Un estudio farmacodinámico para evaluar la función y la cinética de distribución de los neutrófilos después de una dosis única de RoActemra/Actemra (tocilizumab) en voluntarios sanos
14 de octubre de 2015 actualizado por: Hoffmann-La Roche
Un estudio farmacodinámico de fase IV ciego simple para evaluar la función y la cinética de distribución de los neutrófilos después del tratamiento con una dosis única de tocilizumab en sujetos sanos
Este estudio de fase IV, simple ciego, aleatorizado y de dos brazos explorará los efectos farmacodinámicos de RoActemra/Actemra (tocilizumab) sobre la redistribución, función y supervivencia de los neutrófilos en sujetos sanos.
Los sujetos recibirán una dosis única de RoActemra/Actemra por vía intravenosa (IV) a una dosis de 8 mg/kg durante una hora el Día 0 del estudio o un placebo.
Se recopilarán datos de cinética de neutrófilos para todos los sujetos hasta el día 10 del estudio.
Después de la última visita de estudio el día 10, todos los sujetos asistirán a otras dos visitas de seguimiento de seguridad el día 28 y el día 56.
Descripción general del estudio
Estado
Terminado
Condiciones
Intervención / Tratamiento
Tipo de estudio
Intervencionista
Inscripción (Actual)
18
Fase
- Fase 4
Contactos y Ubicaciones
Esta sección proporciona los datos de contacto de quienes realizan el estudio e información sobre dónde se lleva a cabo este estudio.
Ubicaciones de estudio
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Cambridge, Reino Unido, CB2 0QQ
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Criterios de participación
Los investigadores buscan personas que se ajusten a una determinada descripción, denominada criterio de elegibilidad. Algunos ejemplos de estos criterios son el estado de salud general de una persona o tratamientos previos.
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
18 años a 65 años (Adulto, Adulto Mayor)
Acepta Voluntarios Saludables
No
Géneros elegibles para el estudio
Masculino
Descripción
Criterios de inclusión:
- Varón de 18 a 65 años inclusive
- Saludable según lo determinado por las evaluaciones de detección
- Índice de masa corporal (IMC) 18 a 30 kg/m2 inclusive
- No fumador
- Debe aceptar usar un método anticonceptivo de barrera complementado con espermicida durante el período de tratamiento y durante al menos 150 días después de la última dosis del fármaco del estudio.
Criterio de exclusión:
- Participación en un estudio clínico con un fármaco en investigación dentro de los 3 meses o al menos 5 semividas (lo que sea más largo) antes de la dosificación
- Antecedentes actuales o pasados de tabaquismo en los últimos 6 meses
- Exposición previa a anticuerpos monoclonales terapéuticos en los últimos 6 meses antes de la selección
- Antecedentes actuales o clínicamente significativos de cualquier afección que, en opinión del investigador: coloque al sujeto en un riesgo indebido; invalidar el otorgamiento del consentimiento informado; interferir con los datos PK o PD; o interferir con la capacidad del sujeto para completar el estudio
- Antecedentes de reacciones alérgicas o anafilácticas graves a anticuerpos monoclonales humanizados o murinos
- Cualquier infección recurrente; infección que requiere tratamiento antibiótico en las 6 semanas previas a la dosificación; mononucleosis en los 6 meses anteriores a la dosificación; VIH, hepatitis B o hepatitis C conocidos; o infección activa en el momento de la selección
- Tuberculosis activa (TB) que requiere tratamiento en los 3 años anteriores.
- Evidencia de enfermedad maligna activa, neoplasias malignas diagnosticadas en los 10 años anteriores (excepto carcinoma de células basales de la piel que se extirpó y curó) o cáncer de mama diagnosticado en los 20 años anteriores
- Inmunodeficiencia primaria o secundaria
- Enfermedad autoinmune
- Uso o dependencia de sustancias de abuso
- Abuso de alcohol o ingesta semanal promedio superior a 2 unidades por día
- Frecuencia cardíaca en reposo inicial o de detección < 45 o > 90 latidos por minuto
- Cirugía mayor dentro de las 8 semanas anteriores a la selección
- Enfermedad grave en los 3 meses anteriores a la dosificación
- Obstrucción biliar
- Antecedentes actuales o pasados de diverticulitis.
Plan de estudios
Esta sección proporciona detalles del plan de estudio, incluido cómo está diseñado el estudio y qué mide el estudio.
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
- Asignación: Aleatorizado
- Modelo Intervencionista: Asignación paralela
- Enmascaramiento: Único
Armas e Intervenciones
Grupo de participantes/brazo |
Intervención / Tratamiento |
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Comparador de placebos: Placebo
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Solo i.v. infusión
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Experimental: RoActemra/Actemra
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Única 8 mg/kg i.v. infusión
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Análisis de redistribución de neutrófilos en el día 4 (nadir de neutrófilos)
Periodo de tiempo: Día 4
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En el Día 4, a los participantes se les aislaron neutrófilos de 100 mililitros (mL) de sangre venosa autóloga anticoagulada con ácido-citrato dextrosa (ACD) y se marcaron en plasma autólogo con hasta 2.5 megaBecquerel (MBq) 111 Indio (111In)-tropolonato antes de ser reinyectado
Los participantes descansaron durante 45 minutos (min) después de la inyección para permitir el equilibrio de neutrófilos entre los grupos de neutrófilos circulantes y marginales.
El perfil de cuerpo entero se realizó en un contador de cuerpo entero dedicado fuertemente blindado con 2 detectores de centelleo altamente sensibles con los conteos registrados corregidos por la descomposición física de 111In para permitir la medición del efecto de TCZ en el patrón de redistribución normal de neutrófilos y la evaluación de marginación de neutrófilos en presencia de TCZ.
Distribución de neutrófilos radiomarcados el día 4 (45 min después de la reinyección) en sangre, hígado/bazo y médula ósea pélvica, expresada como porcentaje del recuento corporal total (TBC).
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Día 4
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Análisis de redistribución de neutrófilos el día 5
Periodo de tiempo: Dia 5
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El día 4, se aislaron los neutrófilos de los participantes de 100 ml de sangre venosa autóloga anticoagulada con ACD y se marcaron con hasta 2,5 MBq de 111In-tropolonato antes de reinyectarlos.
Los participantes descansaron durante 45 minutos después de la inyección para permitir el equilibrio de neutrófilos entre los grupos de neutrófilos circulantes y marginales.
El perfil de cuerpo entero se realizó en un contador de cuerpo entero dedicado fuertemente blindado con 2 detectores de centelleo altamente sensibles con los conteos registrados corregidos por la descomposición física de 111In para permitir la medición del efecto de TCZ en el patrón de redistribución normal de neutrófilos y la evaluación de marginación de neutrófilos en presencia de TCZ.
La distribución de neutrófilos marcados radiactivamente y los recuentos máximos en el día 5 (24 horas después de la reinyección) en el hígado/bazo y la médula ósea pélvica se corrigieron y expresaron como porcentajes del día 4 (45 minutos después de la reinyección).
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Dia 5
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Análisis de redistribución de neutrófilos el día 10
Periodo de tiempo: Día 10
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El día 4, se aislaron los neutrófilos de los participantes de 100 ml de sangre venosa autóloga anticoagulada con ACD y se marcaron con hasta 2,5 MBq de 111In-tropolonato antes de reinyectarlos.
Los participantes descansaron durante 45 minutos después de la inyección para permitir el equilibrio de neutrófilos entre los grupos de neutrófilos circulantes y marginales.
El perfil de cuerpo entero se realizó en un contador de cuerpo entero dedicado fuertemente blindado con 2 detectores de centelleo altamente sensibles con los conteos registrados corregidos por la descomposición física de 111In para permitir la medición del efecto de TCZ en el patrón de redistribución normal de neutrófilos y la evaluación de marginación de neutrófilos en presencia de TCZ.
La distribución de neutrófilos radiomarcados y los recuentos máximos en el día 10 (6 días después de la reinyección) en el hígado/bazo y la médula ósea pélvica se corrigieron y expresaron como porcentajes del día 4 (45 minutos después de la reinyección).
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Día 10
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Fagocitosis de neutrófilos: cambio desde el inicio hasta el nadir (día 4) en el porcentaje de neutrófilos eFluor670-positivo (eFluoro670+)
Periodo de tiempo: Línea de base, día 4
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La fagocitosis de neutrófilos se evaluó mediante citometría de flujo utilizando bacterias de neumonía estafilocócica (S.pneumonia) muertas por calor marcadas con eFluor670.
La fagocitosis se cuantificó midiendo la fluorescencia de eFluor670 de neutrófilos que contenían bacterias fagocitadas.
Los experimentos se realizaron usando neutrófilos (PMN) únicamente, PMN más S. pneumoniae a 4 grados (˚) centígrados (C) (para controlar la adherencia bacteriana no específica a la superficie celular de PMN) y PMN más S. pneumoniae a 37 ˚C .
El cambio desde el inicio en el porcentaje de neutrófilos eFluor670+ se calculó el día 4.
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Línea de base, día 4
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Fagocitosis de neutrófilos: cambio desde el inicio hasta el nadir (día 4) en la intensidad de fluorescencia media (MFI) de los neutrófilos eFluor670+
Periodo de tiempo: Línea de base, día 4
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La fagocitosis de neutrófilos se evaluó mediante citometría de flujo utilizando bacterias de neumonía estafilocócica muertas por calor marcadas con eFluor670.
La fagocitosis se cuantificó midiendo la fluorescencia de eFluor670 de neutrófilos que contenían bacterias fagocitadas.
Los experimentos se realizaron usando neutrófilos (PMN) únicamente, PMN más S. pneumoniae a 4 °C (para controlar la adherencia bacteriana no específica a la superficie celular de PMN) y PMN más S. pneumoniae a 37 °C.
El cambio desde el inicio en el eFluor670+ MFI se calculó el día 4.
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Línea de base, día 4
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Explosión respiratoria de neutrófilos: cambio desde el inicio hasta el nadir (día 4) en la producción de especies reactivas de oxígeno según lo medido por quimioluminiscencia (unidades de luz relativas - absolutas)
Periodo de tiempo: Línea de base, día 4
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Los neutrófilos generan un estallido respiratorio utilizando especies reactivas de oxígeno (ROS) para matar a los patógenos invasores.
Cuando se usa luminol como sustrato para ROS, se produce una reacción química que da como resultado la emisión de fotones (quimioluminiscencia) en neutrófilos cebados y no cebados después de la estimulación con formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP) que es cuantificable.
La estimulación fMLP del estallido respiratorio está mediada por la activación de la nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADPH) oxidasa en neutrófilos cebados.
La respuesta máxima de fMLP se observa en neutrófilos cebados y es una medida ex vivo de la capacidad de los neutrófilos para responder a estímulos patógenos.
En los experimentos actuales, los neutrófilos se cebaron con factor de necrosis tumoral alfa (TNFα).
La emisión de luz se registró en un luminómetro.
Se informó el cambio absoluto desde el inicio en la producción de ROS en el día 4.
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Línea de base, día 4
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Supervivencia de neutrófilos: cambio desde el inicio hasta el nadir (día 4) en el porcentaje de neutrófilos apoptóticos medido por morfología microscópica
Periodo de tiempo: Línea de base, día 4
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La apoptosis de neutrófilos se midió utilizando el método de microscopía con portaobjetos teñidos con Diff-Quik (tinción de Wright Giemsa modificada) y la morfología se examinó bajo microscopía de luz de inmersión en aceite con un aumento de 100 veces.
Los neutrófilos experimentan constitutivamente apoptosis cuando se cultivan ex vivo, y esto se puede retrasar mediante la adición de agentes como el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) o TNFα.
Los neutrófilos apoptóticos se caracterizaron con núcleos oscuros y picnóticos en comparación con los neutrófilos viables.
Se informa el cambio desde el inicio en el porcentaje de neutrófilos apoptóticos en el día 4 medido por microscopía.
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Línea de base, día 4
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Supervivencia de neutrófilos: cambio desde el inicio hasta el nadir en el porcentaje de neutrófilos apoptóticos medidos por citometría de flujo
Periodo de tiempo: Línea de base, día 4
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Los neutrófilos envejecidos translocan la fosfatidilserina de la valva interna de la membrana plasmática a la valva externa durante las primeras etapas de la apoptosis.
Esta translocación se puede medir debido a la afinidad de la anexina V (AV) para unirse a la fosfatidilserina expuesta.
El yoduro de propidio (PI) normalmente es impermeable a la membrana, pero ingresa a las células en la apoptosis tardía cuando su membrana plasmática presenta fugas.
Los neutrófilos experimentan constitutivamente apoptosis cuando se cultivan ex vivo, y esto se puede retrasar mediante la adición de agentes como el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) o TNFα.
La apoptosis se evaluó mediante citometría de flujo con AV humano recombinante marcado con isocianato de fluoresceína (AV-FITC) y tinción con PI, y se informa el cambio desde el valor inicial en el porcentaje de neutrófilos apoptóticos en el día 4 medido mediante citometría de flujo.
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Línea de base, día 4
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Morfología de los neutrófilos: cambio desde el inicio hasta el nadir en el número de neutrófilos con cambio de forma medido mediante citometría de flujo
Periodo de tiempo: Línea de base, día 4
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El cambio de forma de los neutrófilos es un indicador de la capacidad quimiotáctica de los neutrófilos para responder y migrar a los sitios de inflamación.
Para la determinación del cambio de forma de los neutrófilos, PMN frescos (control de 0 min), solución salina tamponada con fosfato (PBS) (control de 30 min) y PMN estimulados con formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP) (fMLP de 30 min) (a 5 × 10^6 PMN/mililitro [mL]) se fijaron con CellFIX (disolvente orgánico utilizado como fijador para las células adherentes), se transfirieron 90 microlitros (μL) a cada tubo de muestra y se agregó PBS frío para detener la reacción adicional.
El cambio de forma se evaluó midiendo la dispersión frontal (FSC) en citometría de flujo.
Se informó el cambio desde el inicio en el número de neutrófilos con cambio de forma en el Día 4.
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Línea de base, día 4
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Morfología de los neutrófilos: cambio desde el inicio hasta el nadir (día 4) en el porcentaje de neutrófilos con cambio de forma medido por citometría de flujo (células altas en FSC)
Periodo de tiempo: Línea de base, día 4
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El cambio de forma de los neutrófilos es un indicador de la capacidad quimiotáctica de los neutrófilos para responder y migrar a los sitios de inflamación.
Para la determinación del cambio de forma de los neutrófilos, se fijaron PMN frescos (0 min control), PBS control (30 min control) y estimulados con fMLP (30 min fMLP) (a 5 × 10^6 PMNs/ml) con CellFIX, se transfirieron 90 μl a cada tubo de muestra y se añadió PBS frío para detener la reacción adicional.
El cambio de forma se evaluó midiendo FSC en citometría de flujo.
Se informó el cambio desde el inicio en el porcentaje de neutrófilos con cambio de forma en el Día 4.
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Línea de base, día 4
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Morfología de neutrófilos: cambio desde el inicio hasta el nadir (día 4) en el porcentaje de neutrófilos con cambio de forma medido por morfología microscópica
Periodo de tiempo: Línea de base, día 4
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El cambio de forma de los neutrófilos es un indicador de la capacidad quimiotáctica de los neutrófilos para responder y migrar a los sitios de inflamación.
Para la determinación del cambio de forma de los neutrófilos, se fijaron PMN frescos (0 min control), PBS control (30 min control) y estimulados con fMLP (30 min fMLP) (a 5 × 10^6 PMNs/ml) con CellFIX, se transfirieron 90 μl a cada tubo de muestra y se añadió PBS frío para detener la reacción adicional.
El cambio de forma se evaluó mediante microscopía con neutrófilos clasificados como con cambio de forma si contenían > 1 ampolla o irregularidad en la superficie celular y se informó el cambio desde el inicio en el porcentaje de neutrófilos con cambio de forma el día 4.
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Línea de base, día 4
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Intensidades de fluorescencia medias absolutas de moléculas de adhesión de neutrófilos
Periodo de tiempo: Día 4
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La expresión del receptor de superficie de neutrófilos puede usarse para caracterizar el estado de activación de los neutrófilos.
PMN frescos (0 min), control PBS (30 min) y estimulados con fMLP (30 min) (5 × 10^6 PMN/mL) se fijaron con CellFIX y se transfirieron 90 μL a cada tubo que contenía la mezcla de anticuerpos (grupo de 2 μL). de diferenciación [CD] 11b-violeta brillante (BV) 421, 2 μL CD16-FITC, 5 μL CD62L-aloficocianina (APC) y 5 μL CD162-ficoeritrina [PE]) o mezcla de control de isotipo de volúmenes equivalentes.
Después de 30 minutos de incubación en hielo y en la oscuridad, se añadió PBS frío para detener la reacción adicional.
Las expresiones de los marcadores de superficie se cuantificaron mediante citometría de flujo.
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Día 4
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Colaboradores e Investigadores
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Fechas de registro del estudio
Estas fechas rastrean el progreso del registro del estudio y los envíos de resultados resumidos a ClinicalTrials.gov. Los registros del estudio y los resultados informados son revisados por la Biblioteca Nacional de Medicina (NLM) para asegurarse de que cumplan con los estándares de control de calidad específicos antes de publicarlos en el sitio web público.
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio
1 de mayo de 2014
Finalización primaria (Actual)
1 de diciembre de 2014
Finalización del estudio (Actual)
1 de diciembre de 2014
Fechas de registro del estudio
Enviado por primera vez
18 de noviembre de 2013
Primero enviado que cumplió con los criterios de control de calidad
18 de noviembre de 2013
Publicado por primera vez (Estimar)
25 de noviembre de 2013
Actualizaciones de registros de estudio
Última actualización publicada (Estimar)
11 de noviembre de 2015
Última actualización enviada que cumplió con los criterios de control de calidad
14 de octubre de 2015
Última verificación
1 de octubre de 2015
Más información
Términos relacionados con este estudio
Otros números de identificación del estudio
- WA29049
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