Um estudo farmacodinâmico para avaliar a cinética e a função da distribuição de neutrófilos após dose única de RoActemra/Actemra (Tocilizumab) em voluntários saudáveis
14 de outubro de 2015 atualizado por: Hoffmann-La Roche
Um estudo farmacodinâmico de fase IV simples e cego para avaliar a cinética e a função da distribuição de neutrófilos após o tratamento de dose única com tocilizumabe em indivíduos saudáveis
Este estudo de Fase IV, simples-cego, randomizado, de dois braços explorará os efeitos farmacodinâmicos de RoActemra/Actemra (tocilizumabe) na redistribuição, função e sobrevivência de neutrófilos em indivíduos saudáveis.
Os indivíduos receberão uma dose única de RoActemra/Actemra intravenoso (IV) na dose de 8 mg/kg durante uma hora no Dia 0 do estudo ou placebo.
Os dados de cinética de neutrófilos serão coletados para todos os indivíduos até o dia 10 do estudo.
Após a última visita do estudo no dia 10, todos os indivíduos participarão de mais duas visitas de acompanhamento de segurança no dia 28 e no dia 56.
Visão geral do estudo
Status
Concluído
Condições
Intervenção / Tratamento
Tipo de estudo
Intervencional
Inscrição (Real)
18
Estágio
- Fase 4
Contactos e Locais
Esta seção fornece os detalhes de contato para aqueles que conduzem o estudo e informações sobre onde este estudo está sendo realizado.
Locais de estudo
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Cambridge, Reino Unido, CB2 0QQ
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Critérios de participação
Os pesquisadores procuram pessoas que se encaixem em uma determinada descrição, chamada de critérios de elegibilidade. Alguns exemplos desses critérios são a condição geral de saúde de uma pessoa ou tratamentos anteriores.
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
18 anos a 65 anos (Adulto, Adulto mais velho)
Aceita Voluntários Saudáveis
Não
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Macho
Descrição
Critério de inclusão:
- Homens com idade compreendida entre os 18 e os 65 anos inclusive
- Saudável conforme determinado por avaliações de triagem
- Índice de massa corporal (IMC) 18 a 30 kg/m2 inclusive
- Não fumante
- Deve concordar em usar um método anticoncepcional de barreira suplementado com espermicida durante o período de tratamento e por pelo menos 150 dias após a última dose do medicamento do estudo
Critério de exclusão:
- Participação em um estudo clínico com um medicamento experimental dentro de 3 meses ou pelo menos 5 meias-vidas (o que for mais longo) antes da dosagem
- História atual ou passada de tabagismo dentro de 6 meses
- Exposição prévia a anticorpos monoclonais terapêuticos nos últimos 6 meses antes da triagem
- Histórico atual ou clinicamente significativo de qualquer condição que, na opinião do investigador, poderia: colocar o sujeito em risco indevido; invalidar o consentimento informado; interferir com os dados PK ou PD; ou interferir na capacidade do sujeito de concluir o estudo
- História de reações alérgicas ou anafiláticas graves a anticorpos monoclonais humanizados ou murinos
- Qualquer infecção recorrente; infecção requerendo tratamento antibiótico nas 6 semanas anteriores à dosagem; mononucleose nos 6 meses anteriores à dosagem; HIV conhecido, Hepatite B ou Hepatite C; ou infecção ativa no momento da triagem
- Tuberculose ativa (TB) que requer tratamento nos últimos 3 anos.
- Evidência de doença maligna ativa, neoplasias diagnosticadas nos últimos 10 anos (exceto carcinoma basocelular da pele que foi excisado e curado) ou câncer de mama diagnosticado nos últimos 20 anos
- Imunodeficiência primária ou secundária
- Doença auto-imune
- Uso ou dependência de substância de abuso
- Abuso de álcool ou consumo semanal médio superior a 2 unidades por dia
- Triagem ou frequência cardíaca basal em repouso < 45 ou > 90 batimentos por minuto
- Grande cirurgia dentro de 8 semanas antes da triagem
- Doença grave nos 3 meses anteriores à administração
- obstrução biliar
- História atual ou passada de diverticulite
Plano de estudo
Esta seção fornece detalhes do plano de estudo, incluindo como o estudo é projetado e o que o estudo está medindo.
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Alocação: Randomizado
- Modelo Intervencional: Atribuição Paralela
- Mascaramento: Solteiro
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
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Comparador de Placebo: Placebo
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Único i.v. infusão
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Experimental: RoActemra/Actemra
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Único 8 mg/kg i.v. infusão
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Análise de redistribuição de neutrófilos no dia 4 (Nadir de neutrófilos)
Prazo: Dia 4
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No Dia 4, os participantes tiveram neutrófilos isolados de 100 mililitros (mL) de sangue venoso autólogo anti-coagulado ácido-citrato (ACD) e marcados em plasma autólogo com até 2,5 megaBecquerel (MBq) 111 Indium (111In)-tropolonate antes de serem reinjetado.
Os participantes descansaram por 45 minutos (min) após a injeção para permitir o equilíbrio dos neutrófilos entre os pools de neutrófilos circulantes e marginais.
O perfil de corpo inteiro foi realizado em um contador de corpo inteiro dedicado fortemente blindado com 2 detectores de cintilação altamente sensíveis com as contagens registradas corrigidas para o decaimento físico de 111In para permitir a medição do efeito de TCZ no padrão de redistribuição normal de neutrófilos e avaliação de marginação de neutrófilos na presença de TCZ.
Distribuição de neutrófilos marcados radioativamente no Dia 4 (45 min após a reinjeção) no sangue, fígado/baço e medula óssea pélvica, expressa como porcentagens de contagens corporais totais (TBCs).
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Dia 4
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Análise de redistribuição de neutrófilos no dia 5
Prazo: Dia 5
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No Dia 4, os participantes tiveram neutrófilos isolados de 100 mL de sangue venoso autólogo anti-coagulado com ACD e marcados com até 2,5 MBq de 111In-tropolonato antes de serem reinjetados.
Os participantes descansaram por 45 minutos após a injeção para permitir o equilíbrio dos neutrófilos entre os pools de neutrófilos circulantes e marginais.
O perfil de corpo inteiro foi realizado em um contador de corpo inteiro dedicado fortemente blindado com 2 detectores de cintilação altamente sensíveis com as contagens registradas corrigidas para o decaimento físico de 111In para permitir a medição do efeito de TCZ no padrão de redistribuição normal de neutrófilos e avaliação de marginação de neutrófilos na presença de TCZ.
A distribuição de neutrófilos radiomarcados e as contagens de pico, no Dia 5 (24 horas após a reinjeção) no fígado/baço e na medula óssea pélvica foram corrigidas e expressas como porcentagens do Dia 4 (45 minutos após a reinjeção).
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Dia 5
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Análise de redistribuição de neutrófilos no dia 10
Prazo: Dia 10
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No Dia 4, os participantes tiveram neutrófilos isolados de 100 mL de sangue venoso autólogo anti-coagulado com ACD e marcados com até 2,5 MBq de 111In-tropolonato antes de serem reinjetados.
Os participantes descansaram por 45 minutos após a injeção para permitir o equilíbrio dos neutrófilos entre os pools de neutrófilos circulantes e marginais.
O perfil de corpo inteiro foi realizado em um contador de corpo inteiro dedicado fortemente blindado com 2 detectores de cintilação altamente sensíveis com as contagens registradas corrigidas para o decaimento físico de 111In para permitir a medição do efeito de TCZ no padrão de redistribuição normal de neutrófilos e avaliação de marginação de neutrófilos na presença de TCZ.
A distribuição de neutrófilos radiomarcados e as contagens de pico, no Dia 10 (6 dias após a reinjeção) no fígado/baço e na medula óssea pélvica foram corrigidas e expressas como porcentagens do Dia 4 (45 minutos após a reinjeção).
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Dia 10
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Fagocitose de neutrófilos: mudança da linha de base para o nadir (dia 4) na porcentagem de neutrófilos positivos para eFluor670 (eFluoro670+)
Prazo: Linha de base, dia 4
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A fagocitose de neutrófilos foi avaliada por citometria de fluxo usando bactérias estafilocócicas mortas pelo calor (S.pneumonia) marcadas com eFluor670.
A fagocitose foi quantificada medindo a fluorescência eFluor670 de neutrófilos contendo bactérias fagocitadas.
Os experimentos foram realizados usando apenas neutrófilos (PMN), PMN mais S. pneumonia a 4 graus (˚) centígrados (C) (para controlar a adesão bacteriana não específica à superfície celular PMN) e PMN mais S. pneumonia a 37˚C .
A alteração da linha de base na porcentagem de neutrófilos eFluor670+ foi calculada no dia 4.
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Linha de base, dia 4
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Fagocitose de neutrófilos: mudança da linha de base para o nadir (dia 4) na intensidade de fluorescência mediana (MFI) de neutrófilos eFluor670+
Prazo: Linha de base, dia 4
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A fagocitose de neutrófilos foi avaliada por citometria de fluxo usando bactérias estafilocócicas mortas pelo calor marcadas com eFluor670.
A fagocitose foi quantificada medindo a fluorescência eFluor670 de neutrófilos contendo bactérias fagocitadas.
Os experimentos foram realizados usando apenas neutrófilos (PMN), PMN mais S. pneumonia a 4˚C (para controlar a adesão bacteriana não específica à superfície celular PMN) e PMN mais S. pneumonia a 37˚C.
A alteração da linha de base no eFluor670+ MFI foi calculada no dia 4.
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Linha de base, dia 4
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Explosão respiratória de neutrófilos: mudança da linha de base para o nadir (dia 4) na produção de espécies reativas de oxigênio conforme medido por quimioluminescência (unidades relativas de luz - absoluta)
Prazo: Linha de base, dia 4
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Os neutrófilos geram uma explosão respiratória usando espécies reativas de oxigênio (ROS) para matar patógenos invasores.
Quando o luminol é usado como substrato para ROS, uma reação química é produzida resultando em emissão de fótons (quimioluminescência) em neutrófilos com e sem priming após estimulação com formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP) que é quantificável.
A estimulação por fMLP da explosão respiratória é mediada pela ativação da nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADPH) oxidase em neutrófilos iniciados.
A resposta máxima de fMLP é observada em neutrófilos iniciados e é uma medida ex vivo da capacidade dos neutrófilos para responder a estímulos patogênicos.
Nos experimentos atuais, os neutrófilos foram preparados com fator de necrose tumoral alfa (TNFα).
A emissão de luz foi registrada em um luminômetro.
Mudança absoluta da linha de base na produção de ROS no dia 4 foi relatada.
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Linha de base, dia 4
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Sobrevivência de neutrófilos: mudança da linha de base para o nadir (dia 4) na porcentagem de neutrófilos apoptóticos conforme medido pela morfologia microscópica
Prazo: Linha de base, dia 4
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A apoptose de neutrófilos foi medida pelo método de microscopia com lâminas coradas com Diff-Quik (coloração de Wright Giemsa modificada) e a morfologia examinada sob microscopia de luz de imersão em óleo com aumento de 100 vezes.
Os neutrófilos sofrem apoptose constitutivamente quando cultivados ex vivo, e isso pode ser retardado pela adição de agentes como o fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF) ou TNFα.
Os neutrófilos apoptóticos foram caracterizados com núcleos escuros e picnóticos em comparação com os neutrófilos viáveis.
A alteração da linha de base na porcentagem de neutrófilos apoptóticos no Dia 4 medido por microscopia é relatada.
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Linha de base, dia 4
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Sobrevivência de neutrófilos: mudança da linha de base para o nadir na porcentagem de neutrófilos apoptóticos conforme medido por citometria de fluxo
Prazo: Linha de base, dia 4
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Os neutrófilos envelhecidos translocam a fosfatidilserina do folheto interno da membrana plasmática para o folheto externo durante os estágios iniciais da apoptose.
Esta translocação pode ser medida devido à afinidade da Anexina V (AV) para ligar a fosfatidilserina exposta.
O iodeto de propídio (PI) é normalmente impermeável à membrana, mas entra nas células no final da apoptose quando a membrana plasmática se torna permeável.
Os neutrófilos sofrem apoptose constitutivamente quando cultivados ex vivo, e isso pode ser retardado pela adição de agentes como o fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF) ou TNFα.
A apoptose foi avaliada por citometria de fluxo com AV humano recombinante marcado com isocianato de fluoresceína (AV-FITC) e coloração de PI e a alteração da linha de base na porcentagem de neutrófilos apoptóticos no Dia 4 medido por citometria de fluxo é relatada.
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Linha de base, dia 4
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Morfologia de neutrófilos: mudança da linha de base para nadir no número de neutrófilos com mudança de forma medida usando citometria de fluxo
Prazo: Linha de base, dia 4
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A alteração da forma dos neutrófilos é um indicador da capacidade quimiotática dos neutrófilos para responder e migrar para os locais de inflamação.
Para determinação da alteração da forma dos neutrófilos, PMNs frescos (controle de 0 min), solução salina tamponada com fosfato (PBS) (controle de 30 min) e formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP) (30 min fMLP) (a 5 × 10^6 PMNs/mililitro [mL]) foram fixados com CellFIX (solvente orgânico usado como fixador para células aderentes), 90 microlitros (μL) transferidos para cada tubo de amostra e PBS frio adicionado para parar a reação posterior.
A mudança de forma foi avaliada medindo a dispersão frontal (FSC) em citometria de fluxo.
Alteração desde a linha de base no número de neutrófilos com alteração de forma no Dia 4 foi relatada.
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Linha de base, dia 4
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Morfologia dos neutrófilos: mudança da linha de base para o nadir (dia 4) na porcentagem de neutrófilos com mudança de forma medida por citometria de fluxo (células FSC-High)
Prazo: Linha de base, dia 4
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A alteração da forma dos neutrófilos é um indicador da capacidade quimiotática dos neutrófilos para responder e migrar para os locais de inflamação.
Para determinação da mudança de forma dos neutrófilos, PMNs frescos (controle de 0 min), controle de PBS (controle de 30 min) e estimulados por fMLP (fMLP de 30 min) (a 5 × 10^6 PMNs/mL) foram fixados com CellFIX, 90 μL transferidos a cada tubo de amostra e PBS frio adicionado para interromper a reação.
A mudança de forma foi avaliada medindo FSC em citometria de fluxo.
Alteração da linha de base na porcentagem de neutrófilos com alteração de forma no dia 4 foi relatada.
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Linha de base, dia 4
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Morfologia dos neutrófilos: mudança da linha de base para o nadir (dia 4) na porcentagem de neutrófilos com mudança de forma medida por morfologia microscópica
Prazo: Linha de base, dia 4
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A alteração da forma dos neutrófilos é um indicador da capacidade quimiotática dos neutrófilos para responder e migrar para os locais de inflamação.
Para determinação da mudança de forma dos neutrófilos, PMNs frescos (controle de 0 min), controle de PBS (controle de 30 min) e estimulados por fMLP (fMLP de 30 min) (a 5 × 10^6 PMNs/mL) foram fixados com CellFIX, 90 μL transferidos a cada tubo de amostra e PBS frio adicionado para interromper a reação.
A alteração de forma foi avaliada por microscopia com neutrófilos classificados como com alteração de forma se contivessem > 1 bolha de superfície celular ou irregularidade e alteração da linha de base na porcentagem de neutrófilos com alteração de forma no Dia 4 foi relatada.
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Linha de base, dia 4
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Intensidades de Fluorescência Medianas Absolutas de Moléculas de Adesão de Neutrófilos
Prazo: Dia 4
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A expressão do receptor de superfície de neutrófilos pode ser usada para caracterizar o estado de ativação dos neutrófilos.
PMNs frescos (0 min), controle de PBS (30 min) e estimulados por fMLP (30 min) (5 × 10^6 PMNs/mL) foram fixados com CellFIX e 90 μL transferidos para cada tubo contendo mistura de anticorpos (cluster de 2 μL de diferenciação [CD] 11b-violeta brilhante (BV) 421, 2 μL CD16-FITC, 5 μL CD62L-aloficocianina (APC) e 5 μL CD162-ficoeritrina [PE]) ou mistura de controle de isotipo de volumes equivalentes.
Após 30 minutos de incubação em gelo e no escuro, PBS frio foi adicionado para interromper a reação.
As expressões dos marcadores de superfície foram quantificadas por citometria de fluxo.
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Dia 4
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Colaboradores e Investigadores
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Datas de registro do estudo
Essas datas acompanham o progresso do registro do estudo e os envios de resumo dos resultados para ClinicalTrials.gov. Os registros do estudo e os resultados relatados são revisados pela National Library of Medicine (NLM) para garantir que atendam aos padrões específicos de controle de qualidade antes de serem publicados no site público.
Datas Principais do Estudo
Início do estudo
1 de maio de 2014
Conclusão Primária (Real)
1 de dezembro de 2014
Conclusão do estudo (Real)
1 de dezembro de 2014
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
18 de novembro de 2013
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
18 de novembro de 2013
Primeira postagem (Estimativa)
25 de novembro de 2013
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Estimativa)
11 de novembro de 2015
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
14 de outubro de 2015
Última verificação
1 de outubro de 2015
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Outros números de identificação do estudo
- WA29049
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