应。
通过在流式细胞术上测量 FSC 来评估形状变化。
报告了第 4 天具有形状变化的嗜中性粒细胞百分比相对于基线的变化。
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基线，第 4 天
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中性粒细胞形态学：通过显微形态学测量的具有形状变化的中性粒细胞百分比从基线到最低点（第 4 天）的变化
大体时间：基线，第 4 天
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中性粒细胞形状变化是中性粒细胞对炎症部位作出反应并迁移到炎症部位的趋化能力的指标。
为了测定中性粒细胞的形状变化，将新鲜（0 分钟对照）、PBS 对照（30 分钟对照）和 fMLP 刺激（30 分钟 fMLP）PMN（5 × 10^6 PMN/mL）用 CellFIX 固定，转移 90 μL到每个样品管中，加入冷 PBS 以停止进一步反应。
通过显微镜评估形状变化，如果嗜中性粒细胞包含> 1个细胞表面气泡或不规则，则归类为形状改变，并且报告了在第4天具有形状变化的嗜中性粒细胞百分比相对于基线的变化。
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基线，第 4 天
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中性粒细胞粘附分子的绝对中值荧光强度
大体时间：第四天
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嗜中性粒细胞表面受体表达可用于表征嗜中性粒细胞的活化状态。
新鲜（0 分钟）、PBS 对照（30 分钟）和 fMLP 刺激的（30 分钟）PMN（5 × 10^6 PMN/mL）用 CellFIX 固定，并将 90 μL 转移到每个含有抗体混合物（2 μL 簇）的试管中分化 [CD] 11b-亮紫 (BV) 421、2 μL CD16-FITC、5 μL CD62L-别藻蓝蛋白 (APC) 和 5 μL CD162-藻红蛋白 [PE]) 或等量体积的同型对照混合物。
在冰上和黑暗中孵育 30 分钟后，加入冷 PBS 以停止进一步反应。
表面标记表达通过流式细胞术定量。
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第四天
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合作者和调查者
在这里您可以找到参与这项研究的人员和组织。
研究记录日期
这些日期跟踪向 ClinicalTrials.gov 提交研究记录和摘要结果的进度。研究记录和报告的结果由国家医学图书馆 (NLM) 审查，以确保它们在发布到公共网站之前符合特定的质量控制标准。
研究主要日期
学习开始
2014年5月1日
初级完成 (实际的)
2014年12月1日
研究完成 (实际的)
2014年12月1日
研究注册日期
首次提交
2013年11月18日
首先提交符合 QC 标准的
2013年11月18日
首次发布 (估计)
2013年11月25日
研究记录更新
最后更新发布 (估计)
2015年11月11日
上次提交的符合 QC 标准的更新
2015年10月14日
最后验证
2015年10月1日
更多信息
与本研究相关的术语
其他研究编号
- WA29049
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