Vývoj modelů lidských nosních výzev s mikrobiálními složkami a travním pylem

NÁVRH A METODIKA STUDIA

Studie zahrnuje 3 části s různými provokačními dávkami nosního spreje, které jsou podávány subjektům:

1. Bakteriální nebo virové složky, zahrnující jednu z následujících u konkrétního pacienta;

   1. MPLA (monofosforyl lipid A) připomíná bakteriální lipopolysacharid
   2. PolyIC (kyseliny polyinosinové a cytidylové): virová složka
   3. PolyICLC (polyIC stabilizovaný polyLlysinem): virová složka
   4. Resiquimod: virové napodobeniny
2. Tuberkulin: částečně purifikovaný proteinový derivát (PPD) z Mycobacterium bovis, bakterie způsobující TBC.
3. Alergen: Nosním sprejem je pyl trávy Timothy.

NÁBOR

Cílem je získat celkem 174 subjektů. Subjekty budou identifikovány prostřednictvím inzerátů v novinách, plakátů v kampusu, služeb praktických lékařů, ambulantních klinik v nemocnici St. Mary's, včetně klinik pro TBC v nemocnici St. Mary's Hospital. Získáme plně informovaný souhlas. Všechna data budou spravována podle zásad GCP a místních pokynů pro správu informací.

POČET PŘEDMĚTŮ A DÁVKOVÁNÍ

ČÁST 1: Nazální stimulace vzestupnou dávkou mikrobiálních složek pomocí MPLA, polyIC, polyICLC a resiquimodu. Toto je rozděleno na část A a část B.

ČÁST 1A (n=32): Studie přírůstkové stoupající dávky na základě snášenlivosti a SAM. 4 kohorty 8 zdravých dobrovolníků (4 z 8 s alergií na pyl trav, roztoče v domácím prachu nebo anamnézu senné rýmy). Jedna kohorta pro každou mikrobiální složku. Každá kohorta dostane kontrolní výzvu nazálním fyziologickým roztokem a tři vzestupné dávky nazální mikrobiální složky:

• 10 μg mikrobiální složky ve 100 μl fyziologického roztoku
• 100 μg mikrobiální složky ve 100 μl fyziologického roztoku
• 500 μg mikrobiální složky ve 100 μl fyziologického roztoku

ČÁST 1B (n=64): Jedna nejvyšší dávka s dodatečnou speciální odběrovou sondou (SSP) a kyretáží, jediná kohorta až 16 zdravých dobrovolníků (8 ze 16 alergií na travní pyl, roztoče z domácího prachu, anamnézu senné rýmy). Každý subjekt dostal kontrolu fyziologickým roztokem a jednu nejvyšší dávku po stanovení snášenlivosti a odpovědi SAM.

RESIQUIMOD:

V části B bude podáno 10 μg na nosní dírku 36 dobrovolníkům:

12 alergických astmatiků 12 atopických dobrovolníků 12 neatopických dobrovolníků

ČÁST 2: Nosní provokační dávka tuberkulinu. Toto je rozděleno na část A a část B.

ČÁST 2A (n=16): To zahrnuje celkem 16 subjektů s latentní TBC (LTB). Tato skupina je rozdělena do 4 kohort po 4 subjektech podle dávky podávaného tuberkulinu;

• 0,1 TU ve 100 μl, n = 4
• 1,0 TU ve 100 μl, n = 4
• 2,0 TU ve 100 μl, n = 4
• 5,0 TU ve 100 μl, n = 4 Každá kohorta má pouze 1 výzvu. Počáteční dávka je velmi nízká na 0,1 TU. Pokud je dobře tolerován, subjekt přejde k další vyšší dávce 1,0 TU. Pokud je i toto dobře tolerováno, subjekt postoupí k další vyšší dávce 2,0 TU a poté k nejvyšší dávce 5,0 TU v této skupině zajišťující bezpečnost subjektů po celou dobu.

ČÁST 2B (N=16): Horní dávka s dodatečným odběrem vzorků. To zahrnuje 16 lidí ve dvou skupinách (8 zdravých dobrovolníků a 8 subjektů s latentní TBC).

Skupina 1: Subjekt latentní TBC, ne. lidí = 8 Tato skupina dostane nejvyšší dávku (5-10,0 TU) tuberkulinové čelenže. Z 8 subjektů v každé skupině dostanou 2 placebo (sprej s fyziologickým roztokem) a zbývajícím 6 bude podán tuberkulínový sprej.

Skupina 2: Zdraví dobrovolníci, ne. lidí = 8 Tato skupina také dostane nejvyšší dávku (5-10,0 TU) tuberkulinové čelenže, s výhradou snášenlivosti. Z 8 subjektů dostanou 2 placebo (figurální sprej s fyziologickým roztokem) a zbývajících 6 dostanou provokační dávku tuberkulinového spreje.

ČÁST 3 (n=46): Nosní alergenová výzva s pylem trávy Timothy

Nejprve bude studováno 30 lidí: jedna skupina 12 lidí má sennou rýmu, jedna skupina 12 lidí má astma s alergií na travní pyl a skupina 6 lidí je nealergická a nemá astma. V další skupině bude 16 osob se sennou rýmou studováno odběrem kontinuálních vzorků tekutiny z povrchové nosní výstelky pomocí speciální odběrové sondy (SSP) po aplikaci nosního spreje.

1. Skupina 1: lidé se sennou rýmou, n = 12
2. Skupina 2: lidé s alergickým astmatem, n = 12
3. Skupina 3: zdraví, neatopičtí lidé, n = 6
4. Další skupina 4: lidé se sennou rýmou, n=16

NASÁLNÍ POSTUPY VE STUDII

1. Výplach nosu (výplach nosu): Na začátku dne se provedou nosní výplachy tak, že se do nosu vpustí malé množství slané vody (fyziologického roztoku). Tento postup se provádí před jinými postupy k vyčištění nosu. Tekutina získaná z nosních výplachů se vyhodí a neanalyzuje.
2. Absorpce tekutiny z nosní výstelky (nasorpce nebo SAM): K absorbování vlhkosti z vnitřního povrchu nosní dírky bude použit malý proužek absorpčního materiálu, který vypadá a působí jako měkký hedvábný papír. Speciální absorpční papír bude umístěn do nosní dírky a ponechán po dobu 2 minut, aby absorboval tekutinu z nosní výstelky, než bude odstraněn, a jemně nasaje tekutinu jako savý papír. Vložení papíru do nosu může lechtat a způsobit trochu slzení očí. Nasosorpce však nebolí a naše metoda se osvědčila jako dobře snášená u kojenců, dětí i dospělých. Papír absorbuje nosní tekutinu a mnoho látek produkovaných nosními buňkami lze pak z papíru extrahovat a měřit v laboratoři.
3. Nosní škrábání (nosní kyretáž nebo Rhinoprobe): Malá sterilní plastová sonda na jedno použití bude vložena do nosu a bude jemně přitlačena proti vnitřní povrchové výstelce nosní dírky. 3 palce dlouhá sonda má na konci malou lopatku, kterou lze sotva vidět. 24 malých vzorků z každé nosní dírky (špendlíková hlavička, 2 mm, tkáně) bude odebráno z části nosu, která má snížené nervové zásobení, aby se omezilo jakékoli nepohodlí. Odběr tohoto vzorku nezpůsobuje krvácení, ale může způsobit mírné nepohodlí a může způsobit mírné slzení očí. Sonda bude sbírat nosní buňky z povrchu nosní dírky, které pak budou odeslány k analýze. Tato metoda byla provedena u mnoha dospělých, dětí a kojenců a byla velmi dobře snášena.
4. Speciální vzorkovací sonda (SSP): Tekutinu nosní povrchové výstelky lze také odebírat pomocí speciální vzorkovací sondy nebo SSP, která využívá elektrosprej k odrážení kapiček od tekutiny z nosní výstelky. To bude provedeno kontinuálním odběrem vzorků po dobu několika hodin z jediné nosní dírky. Při použití této speciální odběrové sondy (SSP) v nosu lidí dochází při odběru vzorku k mírnému lechtání. To lze sotva postřehnout.

STATISTICKÁ ANALÝZA

Rozdělení dat bude posuzováno ShapiroWilks testem, který zjišťuje, zda data mají normální (parametrické) nebo nenormální (neparametrické) rozdělení.

Normální data se zobrazí graficky jako:

• aritmetický průměr a standardní chyba průměru (SEM)
• nebo prostředky s SD
• nebo znamená s intervaly spolehlivosti (CI)

Nenormální data se zobrazí graficky jako:

Box-whisker: medián, kvartily, rozsah

Pro nenormální data budou měřeny rozdíly od výchozí hodnoty pro aktivní provokační činidlo (v různých dávkách) a placebo v každém časovém bodě a vypočítá se AUC. Vypočítají se rozdíly v AUC od placeba (aktivní placebo) a testuje se významnost neparametrickým Wilcoxonovým znaménkovým rank testem (jediná populace). Plocha pod křivkou (AUC) bude žalována v různých definovaných časech v závislosti na nosní provokační látce.