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Eine pharmakodynamische Studie zur Bewertung der Verteilungskinetik und -funktion von Neutrophilen nach Einzeldosis RoActemra/Actemra (Tocilizumab) bei gesunden Freiwilligen

14. Oktober 2015 aktualisiert von: Hoffmann-La Roche

Eine pharmakodynamische Einzelblindstudie der Phase IV zur Bewertung der Verteilungskinetik und -funktion von Neutrophilen nach einer Tocilizumab-Einzeldosisbehandlung bei gesunden Probanden

Diese einfach verblindete, randomisierte, zweiarmige Phase-IV-Studie untersucht die pharmakodynamischen Wirkungen von RoActemra/Actemra (Tocilizumab) auf die Umverteilung, Funktion und das Überleben von Neutrophilen bei gesunden Probanden. Die Probanden erhalten am Studientag 0 entweder eine intravenöse (i.v.) Einzeldosis RoActemra/Actemra in einer Dosis von 8 mg/kg über eine Stunde oder Placebo. Daten zur Neutrophilenkinetik werden für alle Probanden bis zum 10. Tag der Studie erhoben. Nach dem letzten Studienbesuch an Tag 10 nehmen alle Probanden an zwei weiteren Sicherheits-Follow-up-Besuchen an Tag 28 und Tag 56 teil.

Studienübersicht

Status

Abgeschlossen

Bedingungen

Intervention / Behandlung

Studientyp

Interventionell

Einschreibung (Tatsächlich)

18

Phase

  • Phase 4

Kontakte und Standorte

Dieser Abschnitt enthält die Kontaktdaten derjenigen, die die Studie durchführen, und Informationen darüber, wo diese Studie durchgeführt wird.

Studienorte

Teilnahmekriterien

Forscher suchen nach Personen, die einer bestimmten Beschreibung entsprechen, die als Auswahlkriterien bezeichnet werden. Einige Beispiele für diese Kriterien sind der allgemeine Gesundheitszustand einer Person oder frühere Behandlungen.

Zulassungskriterien

Studienberechtigtes Alter

18 Jahre bis 65 Jahre (Erwachsene, Älterer Erwachsener)

Akzeptiert gesunde Freiwillige

Nein

Studienberechtigte Geschlechter

Männlich

Beschreibung

Einschlusskriterien:

  • Männlich im Alter zwischen 18 und 65 Jahren einschließlich
  • Gesund, wie durch Screening-Bewertungen festgestellt
  • Body-Mass-Index (BMI) 18 bis 30 kg/m2 inklusive
  • Nichtraucher
  • Muss zustimmen, während des Behandlungszeitraums und mindestens 150 Tage nach der letzten Dosis des Studienmedikaments eine mit Spermizid ergänzte Barrieremethode zur Empfängnisverhütung anzuwenden

Ausschlusskriterien:

  • Teilnahme an einer klinischen Studie mit einem Prüfpräparat innerhalb von 3 Monaten oder mindestens 5 Halbwertszeiten (je nachdem, was länger ist) vor der Dosierung
  • Aktuelles oder vergangenes Rauchen innerhalb von 6 Monaten
  • Vorherige Exposition gegenüber therapeutischen monoklonalen Antikörpern in den letzten 6 Monaten vor dem Screening
  • Aktuelle oder klinisch signifikante Vorgeschichte eines Zustands, der nach Meinung des Prüfarztes: den Probanden einem unangemessenen Risiko aussetzen würde; die Einwilligung nach Aufklärung ungültig machen; PK- oder PD-Daten stören; oder die Fähigkeit des Probanden beeinträchtigen, die Studie abzuschließen
  • Vorgeschichte schwerer allergischer oder anaphylaktischer Reaktionen auf humanisierte oder murine monoklonale Antikörper
  • Alle wiederkehrenden Infektionen; Infektion, die eine antibiotische Behandlung in den 6 Wochen vor der Verabreichung erfordert; Mononukleose in den 6 Monaten vor der Verabreichung; bekanntes HIV, Hepatitis B oder Hepatitis C; oder aktive Infektion zum Zeitpunkt des Screenings
  • Aktive Tuberkulose (TB), die innerhalb der letzten 3 Jahre behandelt werden musste.
  • Nachweis einer aktiven bösartigen Erkrankung, bösartige Erkrankungen, die innerhalb der letzten 10 Jahre diagnostiziert wurden (außer Basalzellkarzinom der Haut, das exzidiert und geheilt wurde) oder Brustkrebs, der innerhalb der letzten 20 Jahre diagnostiziert wurde
  • Primäre oder sekundäre Immunschwäche
  • Autoimmunerkrankung
  • Gebrauch oder Abhängigkeit von Missbrauchssubstanzen
  • Alkoholmissbrauch oder durchschnittliche wöchentliche Einnahme von mehr als 2 Einheiten pro Tag
  • Screening oder Grundlinien-Ruheherzfrequenz < 45 oder > 90 Schläge pro Minute
  • Größere Operation innerhalb von 8 Wochen vor dem Screening
  • Schwere Krankheit in den 3 Monaten vor der Einnahme
  • Gallenobstruktion
  • Aktuelle oder vergangene Divertikulitis

Studienplan

Dieser Abschnitt enthält Einzelheiten zum Studienplan, einschließlich des Studiendesigns und der Messung der Studieninhalte.

Wie ist die Studie aufgebaut?

Designdetails

  • Zuteilung: Zufällig
  • Interventionsmodell: Parallele Zuordnung
  • Maskierung: Single

Waffen und Interventionen

Teilnehmergruppe / Arm
Intervention / Behandlung
Placebo-Komparator: Placebo
Arzneimittel: Placebo
Single i.v. Infusion
Experimental: RoActemra/Actemra
Arzneimittel: Tocilizumab [RoActemra/Actemra]
Einzeln 8 mg/kg i.v. Infusion

Was misst die Studie?

Primäre Ergebnismessungen

Ergebnis Maßnahme
Maßnahmenbeschreibung
Zeitfenster
Neutrophilen-Umverteilungsanalyse an Tag 4 (Neutrophilen-Nadir)
Zeitfenster: Tag 4
An Tag 4 wurden den Teilnehmern Neutrophile aus 100 Millilitern (ml) Säure-Citrat-Dextrose (ACD)-antikoaguliertem autologem venösem Blut isoliert und in autologem Plasma mit bis zu 2,5 MegaBecquerel (MBq) 111 Indium (111 In)-Tropolonat markiert, bevor sie behandelt wurden reinjiziert. Die Teilnehmer ruhten 45 Minuten (min) nach der Injektion, um ein Neutrophilen-Gleichgewicht zwischen den zirkulierenden und den angrenzenden Neutrophilen-Pools zu ermöglichen. Ganzkörper-Profiling wurde in einem stark abgeschirmten speziellen Ganzkörperzähler mit 2 hochempfindlichen Szintillationsdetektoren durchgeführt, wobei die aufgezeichneten Zählungen um den physikalischen Zerfall von 111In korrigiert wurden, um die Messung der Wirkung von TCZ auf das normale Umverteilungsmuster von Neutrophilen und die Bewertung von zu ermöglichen Marginierung von Neutrophilen in Gegenwart von TCZ. Verteilung radioaktiv markierter Neutrophiler an Tag 4 (45 Minuten nach der Re-Injektion) in Blut, Leber/Milz und Beckenknochenmark, ausgedrückt als Prozentsatz der Gesamtkörperzahl (TBCs).
Tag 4
Neutrophilen-Umverteilungsanalyse an Tag 5
Zeitfenster: Tag 5
An Tag 4 wurden den Teilnehmern Neutrophile aus 100 ml ACD-antikoaguliertem autologem venösem Blut isoliert und mit bis zu 2,5 MBq 111In-Tropolonat markiert, bevor sie erneut injiziert wurden. Die Teilnehmer ruhten 45 Minuten nach der Injektion, um ein Neutrophilen-Gleichgewicht zwischen den zirkulierenden und den angrenzenden Neutrophilen-Pools zu ermöglichen. Ganzkörper-Profiling wurde in einem stark abgeschirmten speziellen Ganzkörperzähler mit 2 hochempfindlichen Szintillationsdetektoren durchgeführt, wobei die aufgezeichneten Zählungen um den physikalischen Zerfall von 111In korrigiert wurden, um die Messung der Wirkung von TCZ auf das normale Umverteilungsmuster von Neutrophilen und die Bewertung von zu ermöglichen Marginierung von Neutrophilen in Gegenwart von TCZ. Die Verteilung der radioaktiv markierten Neutrophilen und die Spitzenwerte an Tag 5 (24 Stunden nach der Re-Injektion) in Leber/Milz und Beckenknochenmark wurden zerfallskorrigiert und als Prozentsätze von Tag 4 (45 Minuten nach der Re-Injektion) ausgedrückt.
Tag 5
Neutrophilen-Umverteilungsanalyse an Tag 10
Zeitfenster: Tag 10
An Tag 4 wurden den Teilnehmern Neutrophile aus 100 ml ACD-antikoaguliertem autologem venösem Blut isoliert und mit bis zu 2,5 MBq 111In-Tropolonat markiert, bevor sie erneut injiziert wurden. Die Teilnehmer ruhten 45 Minuten nach der Injektion, um ein Neutrophilen-Gleichgewicht zwischen den zirkulierenden und den angrenzenden Neutrophilen-Pools zu ermöglichen. Ganzkörper-Profiling wurde in einem stark abgeschirmten speziellen Ganzkörperzähler mit 2 hochempfindlichen Szintillationsdetektoren durchgeführt, wobei die aufgezeichneten Zählungen um den physikalischen Zerfall von 111In korrigiert wurden, um die Messung der Wirkung von TCZ auf das normale Umverteilungsmuster von Neutrophilen und die Bewertung von zu ermöglichen Marginierung von Neutrophilen in Gegenwart von TCZ. Die Verteilung der radioaktiv markierten Neutrophilen und die Spitzenwerte an Tag 10 (6 Tage nach der Re-Injektion) in Leber/Milz und Beckenknochenmark wurden zerfallskorrigiert und als Prozentsätze von Tag 4 (45 Minuten nach der Re-Injektion) ausgedrückt.
Tag 10
Neutrophilen-Phagozytose: Veränderung vom Ausgangswert zum Nadir (Tag 4) im Prozentsatz der eFluor670-positiven (eFluoro670+) Neutrophilen
Zeitfenster: Ausgangslage, Tag 4
Die Phagozytose von Neutrophilen wurde durch Durchflusszytometrie unter Verwendung von durch Hitze abgetöteten Staphylokokken-Pneumonie (S. pneumonia)-Bakterien, die mit eFluor670 markiert waren, bewertet. Die Phagozytose wurde durch Messung der eFluor670-Fluoreszenz von Neutrophilen, die phagozytierte Bakterien enthielten, quantifiziert. Die Experimente wurden nur unter Verwendung von Neutrophilen (PMN), PMN plus S. pneumoniae bei 4 Grad (˚) Celsius (C) (um die unspezifische bakterielle Anhaftung an die PMN-Zelloberfläche zu kontrollieren) und PMN plus S. pneumoniae bei 37 °C durchgeführt . Die Veränderung des Prozentsatzes der eFluor670+-Neutrophilen gegenüber dem Ausgangswert wurde an Tag 4 berechnet.
Ausgangslage, Tag 4
Neutrophilen-Phagozytose: Veränderung der mittleren Fluoreszenzintensität (MFI) von eFluor670+ Neutrophilen von der Baseline zum Nadir (Tag 4).
Zeitfenster: Ausgangslage, Tag 4
Die Phagozytose von Neutrophilen wurde durch Durchflusszytometrie unter Verwendung von durch Hitze abgetöteten Staphylokokken-Pneumonie-Bakterien, die mit eFluor670 markiert waren, bewertet. Die Phagozytose wurde durch Messung der eFluor670-Fluoreszenz von Neutrophilen, die phagozytierte Bakterien enthielten, quantifiziert. Die Experimente wurden nur unter Verwendung von Neutrophilen (PMN), PMN plus S. pneumoniae bei 4 °C (um die unspezifische bakterielle Anhaftung an die PMN-Zelloberfläche zu kontrollieren) und PMN plus S. pneumoniae bei 37 °C durchgeführt. Die Veränderung gegenüber dem Ausgangswert des eFluor670+ MFI wurde an Tag 4 berechnet.
Ausgangslage, Tag 4
Neutrophiler Atemausbruch: Veränderung von der Grundlinie zum Nadir (Tag 4) in der Produktion reaktiver Sauerstoffspezies, gemessen durch Chemilumineszenz (relative Lichteinheiten - absolut)
Zeitfenster: Ausgangslage, Tag 4
Neutrophile erzeugen einen respiratorischen Burst, indem sie reaktive Sauerstoffspezies (ROS) verwenden, um eindringende Krankheitserreger abzutöten. Wenn Luminol als Substrat für ROS verwendet wird, wird eine chemische Reaktion erzeugt, die zu einer Photonenemission (Chemilumineszenz) in geprimten und nicht geprimten Neutrophilen nach Formyl-Methionyl-Leucyl-Phenylalanin (fMLP)-Stimulation führt, die quantifizierbar ist. Die fMLP-Stimulation des respiratorischen Burst wird durch die Aktivierung von Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid-Phosphat (NADPH)-Oxidase in geprimten Neutrophilen vermittelt. Die maximale fMLP-Antwort wird in geprimten Neutrophilen beobachtet und ist ein Ex-vivo-Maß für die Fähigkeit von Neutrophilen, auf pathogene Stimuli zu reagieren. In den aktuellen Experimenten wurden Neutrophile mit Tumornekrosefaktor alpha (TNFα) geprimt. Die Lichtemission wurde auf einem Luminometer aufgezeichnet. Es wurde eine absolute Veränderung gegenüber dem Ausgangswert in der Produktion von ROS an Tag 4 berichtet.
Ausgangslage, Tag 4
Überleben der Neutrophilen: Veränderung von der Grundlinie zum Nadir (Tag 4) im Prozentsatz der apoptotischen Neutrophilen, gemessen durch mikroskopische Morphologie
Zeitfenster: Ausgangslage, Tag 4
Die Apoptose von Neutrophilen wurde unter Verwendung eines Mikroskopieverfahrens mit Objektträgern gemessen, die mit Diff-Quik (modifizierte Wright-Giemsa-Färbung) gefärbt waren, und die Morphologie wurde unter Ölimmersions-Lichtmikroskopie mit 100-facher Vergrößerung untersucht. Neutrophile unterliegen konstitutiv einer Apoptose, wenn sie ex vivo kultiviert werden, und dies kann durch die Zugabe von Mitteln wie Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor (GM-CSF) oder TNFα verzögert werden. Apoptotische Neutrophile waren im Vergleich zu den lebensfähigen Neutrophilen durch dunkle und pyknotische Kerne gekennzeichnet. Die mikroskopisch gemessene Veränderung des Prozentsatzes an apoptotischen Neutrophilen gegenüber dem Ausgangswert an Tag 4 wird berichtet.
Ausgangslage, Tag 4
Überleben von Neutrophilen: Veränderung von der Grundlinie zum Nadir im Prozentsatz apoptotischer Neutrophiler, gemessen durch Durchflusszytometrie
Zeitfenster: Ausgangslage, Tag 4
Alternde Neutrophile verlagern Phosphatidylserin während der frühen Stadien der Apoptose vom inneren Blatt der Plasmamembran zum äußeren Blatt. Diese Translokation kann aufgrund der Affinität von Annexin V (AV) gemessen werden, exponiertes Phosphatidylserin zu binden. Propidiumiodid (PI) ist normalerweise membranundurchlässig, dringt jedoch in der späten Apoptose in die Zellen ein, wenn ihre Plasmamembran undicht wird. Neutrophile unterliegen konstitutiv einer Apoptose, wenn sie ex vivo kultiviert werden, und dies kann durch die Zugabe von Mitteln wie Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor (GM-CSF) oder TNFα verzögert werden. Die Apoptose wurde durch Durchflusszytometrie mit Fluorescein-Isocyanat-markiertem rekombinantem humanem AV (AV-FITC) und PI-Färbung beurteilt, und die Veränderung des Prozentsatzes an apoptotischen Neutrophilen gegenüber dem Ausgangswert an Tag 4, gemessen durch Durchflusszytometrie, wird berichtet.
Ausgangslage, Tag 4
Neutrophilen-Morphologie: Änderung von der Grundlinie zum Nadir in der Anzahl der Neutrophilen mit Formänderung, gemessen unter Verwendung von Durchflusszytometrie
Zeitfenster: Ausgangslage, Tag 4
Die Formänderung von Neutrophilen ist ein Indikator für die chemotaktische Fähigkeit von Neutrophilen, auf Entzündungsstellen zu reagieren und dorthin zu wandern. Zur Bestimmung der Formänderung von Neutrophilen wurden frische (0 min Kontrolle), phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) Kontrolle (30 min Kontrolle) und Formyl-Methionyl-Leucyl-Phenylalanin (fMLP)-stimulierte (30 min fMLP) PMNs (bei 5 × 10^6 PMNs/ml [ml]) wurden mit CellFIX (organisches Lösungsmittel, das als Fixiermittel für adhärente Zellen verwendet wird) fixiert, 90 Mikroliter (μl) in jedes Probenröhrchen überführt und kaltes PBS hinzugefügt, um die weitere Reaktion zu stoppen. Die Formänderung wurde durch Messen der Vorwärtsstreuung (FSC) mittels Durchflusszytometrie bewertet. Es wurde eine Veränderung gegenüber dem Ausgangswert in der Anzahl der Neutrophilen mit Formveränderung an Tag 4 berichtet.
Ausgangslage, Tag 4
Neutrophilen-Morphologie: Veränderung vom Ausgangswert zum Nadir (Tag 4) im Prozentsatz der Neutrophilen mit Formänderung, gemessen durch Durchflusszytometrie (FSC-hohe Zellen)
Zeitfenster: Ausgangslage, Tag 4
Die Formänderung von Neutrophilen ist ein Indikator für die chemotaktische Fähigkeit von Neutrophilen, auf Entzündungsstellen zu reagieren und dorthin zu wandern. Zur Bestimmung der Formänderung von Neutrophilen wurden frische (0 min Kontrolle), PBS-Kontrolle (30 min Kontrolle) und fMLP-stimulierte (30 min fMLP) PMNs (bei 5 × 10^6 PMNs/ml) mit CellFIX fixiert, 90 μl übertragen zu jedem Probenröhrchen gegeben und kaltes PBS hinzugefügt, um die weitere Reaktion zu stoppen. Die Formänderung wurde durch Messen von FSC mittels Durchflusszytometrie bewertet. Es wurde eine Änderung gegenüber dem Ausgangswert im Prozentsatz der Neutrophilen mit Formänderung an Tag 4 berichtet.
Ausgangslage, Tag 4
Neutrophilen-Morphologie: Veränderung von der Grundlinie zum Nadir (Tag 4) im Prozentsatz der Neutrophilen mit Formänderung, gemessen durch mikroskopische Morphologie
Zeitfenster: Ausgangslage, Tag 4
Die Formänderung von Neutrophilen ist ein Indikator für die chemotaktische Fähigkeit von Neutrophilen, auf Entzündungsstellen zu reagieren und dorthin zu wandern. Zur Bestimmung der Formänderung von Neutrophilen wurden frische (0 min Kontrolle), PBS-Kontrolle (30 min Kontrolle) und fMLP-stimulierte (30 min fMLP) PMNs (bei 5 × 10^6 PMNs/ml) mit CellFIX fixiert, 90 μl übertragen zu jedem Probenröhrchen gegeben und kaltes PBS hinzugefügt, um die weitere Reaktion zu stoppen. Die Formveränderung wurde durch Mikroskopie beurteilt, wobei Neutrophile als formverändert klassifiziert wurden, wenn sie > 1 Zelloberflächenblase oder Unregelmäßigkeit enthielten, und eine Veränderung gegenüber dem Ausgangswert in Prozent der Neutrophilen mit Formveränderung an Tag 4 wurde berichtet.
Ausgangslage, Tag 4
Absolute Median-Fluoreszenzintensitäten von Neutrophilen-Adhäsionsmolekülen
Zeitfenster: Tag 4
Die Expression des Oberflächenrezeptors von Neutrophilen kann verwendet werden, um den Aktivierungsstatus von Neutrophilen zu charakterisieren. Frische (0 min), PBS-Kontrolle (30 min) und fMLP-stimulierte (30 min) PMNs (5 × 10^6 PMNs/ml) wurden mit CellFIX fixiert und 90 μl in jedes Röhrchen mit Antikörpermischung (2 μl Cluster der Differenzierung [CD] 11b-Brillantviolett (BV) 421, 2 μL CD16-FITC, 5 μL CD62L-Allophycocyanin (APC) und 5 μL CD162-Phycoerythrin [PE]) oder Isotyp-Kontrollmischung in äquivalenten Volumina. Nach 30-minütiger Inkubation auf Eis und im Dunkeln wurde kaltes PBS zugegeben, um die weitere Reaktion zu stoppen. Oberflächenmarker-Expressionen wurden durch Durchflusszytometrie quantifiziert.
Tag 4

Mitarbeiter und Ermittler

Hier finden Sie Personen und Organisationen, die an dieser Studie beteiligt sind.

Sponsor

Hoffmann-La Roche

Studienaufzeichnungsdaten

Diese Daten verfolgen den Fortschritt der Übermittlung von Studienaufzeichnungen und zusammenfassenden Ergebnissen an ClinicalTrials.gov. Studienaufzeichnungen und gemeldete Ergebnisse werden von der National Library of Medicine (NLM) überprüft, um sicherzustellen, dass sie bestimmten Qualitätskontrollstandards entsprechen, bevor sie auf der öffentlichen Website veröffentlicht werden.

Haupttermine studieren

Studienbeginn

1. Mai 2014

Primärer Abschluss (Tatsächlich)

1. Dezember 2014

Studienabschluss (Tatsächlich)

1. Dezember 2014

Studienanmeldedaten

Zuerst eingereicht

18. November 2013

Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat

18. November 2013

Zuerst gepostet (Schätzen)

25. November 2013

Studienaufzeichnungsaktualisierungen

Letztes Update gepostet (Schätzen)

11. November 2015

Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt

14. Oktober 2015

Zuletzt verifiziert

1. Oktober 2015

Mehr Informationen

Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie

Andere Studien-ID-Nummern

  • WA29049

Diese Informationen wurden ohne Änderungen direkt von der Website clinicaltrials.gov abgerufen. Wenn Sie Ihre Studiendaten ändern, entfernen oder aktualisieren möchten, wenden Sie sich bitte an register@clinicaltrials.gov. Sobald eine Änderung auf clinicaltrials.gov implementiert wird, wird diese automatisch auch auf unserer Website aktualisiert .

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