通过抗血小板作用确定乙酰水杨酸化学预防作用的生化标志物研究
这项针对健康志愿者的研究是开发合作研究计划的第一步，该计划旨在检验乙酰水杨酸 (ASA) 对结肠癌的化学预防作用主要是由于其抗血小板作用这一假设。
临床证据的以下特征与血小板介导的假设一致：
- 在对心血管和腺瘤复发的随机临床试验的长期分析以及在不同环境和采用不同方法进行的绝大多数观察性研究中发现，每天一次给予低剂量 ASA 的化学预防效果明显饱和。 每天一次给予低剂量 ASA 的心脏保护作用非常相似的饱和性可以解释为血小板中环氧合酶 (COX)-1 失活的不可逆性质，以及人血小板从头合成蛋白质的能力有限。
- 鉴于 ASA 在人体循环中的半衰期较短（大约 20 分钟）和有核细胞重新合成乙酰化 COX 同工酶的能力，有核靶点似乎不太可能在整个 24 小时给药期间被抑制间隔。
- 其中一项心血管随机临床试验（血栓形成预防试验）在长期随访中检测到 ASA 的化学预防作用，涉及使用全身生物利用度可忽略不计的 ASA 控释制剂（75 毫克）。
- 结直肠癌患者和家族性腺瘤性息肉病患者体内的血小板活化和血栓烷 (TX)A2 生成增强。
因此，本研究的主要目的是评估第 1 次和第 7 次低剂量肠溶 ASA 100 mg 每日剂量后血小板 COX-1 丝氨酸 529 乙酰化的程度。 这种新的 ASA 作用生物标志物的变化将与 ASA PK 和 PD 的其他已知参数相关联：i) 口服给药后外周循环中 ASA 和水杨酸盐的 Tmax、Cmax 和 AUC； ii) 通过测量离体全血中血小板 COX-1 活性的抑制、离体全血中血小板聚集的抑制和对TXB2 的系统生成。
研究概览
详细说明
这项研究将在健康受试者中进行，在禁食条件下进行，它将允许获得有关低剂量肠溶 ASA 的药代动力学 (PK) 和药效学 (PD) 的更多信息，并表征变异性（变异系数） )，ASA 作用的新型生物标志物的准确度和精确度，即使用稳定同位素稀释液相色谱多反应监测/质谱 (LC-MS) 技术量化 COX-1 丝氨酸 529 乙酰化程度。 然后，该生物标志物将用于目标人群的另一项临床研究，即 FAP 患者接受低剂量 ASA 治疗，该治疗将由 Angel Lanas 教授（西班牙萨拉戈萨大学）进行。
在医院和实验室人员中招募 24 名健康志愿者将被纳入并接受 ASA（每天 100 毫克肠溶片，Adiro）治疗 1 周。
将在基线（治疗前）和第一次和最后一次 ASA 剂量后 0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、10、12 和 24 小时收集血样，以评估抑制血清 TXB2，作为血小板 COX-1 活性的指标，ASA 和水杨酸盐的血浆水平以及循环血小板中 COX-1 乙酰化的程度。 此外，研究人员将评估 PFA-100 系统对全血中血小板聚集的抑制程度。 还将收集 24 小时尿液样本以测量 11-脱氢-TXB2 (TX-M)，这是体内系统性 TXA2 生物合成的指标。
健康受试者将在禁食条件下每天服用 ASA，并在入组前至少 2 周内停止使用 ASA 和其他 NSAID。
所有志愿者都将参加大学医院 Lozano Blesa 的临床研究部门。
研究类型
注册 (实际的)
阶段
- 阶段1
联系人和位置
学习地点
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Zaragoza、西班牙、50009
- Hospital Clínico Universitario Lozano Blesa
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参与标准
资格标准
适合学习的年龄
接受健康志愿者
有资格学习的性别
描述
纳入标准：
- 男性和女性，年龄≥18岁且≤45岁。
- 没有潜在的 ASA 禁忌症。
- 未改变的病史和体格检查。
- 血液学和生化实验室参数不变。
- 血液学参数符合现行献血规则。
- 尿妊娠试验阴性。
- HIV、乙型和丙型肝炎、酒精摄入和药物滥用的血清学阴性。
排除标准：
- 活跃的吸烟者。
- 凝血障碍。
- 对 ASA 或任何其他 NSAID 过敏。
- 任何胃肠道疾病史。
- 孕妇
学习计划
研究是如何设计的？
设计细节
- 主要用途：预防
- 分配：不适用
- 介入模型：单组作业
- 屏蔽：无（打开标签）
武器和干预
参与者组/臂 |
干预/治疗 |
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实验性的：乙酰水杨酸
每天口服一片 Adiro 100 mg，持续 7 天。
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每天口服一片 Adiro 100 mg，持续 7 天。
其他名称：
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研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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评估 1 周内血小板 COX-1 丝氨酸 529 乙酰化程度
大体时间：在第 1 次给药前 3 天以及第 1 次和第 7 次肠溶阿司匹林日剂量后 0.5、2、4、8 和 24 小时，将采集血样以评估： - 血小板 COX-1 乙酰化 - 血清 TXB2 水平- 全血聚集
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为了分析COX-1，从每名受试者中提取外周血样本（3ml），然后将其完全分成等份的1ml血液并立即转移到玻璃管中，在37℃下凝固60分钟。 通过离心（3000 rpm 10 分钟）分离血清并储存在 - 70 °C 直至分析血小板 COX-1 丝氨酸 529 位乙酰化程度。 该变量将允许确定患者体内 COX-1 的初始活性水平，以便在低剂量 ASA 产生乙酰化程度后进行比较。 |
在第 1 次给药前 3 天以及第 1 次和第 7 次肠溶阿司匹林日剂量后 0.5、2、4、8 和 24 小时，将采集血样以评估： - 血小板 COX-1 乙酰化 - 血清 TXB2 水平- 全血聚集
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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1 周内循环血小板中定量乙酰化 COX-1 相对于基线的变化
大体时间：第 1 剂前 3 天以及第 1 剂和第 7 剂阿司匹林后 0.5、2、4、8 和 24 小时，将采集血样以评估： - 血小板 COX-1 乙酰化 - 血清 TXB2 水平 - 全血聚集
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它将使用液相色谱与质谱 (LC-MS/MS) 相结合的技术来量化接受 ASA 治疗的受试者循环血小板中 COX-1 的乙酰化水平。
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第 1 剂前 3 天以及第 1 剂和第 7 剂阿司匹林后 0.5、2、4、8 和 24 小时，将采集血样以评估： - 血小板 COX-1 乙酰化 - 血清 TXB2 水平 - 全血聚集
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1 周内 11-脱氢-TXB2 (TX-M) 尿液水平相对于基线的变化
大体时间：在第 1 剂阿司匹林给药前 1 天和第 6 次阿司匹林给药后，所有受试者将进行 24 小时尿液收集。
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将 40 mL 尿液的等分试样储存并保持在-70°C，直到评估 TX-M 的尿液水平，这将用尿肌酐值进行校正。
该变量将使我们能够测量低剂量 ASA 对 TX 全身水平的抑制程度，比较以 100 mg/天的剂量施用 ASA 后的抑制程度。
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在第 1 剂阿司匹林给药前 1 天和第 6 次阿司匹林给药后，所有受试者将进行 24 小时尿液收集。
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1 周内全血血小板聚集相对于基线的变化
大体时间：第 1 剂前 3 天以及第 1 剂和第 7 剂阿司匹林后 0.5、2、4、8 和 24 小时，将采集血样以评估： - 血小板 COX-1 乙酰化 - 血清 TXB2 水平 - 全血聚集
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通过 Platelet Function Analyzer-100 系统 (PFA-100) 研究全血 (2ml) 中的血小板聚集。
我们打算使用这种技术评估 100 毫克/天剂量的 ASA 在离体血小板聚集中产生的抑制程度，更准确地模拟血流中存在的条件。
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第 1 剂前 3 天以及第 1 剂和第 7 剂阿司匹林后 0.5、2、4、8 和 24 小时，将采集血样以评估： - 血小板 COX-1 乙酰化 - 血清 TXB2 水平 - 全血聚集
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1 周内阿司匹林和水杨酸盐血浆水平相对于基线的变化。
大体时间：在第 1 天和第 7 天，在给药前（基线）和给药后 0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、10、12 和 24 小时，所有受试者将进行血样采集评估： - 阿司匹林和水杨酸盐的血浆水平。
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将在施用 100 mg/天的 ASA 后的时间点收集血样 (7 mL)。
管将在 4°C 下以 3200rpm 离心 10 分钟并收集血浆。
收集后立即将 500 ul 血浆等分试样进行层析，并在-70°C 下冷冻保存直至使用。
将 200 uL 等分试样与 20 uL 内标溶液混合。
通过在涡流混合和以 3000 rpm 离心 10 分钟的帮助下添加乙腈/DMSO 来澄清样品。
澄清的上清液将与沉淀物分离，并使用 LC-MS/MS 技术进行分析。
该技术允许在研究的不同时间准确查看 ASA 和水杨酸盐的血浆水平，以了解 AAS 的代谢模式以及有关 Tmax、Cmax 和 AUC ASA 水杨酸盐的有用信息。
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在第 1 天和第 7 天，在给药前（基线）和给药后 0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、10、12 和 24 小时，所有受试者将进行血样采集评估： - 阿司匹林和水杨酸盐的血浆水平。
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合作者和调查者
调查人员
- 首席研究员：Angel Lanas, Physician、Digestive disease service of Hospital Clinico Lozano Blesa
研究记录日期
研究主要日期
学习开始
初级完成 (实际的)
研究完成 (实际的)
研究注册日期
首次提交
首先提交符合 QC 标准的
首次发布 (估计)
研究记录更新
最后更新发布 (估计)
上次提交的符合 QC 标准的更新
最后验证
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