Développement de modèles de provocation nasale humaine avec des constituants microbiens et du pollen de graminées

CONCEPTION ET MÉTHODOLOGIE DE L'ÉTUDE

L'étude comprend 3 parties avec différents tests de pulvérisation nasale administrés aux sujets :

1. Composants bactériens ou viraux, comprenant l'un des éléments suivants chez un patient particulier ;

   1. Le MPLA (monophosphoryl lipide A) ressemble au lipopolysaccharide bactérien
   2. PolyIC (acides polyinosiniques et cytidyliques) : composant viral
   3. PolyICLC (polyIC stabilisé avec polyLlysine) : composant viral
   4. Resiquimod : mimique virale
2. Tuberculine : dérivé protéique partiellement purifié (PPD) de Mycobacterium bovis, la bactérie responsable de la tuberculose.
3. Allergène : L'agent de provocation pour pulvérisation nasale est le pollen de fléole des prés.

RECRUTEMENT

L'objectif est de recruter un total de 174 sujets. Les sujets seront identifiés par des annonces dans les journaux, des affiches sur le campus, les services de médecin généraliste, les cliniques externes de l'hôpital St. Mary's, y compris les cliniques antituberculeuses de l'hôpital St. Mary's. Nous obtiendrons un consentement pleinement éclairé. Toutes les données seront gérées conformément à GCP et aux directives locales de gouvernance de l'information.

NOMBRE DE SUJETS ET POSOLOGIE

PARTIE 1 : Provocation nasale à dose croissante avec des constituants microbiens utilisant MPLA, polyIC, polyICLC et resiquimod. Celui-ci est divisé en partie A et partie B.

PARTIE 1A (n=32) : Étude de dose progressive croissante basée sur la tolérance et la MAS. 4 cohortes de 8 volontaires sains (4 sur 8 allergiques aux pollens de graminées, aux acariens ou ayant des antécédents de rhume des foins). Une cohorte pour chaque constituant microbien. Chaque cohorte recevra un défi de contrôle salin nasal et trois doses croissantes du défi du constituant microbien nasal :

• 10 μg de constituant microbien dans 100 μl de solution saline
• 100 μg de constituant microbien dans 100 μl de solution saline
• 500μg de constituant microbien dans 100μl de solution saline

PARTIE 1B (n = 64) Dose unique avec sonde d'échantillonnage spéciale (SSP) supplémentaire et curetage, cohorte unique de 16 volontaires sains au maximum (8 des 16 allergies au pollen de graminées, aux acariens, antécédents de rhume des foins). Chaque sujet a reçu un contrôle salin et une dose unique après avoir établi la tolérance et la réponse SAM.

RÉSIQUIMOD :

Dans la partie B, 10 μg par narine seront administrés à 36 volontaires :

12 asthmatiques allergiques 12 volontaires atopiques 12 volontaires non atopiques

PARTIE 2 : Provocation nasale à dose croissante avec de la tuberculine. Celui-ci est divisé en partie A et partie B.

PARTIE 2A (n=16) : Il s'agit d'un total de 16 sujets TB latents (LTB), Ce groupe est subdivisé en 4 cohortes de 4 sujets selon la dose de tuberculine administrée ;

• 0,1 UT dans 100μl, n = 4
• 1,0 UT dans 100μl, n = 4
• 2,0 UT dans 100μl, n = 4
• 5,0 UT dans 100 μl, n = 4 Chaque cohorte n'a qu'un seul défi. La dose initiale est très faible à 0,1 UT. S'il est bien toléré, le sujet passera à la prochaine dose supérieure de 1,0 UT. Si cela est également bien toléré, le sujet passera à la dose supérieure suivante de 2,0 UT, puis à la dose la plus élevée de 5,0 UT dans ce groupe, garantissant la sécurité des sujets à tout moment.

PARTIE 2B (N=16) : Dose maximale avec échantillonnage supplémentaire. Celui-ci comprend 16 personnes réparties en deux groupes (8 volontaires sains et 8 sujets atteints de tuberculose latente).

Groupe 1 : sujet TB latent, non. de personnes = 8 Ce groupe recevra la dose maximale (5-10,0 TU) du challenge tuberculinique. Sur les 8 sujets de chaque groupe, 2 recevront un placebo (spray fictif salin) et les 6 autres recevront le challenge spray tuberculinique.

Groupe 2 : Volontaires sains, non. de personnes = 8 Ce groupe recevra également la dose maximale (5-10,0 TU) du challenge tuberculinique, sous réserve de tolérance. Sur les 8 sujets, 2 recevront le placebo (spray fictif salin) et les 6 autres recevront le challenge spray tuberculinique

PARTIE 3 (n = 46) : Défi allergène nasal avec le pollen de fléole des prés

Au départ, 30 personnes seront étudiées : un groupe de 12 personnes souffrant de rhume des foins, un groupe de 12 personnes souffrant d'asthme allergique aux pollens de graminées et un groupe de 6 personnes non allergiques et non asthmatiques. Dans un groupe supplémentaire, 16 personnes atteintes de rhume des foins seront étudiées en prélevant des échantillons continus du liquide de la muqueuse nasale de surface à l'aide d'une sonde d'échantillonnage spéciale (SSP) après le test de pulvérisation nasale.

1. Groupe 1 : personnes atteintes de rhume des foins, n = 12
2. Groupe 2 : personnes souffrant d'asthme allergique, n = 12
3. Groupe 3 : personnes saines, non atopiques, n = 6
4. Groupe supplémentaire 4 : personnes atteintes de rhume des foins, n=16

PROCÉDURES NASALES DANS L'ÉTUDE

1. Lavage nasal (lavage nasal) : En début de journée, des lavages nasaux dans le nez seront effectués en faisant passer un petit volume d'eau salée (liquide salin) dans le nez. Cette procédure est effectuée avant d'autres procédures pour nettoyer le nez. Le liquide obtenu à partir des lavages nasaux est jeté et non analysé.
2. Absorption du liquide de la muqueuse nasale (nasosorption ou SAM) : une petite bande de matériau absorbant, qui ressemble et se sent comme du papier de soie doux, sera utilisée pour absorber l'humidité de la surface intérieure de la narine. Le papier absorbant spécial sera placé à l'intérieur de la narine et laissé pendant une période de 2 minutes pour absorber le liquide de la muqueuse nasale avant d'être retiré, en aspirant doucement le liquide comme du papier buvard. Mettre le papier dans le nez peut chatouiller et faire pleurer un peu vos yeux. Cependant, la nasosorption ne fait pas mal et notre méthode s'est avérée bien tolérée chez les bébés, les enfants et les adultes. Le papier absorbe le liquide nasal et de nombreuses substances produites par les cellules nasales peuvent ensuite être extraites du papier et mesurées en laboratoire.
3. Grattage nasal (curetage nasal ou Rhinoprobe) : Une petite sonde en plastique jetable stérile sera insérée dans le nez et sera doucement pressée contre la paroi interne de la narine. La sonde de 3 pouces de long a une petite cuillère à l'extrémité, qui peut à peine être vue. 24 minuscules échantillons de chaque narine (une tête d'épingle, 2 mm, de tissu) seront prélevés sur une partie du nez dont l'innervation est réduite pour limiter tout inconfort. La prise de cet échantillon ne provoque pas de saignement, mais peut causer un léger inconfort et peut faire pleurer légèrement les yeux. La sonde recueillera des cellules nasales à la surface de la narine qui seront ensuite envoyées pour analyse. Cette méthode a été pratiquée sur de nombreux adultes, enfants et bébés et a été très bien tolérée.
4. Sonde d'échantillonnage spéciale (SSP): Le liquide de la muqueuse nasale peut également être collecté à l'aide d'une sonde d'échantillonnage spéciale ou SSP qui utilise un électrospray pour faire rebondir les gouttelettes sur le liquide de la muqueuse nasale. Cela se fera en prélevant en continu pendant quelques heures à partir d'une seule narine. Lors de l'utilisation de cette sonde d'échantillonnage spéciale (SSP) dans le nez des personnes, il y a une légère sensation de chatouillement pendant le prélèvement de l'échantillon. Cela peut à peine être remarqué.

ANALYSES STATISTIQUES

La distribution des données sera évaluée par le test de ShapiroWilks, qui détermine si les données ont une distribution normale (paramétrique) ou non normale (non paramétrique).

Les données normales seront affichées graphiquement comme :

• moyennes arithmétiques et erreur standard des moyennes (SEM)
• ou signifie avec SD
• ou moyennes avec intervalles de confiance (IC)

Les données non normales seront affichées graphiquement comme :

Box-whisker : médiane, quartiles, plage

Pour les données non normales, les différences par rapport à la ligne de base seront mesurées pour l'agent de provocation actif (à différentes doses) et le placebo à chaque instant, et l'ASC calculée. Les différences d'ASC par rapport au placebo (placebo actif) sont calculées et la signification est testée avec le test de rang signé de Wilcoxon non paramétrique (population unique). L'aire sous la courbe (ASC) doit être poursuivie sur différentes durées définies en fonction de l'agent de provocation nasale.