Ihmisten nenähaastemallien kehittäminen mikrobien aineosien ja ruohon siitepölyn kanssa

OPINTOJEN SUUNNITTELU JA MENETELMÄT

Tutkimus sisältää 3 osaa, joissa koehenkilöille annetaan erilaisia ​​nenäsumutehaasteita:

1. Bakteeri- tai viruskomponentit, jotka sisältävät jotakin seuraavista tietyssä potilaassa;

   1. MPLA (monofosforyylilipidi A) muistuttaa bakteeriperäistä lipopolysakkaridia
   2. PolyIC (polyinosiini- ja sytidyylihapot): viruskomponentti
   3. PolyICLC (polyIC stabiloitu polyLlysiinillä): viruskomponentti
   4. Resiquimod: virusjäljitelmä
2. Tuberkuliini: osittain puhdistettu proteiinijohdannainen (PPD) Mycobacterium bovis -bakteerista, joka aiheuttaa tuberkuloosia.
3. Allergeeni: Nenäsumutteen haasteaine on Timothy-ruohon siitepölyä.

REKRYTOINTI

Tavoitteena on rekrytoida yhteensä 174 tutkittavaa. Aiheet tunnistetaan sanomalehdissä olevien ilmoitusten, kampuksen julisteiden, yleislääkäripalveluiden, St. Mary's -sairaalan poliklinikoiden, mukaan lukien St. Mary's Hospital -sairaalan TB-klinikat, avulla. Saamme täysin tietoisen suostumuksen. Kaikkia tietoja käsitellään GCP:n ja paikallisten tiedonhallintaohjeiden mukaisesti.

AINEIDEN MÄÄRÄ JA ANNOSTUS

OSA 1: Nenän nouseva annosaltistus mikrobisilla aineosilla käyttämällä MPLA:ta, polyIC:tä, polyICLC:tä ja resikimodia. Tämä on jaettu osaan A ja osaan B.

OSA 1A (n=32): Inkrementaalinen nouseva annostutkimus, joka perustuu siedettävyyteen ja SAM:iin. 4 kohorttia 8 tervettä vapaaehtoista (4 kahdeksasta, joilla on allergioita ruohon siitepölylle, pölypunkille tai heinänuhaa). Yksi kohortti kutakin mikrobien ainesosaa kohti. Jokaiselle kohortille annetaan nenän suolaliuoskontrollialtistus ja kolme nousevaa annosta nenän mikrobiainesosaaltistusta:

• 10 μg mikrobista ainesosaa 100 μl:ssa suolaliuosta
• 100 μg mikrobista ainesosaa 100 μl:ssa suolaliuosta
• 500 μg mikrobista ainesosaa 100 μl:ssa suolaliuosta

OSA 1B (n=64): Kerta-annos ylimääräisellä erikoisnäytteenottimella (SSP) ja Curettagella, yksi enintään 16 terveen vapaaehtoisen kohortti (8/16 allergiaa ruohon siitepölylle, pölypunkki, aiempi heinänuha). Jokaiselle koehenkilölle annettiin suolaliuosta ja yksi huippuannos siedettävyyden ja SAM-vasteen toteamisen jälkeen.

RESIQUIMOD:

Osassa B annetaan 10 μg sierainta kohden 36 vapaaehtoiselle:

12 allergista astmaatikota 12 atooppista vapaaehtoista 12 ei-atooppista vapaaehtoista

OSA 2: Nenän nousevan annoksen altistus tuberkuliinilla. Tämä on jaettu osaan A ja osaan B.

OSA 2A (n = 16): Tämä käsittää yhteensä 16 piilevää tuberkuloosipotilasta (LTB). Tämä ryhmä on jaettu 4 kohorttiin, joissa on 4 henkilöä annettavan tuberkuliiniannoksen mukaan;

• 0,1 TU 100 μl:ssa, n = 4
• 1,0 TU 100 μl:ssa, n = 4
• 2,0 TU 100 μl:ssa, n = 4
• 5,0 TU 100 μl:ssa, n = 4 Jokaisella kohortilla on vain 1 haaste. Aloitusannos on hyvin pieni, 0,1 TU. Jos se on hyvin siedetty, kohde siirtyy seuraavaan korkeampaan 1,0 TU:n annokseen. Jos tämäkin on hyvin siedetty, koehenkilö siirtyy seuraavaksi suurempaan 2,0 TU:n annokseen ja sitten tämän ryhmän korkeimpaan 5,0 TU:n annokseen varmistaen koehenkilöiden turvallisuuden kaikkina aikoina.

OSA 2B (N=16): Huippuannos lisänäytteenotolla. Siihen kuuluu 16 henkilöä kahdessa ryhmässä (8 tervettä vapaaehtoista ja 8 latenttia tuberkuloosia sairastavaa henkilöä).

Ryhmä 1: Piilevä tuberkuloosikohde, nro. ihmisistä = 8 Tämä ryhmä saa suurimman annoksen (5-10,0 TU) tuberkuliinihaasteen. Jokaisen ryhmän kahdeksasta koehenkilöstä 2 saa lumelääkettä (suolaliuossumutetta) ja loput 6 saavat tuberkuliinisumutteen.

Ryhmä 2: Terveet vapaaehtoiset, no. ihmisistä = 8 Tämä ryhmä saa myös suurimman annoksen (5-10,0 TU) tuberkuliinialtistuksen siedettävyydestä riippuen. Kahdeksasta koehenkilöstä 2 saa lumelääkettä (suolaliuossumutetta) ja loput 6 saavat tuberkuliinisumutteen.

OSA 3 (n=46): Nenän allergeenihaaste Timothy Grassin siitepölyllä

Aluksi tutkitaan 30 henkilöä: yhdellä 12 hengen ryhmällä on heinänuha, yhdellä 12 hengen ryhmällä astma ja heinän siitepölyallergia ja 6 hengen ryhmä ei ole allerginen eikä heillä ole astmaa. Lisäryhmässä 16 heinänuhaa sairastavaa henkilöä tutkitaan ottamalla jatkuvatoimisia näytteitä nenän pinnan limakalvon nesteestä erityisellä näytteenottimella (SSP) nenäsumutteen jälkeen.

1. Ryhmä 1: ihmiset, joilla on heinänuha, n = 12
2. Ryhmä 2: ihmiset, joilla on allerginen astma, n = 12
3. Ryhmä 3: terveet, ei-natooppiset ihmiset, n = 6
4. Lisäryhmä 4: heinänuhaa sairastavat, n=16

TUTKIMUKSEN NASAL-MENETELMÄT

1. Nenän huuhtelu (nenähuuhtelu): Päivän alussa nenän huuhtelu suoritetaan johtamalla pieni määrä suolavettä (suolaliuosta) nenään. Tämä toimenpide suoritetaan ennen muita nenän puhdistustoimenpiteitä. Nenän huuhtelunesteestä saatu neste heitetään pois, eikä sitä analysoida.
2. Nenän limakalvon nesteen imeytyminen (nasosorptio tai SAM): Pientä imukykyistä materiaalia, joka näyttää ja tuntuu pehmeältä pehmopaperilta, käytetään kosteuden imemiseen sieraimen sisäpinnalta. Erityinen imukykyinen paperi asetetaan sieraimeen ja jätetään 2 minuutiksi imemään nenän limakalvon nestettä ennen poistamista. Se imee nestettä varovasti, kuten imupaperi. Paperin laittaminen nenään voi kutittaa ja saada silmäsi vedeytymään hieman. Nenäsorptio ei kuitenkaan satuta, ja menetelmämme on osoittautunut hyvin siedetyksi vauvoilla, lapsilla ja aikuisilla. Paperi imee nenänesteen ja monet nenäsolujen tuottamat aineet voidaan sitten erottaa paperista ja mitata laboratoriossa.
3. Nenän raapiminen (nenäkyretti tai Rhinoprobe): Pieni steriili kertakäyttöinen muovinen anturi työnnetään nenään ja painetaan varovasti sieraimen sisäpintaa vasten. 3 tuuman pituisen anturin päässä on pieni kauha, jota tuskin huomaa. Jokaisesta sieraimesta otetaan 24 pientä näytettä (neulanpää, 2 mm kudosta) nenän osasta, jossa hermotarve on heikentynyt epämukavuuden rajoittamiseksi. Tämän näytteen ottaminen ei aiheuta verenvuotoa, mutta saattaa aiheuttaa lievää epämukavuutta ja saattaa silmät vuotaa hieman. Koetin kerää nenäsolut sieraimen pinnalta, jotka lähetetään sitten analysoitavaksi. Tämä menetelmä on tehty monille aikuisille, lapsille ja vauvoille, ja se on ollut erittäin hyvin siedetty.
4. Special Sampling Probe (SSP): Nenän pinnan limakalvoneste voidaan kerätä myös käyttämällä erityistä näytteenotinta tai SSP:tä, joka käyttää sähkösumutetta pisaroiden pomppaamiseen nenän limakalvon nesteestä. Tämä tehdään ottamalla jatkuvasti näytteitä yhdestä sieraimesta muutaman tunnin ajan. Kun tätä erityistä näytteenotinta (SSP) käytetään ihmisten nenässä, näytteenoton aikana on lievää kutinaa. Tätä tuskin huomaa.

TILASTOLLINEN ANALYYSI

Tietojen jakautuminen arvioidaan ShapiroWilks-testillä, joka määrittää, onko tiedolla normaali (parametrinen) vai ei-normaali (ei-parametrinen) jakauma.

Normaalit tiedot näytetään graafisesti seuraavasti:

• aritmeettiset keskiarvot ja keskivirhe (SEM)
• tai tarkoittaa SD:llä
• tai tarkoittaa luottamusväliä (CI)

Epänormaalit tiedot näytetään graafisesti seuraavasti:

Box-whisker: mediaani, kvartiilit, alue

Epänormaaleille tiedoille mitataan erot lähtötasosta aktiiviselle altistusaineelle (eri annoksilla) ja lumelääkettä varten kullakin aikapisteellä, ja AUC lasketaan. AUC-erot lumelääkkeeseen (aktiivinen lumelääke) lasketaan ja merkitsevyys testataan ei-parametrisella Wilcoxon signed rank -testillä (yksi populaatio). Käyrän alla oleva pinta-ala (AUC) on haettava eri määriteltyinä aikoja riippuen nenän altistusaineesta.