Desenvolvimento de modelos de desafio nasal humano com constituintes microbianos e pólen de grama

DESENHO DO ESTUDO E METODOLOGIA

O estudo envolve 3 partes com diferentes desafios de spray nasal sendo administrados aos indivíduos:

1. Componentes bacterianos ou virais, compreendendo um dos seguintes em um determinado paciente;

   1. MPLA (monofosforil lipídio A) se assemelha a lipopolissacarídeo bacteriano
   2. PolyIC (ácidos poliinosínicos e citidílicos): componente viral
   3. PolyICLC (polyIC estabilizado com poliLlisina): componente viral
   4. Resiquimod: mímico viral
2. Tuberculina: derivado protéico parcialmente purificado (PPD) do Mycobacterium bovis, a bactéria que causa a tuberculose.
3. Alérgeno: O agente de desafio do spray nasal é o pólen da erva-dos-prados.

RECRUTAMENTO

O objetivo é recrutar um total de 174 sujeitos. Os indivíduos serão identificados por meio de anúncios nos jornais, pôsteres no campus, serviços de clínica geral, ambulatórios no hospital St. Mary's, incluindo clínicas de tuberculose no St. Mary's Hospital. Obteremos consentimento totalmente informado. Todos os dados serão gerenciados de acordo com o GCP e as diretrizes locais de governança de informações.

NÚMERO DE SUJEITOS E DOSAGEM

PARTE 1: Desafio de dose ascendente nasal com constituintes microbianos usando MPLA, polyIC, polyICLC e resiquimod. Esta é dividida em parte A e parte B.

PARTE 1A (n=32): Estudo de Dose Ascendente Incremental com base na Tolerabilidade e SAM. 4 coortes de 8 voluntários saudáveis ​​(4 de 8 com alergia a pólen de gramíneas, ácaros da poeira doméstica ou história de febre do feno). Uma coorte para cada constituinte microbiano. Cada coorte receberá um desafio de controle de solução salina nasal e três doses ascendentes do desafio do constituinte microbiano nasal:

• 10μg de constituinte microbiano em 100μl de solução salina
• 100μg de constituinte microbiano em 100μl de solução salina
• 500μg de constituinte microbiano em 100μl de solução salina

PARTE 1B (n=64): Dose única superior com sonda de amostragem especial adicional (SSP) e curetagem, coorte única de até 16 voluntários saudáveis ​​(8 de 16 alergias a pólen de gramíneas, ácaros da poeira doméstica, histórico de febre do feno). Cada sujeito recebeu controle salino e dose máxima única após estabelecer tolerabilidade e resposta SAM.

RESIQUIMOD:

A Parte B verá 10μg por narina sendo administrados a 36 voluntários:

12 asmáticos alérgicos 12 voluntários atópicos 12 voluntários não atópicos

PARTE 2: Desafio de dose ascendente nasal com tuberculina. Esta é dividida em parte A e parte B.

PARTE 2A (n=16): Compreende um total de 16 indivíduos com TB latente (LTB). Este grupo é subdividido em 4 coortes de 4 indivíduos de acordo com a dose da tuberculina a ser administrada;

• 0,1 TU em 100μl, n = 4
• 1,0 TU em 100μl, n = 4
• 2,0 TU em 100μl, n = 4
• 5,0 TU em 100μl, n = 4 Cada coorte tem apenas 1 desafio. A dose inicial é muito baixa em 0,1 TU. Se for bem tolerado, o sujeito passará para a próxima dose mais alta de 1,0 TU. Se isso também for bem tolerado, o indivíduo passará para a próxima dose mais alta de 2,0 TU e, em seguida, para a dose mais alta de 5,0 TU neste grupo, garantindo a segurança dos indivíduos em todos os momentos.

PARTE 2B (N=16): Dose máxima com amostragem adicional. Este é composto por 16 pessoas em dois grupos (8 voluntários saudáveis ​​e 8 indivíduos com tuberculose latente).

Grupo 1: Indivíduo com TB latente, não. de pessoas = 8 Este grupo receberá a dose máxima (5-10,0 TU) do desafio tuberculínico. Dos 8 indivíduos em cada grupo, 2 receberão placebo (spray fictício salino) e os 6 restantes receberão o teste de spray de tuberculina.

Grupo 2: Voluntários saudáveis, não. de pessoas = 8 Este grupo também receberá a dose máxima (5-10,0 TU) do desafio com tuberculina, sujeito a tolerabilidade. Dos 8 indivíduos, 2 receberão o placebo (spray fictício salino) e os 6 restantes receberão o spray de tuberculina

PARTE 3 (n=46): Desafio de Alergênico Nasal com Pólen de Grama de Timóteo

Inicialmente serão estudadas 30 pessoas: um grupo de 12 pessoas com febre do feno, um grupo de 12 pessoas com asma com alergia ao pólen de gramíneas e um grupo de 6 pessoas não alérgicas e sem asma. Em um grupo adicional, 16 pessoas com febre do feno serão estudadas coletando amostras contínuas do fluido de revestimento nasal da superfície usando uma sonda de amostragem especial (SSP) após o teste de spray nasal.

1. Grupo 1: pessoas com febre do feno, n = 12
2. Grupo 2: pessoas com asma alérgica, n = 12
3. Grupo 3: pessoas saudáveis, não atópicas, n = 6
4. Grupo Adicional 4: pessoas com febre do feno, n=16

PROCEDIMENTOS NASAIS NO ESTUDO

1. Lavagem nasal (lavagem nasal): No início do dia, serão realizadas lavagens nasais no nariz, passando um pequeno volume de fluido de água salgada (soro fisiológico) no nariz. Este procedimento é realizado antes de outros procedimentos para limpar o nariz. O fluido obtido das lavagens nasais é descartado e não analisado.
2. Absorção de fluido de revestimento nasal (nasossorção ou SAM): Uma pequena tira de material absorvente, que se parece com um lenço de papel macio, será usada para absorver a umidade da superfície interna da narina. O papel absorvente especial será colocado dentro da narina e deixado por um período de 2 minutos para absorver o fluido do revestimento nasal antes de ser removido, sugando suavemente o fluido como mata-borrão. Colocar o papel no nariz pode fazer cócegas e fazer com que seus olhos lacrimejem um pouco. No entanto, a nasoabsorção não dói e nosso método tem se mostrado bem tolerado em bebês, crianças e adultos. O papel absorve o fluido nasal e muitas substâncias produzidas pelas células nasais podem ser extraídas do papel e medidas em laboratório.
3. Raspagem nasal (curetagem nasal ou Rhinoprobe): Uma pequena sonda de plástico descartável e estéril será inserida no nariz e será pressionada suavemente contra o revestimento da superfície interna da narina. A sonda de 3 polegadas de comprimento tem uma pequena abertura na extremidade, que mal pode ser vista. 24 amostras minúsculas de cada narina (uma cabeça de alfinete, 2 mm, de tecido) serão retiradas de uma parte do nariz que tem um suprimento nervoso reduzido para limitar qualquer desconforto. A coleta desta amostra não causa sangramento, mas pode causar algum desconforto leve e pode fazer com que os olhos lacrimejem levemente. A sonda coletará células nasais da superfície da narina que serão enviadas para análise. Este método foi realizado em muitos adultos, crianças e bebês e foi muito bem tolerado.
4. Sonda de Amostragem Especial (SSP): O fluido de revestimento da superfície nasal também pode ser coletado usando uma sonda de amostragem especial ou SSP que usa um eletrospray para rebater as gotas do fluido de revestimento nasal. Isso será feito por amostragem contínua por algumas horas de uma única narina. Ao usar esta sonda de amostragem especial (SSP) no nariz das pessoas, há uma leve sensação de cócegas enquanto a amostra está sendo coletada. Isso mal pode ser notado.

ANÁLISE ESTATÍSTICA

A distribuição dos dados será avaliada pelo teste de ShapiroWilks, que determina se os dados têm distribuição normal (paramétrica) ou não normal (não paramétrica).

Os dados normais serão exibidos graficamente como:

• médias aritméticas e erro padrão das médias (SEM)
• ou meios com SDs
• ou médias com intervalos de confiança (CIs)

Os dados não normais serão exibidos graficamente como:

Box-whisker: mediana, quartis, intervalo

Para dados não normais, as diferenças da linha de base serão medidas para o agente de desafio ativo (em doses diferentes) e placebo em cada ponto de tempo, e a AUC calculada. As diferenças na AUC do placebo (placebo ativo) são calculadas e a significância testada com o teste não paramétrico Wilcoxon dos postos sinalizados (população única). A área sob a curva (AUC) deve ser processada em diferentes tempos definidos, dependendo do agente de provocação nasal.