用微生物成分和草花粉开发人类鼻腔挑战模型

研究设计和方法

该研究涉及 3 个部分，对受试者进行不同的鼻腔喷雾挑战：

1. 细菌或病毒成分，包括特定患者的以下之一；

   1. MPLA（单磷酰脂 A）类似于细菌脂多糖
   2. PolyIC（聚肌苷酸和胞苷酸）：病毒成分
   3. PolyICLC（用聚赖氨酸稳定的 polyIC）：病毒成分
   4. Resiquimod：病毒模拟物
2. 结核菌素：部分纯化的蛋白质衍生物 (PPD) 来自牛分枝杆菌，它是导致结核病的细菌。
3. 过敏原：鼻腔喷雾挑战剂是梯牧草花粉。

招聘

目标是招募总共 174 名受试者。 受试者将通过报纸广告、校园海报、全科医生服务、圣玛丽医院的门诊诊所（包括圣玛丽医院的结核病诊所）来确定。 我们将获得完全知情同意。 所有数据都将按照 GCP 和当地信息治理指南进行管理。

受试者数量和剂量

第 1 部分：使用 MPLA、polyIC、polyICLC 和 resiquimod 对微生物成分进行鼻腔递增剂量挑战。 这分为A部分和B部分。

第 1A 部分 (n=32)：基于耐受性和 SAM 的递增剂量研究。 4 个队列，每组 8 名健康志愿者（8 名志愿者中的 4 名对草花粉、屋尘螨过敏或有花粉症史）。 每种微生物成分一组。 每个队列将接受鼻腔盐水控制挑战和三个递增剂量的鼻腔微生物成分挑战：

• 100μl 生理盐水中含有 10μg 微生物成分
• 100μl 生理盐水中含有 100μg 微生物成分
• 100μl 生理盐水中含有 500μg 微生物成分

第 1B 部分（n=64）：使用额外的特殊取样探针 (SSP) 和刮除术的单次顶部剂量，最多 16 名健康志愿者的单组（16 名对草花粉、屋尘螨过敏、花粉热病史的 8 名）。 在建立耐受性和 SAM 反应后，每个受试者都给予盐水控制和单一最高剂量。

RESIQUIMOD：

B 部分将看到每个鼻孔 10 微克被给予 36 名志愿者：

12 名过敏性哮喘患者 12 名特应性志愿者 12 名非特应性志愿者

第 2 部分：结核菌素经鼻递增剂量激发。 这分为A部分和B部分。

第 2A 部分（n=16）：这包括总共 16 名潜伏性结核病（LTB）受试者，根据所施用的结核菌素的剂量，该组被细分为 4 组，每组 4 名受试者；

• 100μl 中 0.1 TU，n = 4
• 1.0 TU in 100μl，n = 4
• 100μl 中 2.0 TU，n = 4
• 5.0 TU in 100μl，n = 4 每个队列只有 1 个挑战。 起始剂量非常低，只有 0.1 TU。 如果耐受性良好，受试者将继续接受下一个更高剂量的 1.0 TU。 如果这也能很好地耐受，则受试者将继续服用下一个更高剂量的 2.0 TU，然后再服用该组中最高剂量的 5.0 TU，以确保受试者始终安全。

第 2B 部分（N=16）：额外取样的最高剂量。 这包括两组 16 人（8 名健康志愿者和 8 名潜伏性结核病受试者）。

第 1 组：潜伏性结核病受试者，编号。人 = 8 该组将接受最高剂量 (5-10.0 TU) 的结核菌素挑战。 在每组的 8 名受试者中，2 名将接受安慰剂（生理盐水模拟喷雾），其余 6 名将接受结核菌素喷雾挑战。

第 2 组：健康志愿者，没有。人 = 8 该组还将接受最高剂量 (5-10.0 TU) 的结核菌素挑战，受耐受性影响。 在 8 名受试者中，2 名将接受安慰剂（生理盐水模拟喷雾），其余 6 名将接受结核菌素喷雾挑战

第 3 部分 (n=46)：用梯牧草花粉进行鼻部过敏原挑战

最初应研究 30 人：一组 12 人患有花粉症，一组 12 人患有哮喘并伴有草花粉过敏，一组 6 人不过敏且没有哮喘。 在另一组中，16 名花粉热患者应在鼻腔喷雾挑战后使用特殊采样探头 (SSP) 连续采集表面鼻腔内液样本进行研究。

1. 第 1 组：花粉症患者，n = 12
2. 第 2 组：过敏性哮喘患者，n = 12
3. 第 3 组：健康的非特应性人群，n = 6
4. 附加第 4 组：花粉症患者，n=16

研究中的鼻腔手术

1. 洗鼻（洗鼻）：在一天开始时，将通过将少量盐水（生理盐水）液体注入鼻子来进行鼻腔清洗。 此程序在其他清理鼻子的程序之前执行。 从鼻洗液中获得的液体被丢弃并且不被分析。
2. 鼻内衬液吸收（鼻吸或 SAM）：一小条看起来和感觉都像软薄纸的吸收材料，用于吸收鼻孔内表面的水分。 将特制吸水纸置于鼻孔内，静置2分钟，吸收鼻粘膜液后取出，像吸水纸一样轻轻吸出。 将纸放入鼻子会发痒，并导致您的眼睛流泪。 然而，鼻吸不会造成伤害，而且我们的方法已被证明在婴儿、儿童和成人中具有良好的耐受性。 纸吸收鼻液，鼻细胞产生的许多物质可以从纸中提取并在实验室进行测量。
3. 鼻刮（鼻刮除术或 Rhinoprobe）：将一个小的无菌一次性塑料探针插入鼻子并轻轻按压鼻孔的内表面衬里。 3 英寸长的探头末端有一个小勺子，几乎看不到。 每个鼻孔的 24 个微小样本（针头，2 毫米组织）将从鼻子的神经供应减少的部分取出，以限制任何不适。 服用该样本不会引起出血，但可能会引起一些轻微的不适，并可能使眼睛轻微流泪。 探头将从鼻孔表面收集鼻腔细胞，然后将其送去分析。 这种方法已经在许多成人、儿童和婴儿身上进行过，并且耐受性非常好。
4. 特殊采样探头 (SSP)：也可以使用特殊采样探头或 SSP 收集鼻腔表面衬里液，该采样探头或 SSP 使用电喷雾将液滴从鼻腔衬里液中弹开。 这将通过从单个鼻孔连续采样几个小时来完成。 当在人的鼻子中使用这种特殊的采样探头 (SSP) 时，在采集样本时会有轻微的发痒感。 这几乎不能被注意到。

统计分析

数据的分布将通过 ShapiroWilks 检验进行评估，该检验确定数据是否具有正态（参数）或非正态（非参数）分布。

正常数据将以图形方式显示为：

• 算术平均值和平均值的标准误差 (SEM)
• 或带有 SD 的方法
• 或具有置信区间 (CI) 的方法

非正态数据将以图形方式显示为：

盒须：中位数、四分位数、范围

对于非正常数据，将在每个时间点测量活性攻击剂（不同剂量）和安慰剂与基线的差异，并计算 AUC。 计算 AUC 与安慰剂（活性安慰剂）的差异，并使用非参数 Wilcoxon 符号秩检验（单一人群）检验显着性。 曲线下面积 (AUC) 应根据鼻腔挑战剂在不同的规定时间内使用。