Uno studio farmacodinamico per valutare la cinetica e la funzione della distribuzione dei neutrofili in seguito a dose singola di RoActemra/Actemra (Tocilizumab) in volontari sani
14 ottobre 2015 aggiornato da: Hoffmann-La Roche
Uno studio farmacodinamico di fase IV in singolo cieco per valutare la cinetica e la funzione della distribuzione dei neutrofili dopo il trattamento con tocilizumab a dose singola in soggetti sani
Questo studio di fase IV, in singolo cieco, randomizzato, a due bracci esplorerà gli effetti farmacodinamici di RoActemra/Actemra (tocilizumab) sulla ridistribuzione, funzione e sopravvivenza dei neutrofili in soggetti sani.
I soggetti riceveranno una dose singola di RoActemra/Actemra per via endovenosa (IV) alla dose di 8 mg/kg nell'arco di un'ora nel giorno 0 dello studio o placebo.
I dati sulla cinetica dei neutrofili saranno raccolti per tutti i soggetti fino al giorno 10 dello studio.
Dopo l'ultima visita di studio del giorno 10, tutti i soggetti parteciperanno a due ulteriori visite di follow-up sulla sicurezza il giorno 28 e il giorno 56.
Panoramica dello studio
Stato
Completato
Condizioni
Intervento / Trattamento
Tipo di studio
Interventistico
Iscrizione (Effettivo)
18
Fase
- Fase 4
Contatti e Sedi
Questa sezione fornisce i recapiti di coloro che conducono lo studio e informazioni su dove viene condotto lo studio.
Luoghi di studio
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Cambridge, Regno Unito, CB2 0QQ
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Criteri di partecipazione
I ricercatori cercano persone che corrispondano a una certa descrizione, chiamata criteri di ammissibilità. Alcuni esempi di questi criteri sono le condizioni generali di salute di una persona o trattamenti precedenti.
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Da 18 anni a 65 anni (Adulto, Adulto più anziano)
Accetta volontari sani
No
Sessi ammissibili allo studio
Maschio
Descrizione
Criterio di inclusione:
- Maschio di età compresa tra i 18 e i 65 anni compresi
- Sano come determinato dalle valutazioni di screening
- Indice di massa corporea (BMI) da 18 a 30 kg/m2 inclusi
- Non fumatore
- Deve accettare di utilizzare un metodo contraccettivo di barriera integrato con spermicida durante il periodo di trattamento e per almeno 150 giorni dopo l'ultima dose del farmaco in studio
Criteri di esclusione:
- Partecipazione a uno studio clinico con un farmaco sperimentale entro 3 mesi o almeno 5 emivite (qualunque sia la più lunga) prima della somministrazione
- Storia attuale o passata di fumo entro 6 mesi
- Precedente esposizione ad anticorpi monoclonali terapeutici negli ultimi 6 mesi prima dello screening
- Anamnesi attuale o clinicamente significativa di qualsiasi condizione che, secondo l'opinione dello sperimentatore, metterebbe il soggetto a rischio eccessivo; invalidare la prestazione del consenso informato; interferire con i dati PK o PD; o interferire con la capacità del soggetto di completare lo studio
- Anamnesi di gravi reazioni allergiche o anafilattiche ad anticorpi monoclonali umanizzati o murini
- Eventuali infezioni ricorrenti; infezione che richiede un trattamento antibiotico nelle 6 settimane precedenti la somministrazione; mononucleosi nei 6 mesi precedenti la somministrazione; HIV noto, epatite B o epatite C; o infezione attiva al momento dello screening
- Tubercolosi attiva (TBC) che richiede un trattamento nei 3 anni precedenti.
- Evidenza di malattia maligna attiva, tumori maligni diagnosticati nei 10 anni precedenti (ad eccezione del carcinoma basocellulare della pelle che è stato asportato e curato) o carcinoma mammario diagnosticato nei 20 anni precedenti
- Immunodeficienza primaria o secondaria
- Malattia autoimmune
- Uso o dipendenza da sostanze di abuso
- Abuso di alcol o assunzione settimanale media superiore a 2 unità al giorno
- Screening o frequenza cardiaca a riposo di base < 45 o > 90 battiti al minuto
- Chirurgia maggiore entro 8 settimane prima dello screening
- Malattia grave nei 3 mesi precedenti la somministrazione
- Ostruzione biliare
- Storia attuale o passata di diverticolite
Piano di studio
Questa sezione fornisce i dettagli del piano di studio, compreso il modo in cui lo studio è progettato e ciò che lo studio sta misurando.
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
- Assegnazione: Randomizzato
- Modello interventistico: Assegnazione parallela
- Mascheramento: Separare
Armi e interventi
Gruppo di partecipanti / Arm |
Intervento / Trattamento |
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Comparatore placebo: Placebo
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Singolo i.v. infusione
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Sperimentale: RoActemra/Actemra
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Singolo 8 mg/kg i.v. infusione
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Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Analisi della ridistribuzione dei neutrofili il giorno 4 (neutrofilo nadir)
Lasso di tempo: Giorno 4
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Il giorno 4 i partecipanti hanno isolato i neutrofili da 100 millilitri (mL) di sangue venoso autologo anti-coagulato acido-citrato destrosio (ACD) ed etichettati nel plasma autologo con fino a 2,5 megaBecquerel (MBq) 111 Indio (111In)-tropolonato prima di essere reiniettato.
I partecipanti hanno riposato per 45 minuti (min) dopo l'iniezione per consentire l'equilibrio dei neutrofili tra i pool di neutrofili circolanti e marginali.
La profilazione di tutto il corpo è stata eseguita in un contatore di tutto il corpo dedicato fortemente schermato con 2 rivelatori di scintillazione altamente sensibili con i conteggi registrati corretti per il decadimento fisico di 111In per consentire la misurazione dell'effetto di TCZ sul normale schema di ridistribuzione dei neutrofili e la valutazione di marginazione dei neutrofili in presenza di TCZ.
Distribuzione dei neutrofili radiomarcati al giorno 4 (45 minuti dopo la reiniezione) nel sangue, nel fegato/milza e nel midollo osseo pelvico, espressa come percentuale della conta corporea totale (TBC).
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Giorno 4
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Analisi della ridistribuzione dei neutrofili il giorno 5
Lasso di tempo: Giorno 5
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Il giorno 4 i partecipanti hanno isolato i neutrofili da 100 ml di sangue venoso autologo anti-coagulante ACD ed etichettati con un massimo di 2,5 MBq di 111In-tropolonato prima di essere iniettati nuovamente.
I partecipanti hanno riposato per 45 minuti dopo l'iniezione per consentire l'equilibrio dei neutrofili tra i pool di neutrofili circolanti e marginali.
La profilazione di tutto il corpo è stata eseguita in un contatore di tutto il corpo dedicato fortemente schermato con 2 rivelatori di scintillazione altamente sensibili con i conteggi registrati corretti per il decadimento fisico di 111In per consentire la misurazione dell'effetto di TCZ sul normale schema di ridistribuzione dei neutrofili e la valutazione di marginazione dei neutrofili in presenza di TCZ.
La distribuzione dei neutrofili radiomarcati e la conta dei picchi al giorno 5 (24 ore dopo la reiniezione) nel fegato/milza e nel midollo osseo pelvico sono stati corretti per il decadimento ed espressi come percentuali del giorno 4 (45 minuti dopo la reiniezione).
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Giorno 5
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Analisi della ridistribuzione dei neutrofili il giorno 10
Lasso di tempo: Giorno 10
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Il giorno 4 i partecipanti hanno isolato i neutrofili da 100 ml di sangue venoso autologo anti-coagulante ACD ed etichettati con un massimo di 2,5 MBq di 111In-tropolonato prima di essere iniettati nuovamente.
I partecipanti hanno riposato per 45 minuti dopo l'iniezione per consentire l'equilibrio dei neutrofili tra i pool di neutrofili circolanti e marginali.
La profilazione di tutto il corpo è stata eseguita in un contatore di tutto il corpo dedicato fortemente schermato con 2 rivelatori di scintillazione altamente sensibili con i conteggi registrati corretti per il decadimento fisico di 111In per consentire la misurazione dell'effetto di TCZ sul normale schema di ridistribuzione dei neutrofili e la valutazione di marginazione dei neutrofili in presenza di TCZ.
La distribuzione dei neutrofili radiomarcati e la conta dei picchi al giorno 10 (6 giorni dopo la reiniezione) nel fegato/milza e nel midollo osseo pelvico sono stati corretti per il decadimento ed espressi come percentuali del giorno 4 (45 minuti dopo la reiniezione).
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Giorno 10
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Fagocitosi dei neutrofili: variazione dal basale al nadir (giorno 4) nella percentuale di neutrofili positivi a eFluor670 (eFluoro670+)
Lasso di tempo: Linea di base, giorno 4
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La fagocitosi dei neutrofili è stata valutata mediante citometria a flusso utilizzando batteri di polmonite da stafilococco uccisi dal calore (S.pneumonia) etichettati con eFluor670.
La fagocitosi è stata quantificata misurando la fluorescenza eFluor670 da neutrofili contenenti batteri fagocitati.
Gli esperimenti sono stati eseguiti utilizzando solo neutrofili (PMN), PMN più S. pneumonia a 4 gradi (˚) centigradi (C) (per controllare l'adesione batterica non specifica alla superficie cellulare PMN) e PMN più S. pneumonia a 37°C .
La variazione rispetto al basale nella percentuale di neutrofili eFluor670+ è stata calcolata il giorno 4.
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Linea di base, giorno 4
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Fagocitosi dei neutrofili: variazione dal basale al nadir (giorno 4) nell'intensità di fluorescenza mediana (MFI) dei neutrofili eFluor670+
Lasso di tempo: Linea di base, giorno 4
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La fagocitosi dei neutrofili è stata valutata mediante citometria a flusso utilizzando batteri di polmonite da stafilococco uccisi dal calore etichettati con eFluor670.
La fagocitosi è stata quantificata misurando la fluorescenza eFluor670 da neutrofili contenenti batteri fagocitati.
Gli esperimenti sono stati eseguiti utilizzando solo neutrofili (PMN), PMN più S. pneumonia a 4˚C (per controllare l'adesione batterica non specifica alla superficie cellulare PMN) e PMN più S. pneumonia a 37˚C.
La variazione rispetto al basale nell'eFluor670+ MFI è stata calcolata il giorno 4.
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Linea di base, giorno 4
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Burst respiratorio dei neutrofili: cambiamento dal basale al nadir (giorno 4) nella produzione di specie reattive dell'ossigeno misurate dalla chemiluminescenza (unità di luce relative - assolute)
Lasso di tempo: Linea di base, giorno 4
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I neutrofili generano un'esplosione respiratoria utilizzando specie reattive dell'ossigeno (ROS) per uccidere i patogeni invasori.
Quando il luminolo viene utilizzato come substrato per ROS, viene prodotta una reazione chimica con conseguente emissione di fotoni (chemiluminescenza) in neutrofili innescati e non innescati a seguito della stimolazione formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP) che è quantificabile.
La stimolazione fMLP del burst respiratorio è mediata dall'attivazione della nicotinammide adenina dinucleotide fosfato (NADPH) ossidasi nei neutrofili innescati.
La massima risposta fMLP è osservata nei neutrofili innescati ed è una misura ex vivo della capacità dei neutrofili di rispondere agli stimoli patogeni.
Negli attuali esperimenti, i neutrofili sono stati innescati con il fattore di necrosi tumorale alfa (TNFα).
L'emissione di luce è stata registrata su un luminometro.
È stata segnalata la variazione assoluta rispetto al basale nella produzione di ROS al giorno 4.
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Linea di base, giorno 4
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Sopravvivenza dei neutrofili: variazione dal basale al nadir (giorno 4) nella percentuale di neutrofili apoptotici misurata dalla morfologia microscopica
Lasso di tempo: Linea di base, giorno 4
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L'apoptosi dei neutrofili è stata misurata utilizzando il metodo della microscopia con vetrini colorati con Diff-Quik (colorazione di Wright Giemsa modificata) e la morfologia esaminata al microscopio ottico ad immersione in olio con ingrandimento 100 volte.
I neutrofili subiscono costitutivamente l'apoptosi quando coltivati ex vivo, e questo può essere ritardato dall'aggiunta di agenti come il fattore stimolante le colonie di granulociti-macrofagi (GM-CSF) o TNFα.
I neutrofili apoptotici sono stati caratterizzati con nuclei scuri e picnotici rispetto ai neutrofili vitali.
Viene riportato il cambiamento rispetto al basale nella percentuale di neutrofili apoptotici al giorno 4 misurati mediante microscopia.
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Linea di base, giorno 4
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Sopravvivenza dei neutrofili: variazione dal basale al nadir nella percentuale di neutrofili apoptotici misurata mediante citometria a flusso
Lasso di tempo: Linea di base, giorno 4
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I neutrofili che invecchiano traslocano la fosfatidilserina dal foglietto interno della membrana plasmatica al foglietto esterno durante le prime fasi dell'apoptosi.
Questa traslocazione può essere misurata a causa dell'affinità dell'annessina V (AV) per legare la fosfatidilserina esposta.
Lo ioduro di propidio (PI) è normalmente impermeabile alla membrana ma entra nelle cellule nell'apoptosi tardiva quando la loro membrana plasmatica perde.
I neutrofili subiscono costitutivamente l'apoptosi quando coltivati ex vivo, e questo può essere ritardato dall'aggiunta di agenti come il fattore stimolante le colonie di granulociti-macrofagi (GM-CSF) o TNFα.
L'apoptosi è stata valutata mediante citometria a flusso con AV umana ricombinante marcata con isocianato di fluoresceina (AV-FITC) e colorazione PI e viene riportata la variazione rispetto al basale nella percentuale di neutrofili apoptotici al giorno 4 misurata mediante citometria a flusso.
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Linea di base, giorno 4
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Morfologia dei neutrofili: variazione dal basale al nadir nel numero di neutrofili con variazione di forma misurata mediante citometria a flusso
Lasso di tempo: Linea di base, giorno 4
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Il cambiamento di forma dei neutrofili è un indicatore della capacità chemiotattica dei neutrofili di rispondere e migrare verso i siti di infiammazione.
Per la determinazione del cambiamento di forma dei neutrofili, PMN freschi (controllo 0 min), soluzione salina tamponata con fosfato (controllo 30 min) e PMN stimolati con formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP) (30 min fMLP) (a 5 × 10^6 PMN/ millilitro [mL]) sono stati fissati con CellFIX (solvente organico utilizzato come fissativo per le cellule aderenti), 90 microlitri (μL) trasferiti in ciascuna provetta del campione e PBS freddo aggiunto per arrestare ulteriori reazioni.
Il cambiamento di forma è stato valutato misurando la dispersione in avanti (FSC) sulla citometria a flusso.
È stata segnalata la variazione rispetto al basale del numero di neutrofili con cambiamento di forma al giorno 4.
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Linea di base, giorno 4
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Morfologia dei neutrofili: variazione dal basale al nadir (giorno 4) nella percentuale di neutrofili con cambiamento di forma misurata mediante citometria a flusso (cellule alte FSC)
Lasso di tempo: Linea di base, giorno 4
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Il cambiamento di forma dei neutrofili è un indicatore della capacità chemiotattica dei neutrofili di rispondere e migrare verso i siti di infiammazione.
Per la determinazione del cambiamento di forma dei neutrofili, i PMN freschi (controllo 0 min), controllo PBS (controllo 30 min) e stimolati con fMLP (30 min fMLP) (a 5 × 10 ^ 6 PMN / mL) sono stati fissati con CellFIX, 90 μL trasferiti a ciascuna provetta del campione e aggiunta di PBS freddo per arrestare ulteriori reazioni.
Il cambiamento di forma è stato valutato misurando l'FSC sulla citometria a flusso.
È stata segnalata la variazione rispetto al basale della percentuale di neutrofili con cambiamento di forma al giorno 4.
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Linea di base, giorno 4
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Morfologia dei neutrofili: variazione dal basale al nadir (giorno 4) nella percentuale di neutrofili con cambiamento di forma misurata mediante morfologia microscopica
Lasso di tempo: Linea di base, giorno 4
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Il cambiamento di forma dei neutrofili è un indicatore della capacità chemiotattica dei neutrofili di rispondere e migrare verso i siti di infiammazione.
Per la determinazione del cambiamento di forma dei neutrofili, i PMN freschi (controllo 0 min), controllo PBS (controllo 30 min) e stimolati con fMLP (30 min fMLP) (a 5 × 10 ^ 6 PMN / mL) sono stati fissati con CellFIX, 90 μL trasferiti a ciascuna provetta del campione e aggiunta di PBS freddo per arrestare ulteriori reazioni.
Il cambiamento di forma è stato valutato mediante microscopia con neutrofili classificati come cambiati di forma se contenevano > 1 bleb o irregolarità della superficie cellulare ed è stata segnalata la variazione rispetto al basale della percentuale di neutrofili con cambiamento di forma al giorno 4.
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Linea di base, giorno 4
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Intensità di fluorescenza mediana assoluta delle molecole di adesione dei neutrofili
Lasso di tempo: Giorno 4
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L'espressione del recettore di superficie dei neutrofili può essere utilizzata per caratterizzare lo stato di attivazione dei neutrofili.
I PMN freschi (0 min), controllo PBS (30 min) e stimolati con fMLP (30 min) (5 × 10^6 PMN/mL) sono stati fissati con CellFIX e 90 μL trasferiti in ciascuna provetta contenente una miscela di anticorpi (2 μL di cluster di differenziazione [CD] 11b-violetto brillante (BV) 421, 2 μL di CD16-FITC, 5 μL di CD62L-allophycocyanin (APC) e 5 μL di CD162-ficoeritrina [PE]) o una miscela di controllo isotipico di volumi equivalenti.
Dopo 30 minuti di incubazione in ghiaccio e al buio, è stato aggiunto PBS freddo per arrestare l'ulteriore reazione.
Le espressioni dei marcatori di superficie sono state quantificate mediante citometria a flusso.
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Giorno 4
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Collaboratori e investigatori
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Studiare le date dei record
Queste date tengono traccia dell'avanzamento della registrazione dello studio e dell'invio dei risultati di sintesi a ClinicalTrials.gov. I record degli studi e i risultati riportati vengono esaminati dalla National Library of Medicine (NLM) per assicurarsi che soddisfino specifici standard di controllo della qualità prima di essere pubblicati sul sito Web pubblico.
Studia le date principali
Inizio studio
1 maggio 2014
Completamento primario (Effettivo)
1 dicembre 2014
Completamento dello studio (Effettivo)
1 dicembre 2014
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
18 novembre 2013
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
18 novembre 2013
Primo Inserito (Stima)
25 novembre 2013
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Stima)
11 novembre 2015
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
14 ottobre 2015
Ultimo verificato
1 ottobre 2015
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Altri numeri di identificazione dello studio
- WA29049
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