Ontwikkeling van Human Nasal Challenge-modellen met microbiële bestanddelen en graspollen

STUDIEPLAN EN METHODOLOGIE

De studie bestaat uit 3 delen met verschillende neusspray-uitdagingen die aan proefpersonen worden toegediend:

1. Bacteriële of virale componenten, omvattende een van de volgende in een bepaalde patiënt;

   1. MPLA (monofosforyllipide A) lijkt op bacterieel lipopolysaccharide
   2. PolyIC (polyinosinezuur en cytidylzuur): virale component
   3. PolyICLC (polyIC gestabiliseerd met polyLlysine): virale component
   4. Resiquimod: virale nabootsing
2. Tuberculine: gedeeltelijk gezuiverd eiwitderivaat (PPD) van Mycobacterium bovis, de bacterie die tuberculose veroorzaakt.
3. Allergeen: Het neusspray-uitdagingsmiddel is Timothy-graspollen.

WERVING

Het streven is om in totaal 174 proefpersonen te werven. Onderwerpen zullen worden geïdentificeerd via advertenties in de kranten, posters op de campus, huisartsendiensten, poliklinieken in het St. Mary's Hospital, inclusief tbc-klinieken in het St. Mary's Hospital. We zullen volledig geïnformeerde toestemming krijgen. Alle gegevens worden beheerd volgens GCP en lokale richtlijnen voor informatiebeheer.

AANTAL ONDERWERPEN EN DOSERING

DEEL 1: Nasale oplopende dosisprovocatie met microbiële bestanddelen met behulp van MPLA, polyIC, polyICLC en resiquimod. Deze is opgedeeld in deel A en deel B.

DEEL 1A (n=32): Incrementele oplopende dosisstudie op basis van verdraagbaarheid en SAM. 4 cohorten van 8 gezonde vrijwilligers (4 van de 8 met allergieën voor graspollen, huisstofmijt of een voorgeschiedenis van hooikoorts). Eén cohort voor elk microbieel bestanddeel. Elk cohort krijgt een nasale zoutcontrole-uitdaging en drie oplopende doses van de nasale microbiële bestanddeeluitdaging:

• 10 μg microbieel bestanddeel in 100 μl zoutoplossing
• 100 μg microbieel bestanddeel in 100 μl zoutoplossing
• 500 μg microbieel bestanddeel in 100 μl zoutoplossing

DEEL 1B (n=64): Enkelvoudige topdosis met extra speciale bemonsteringssonde (SSP) en curettage, één cohort van maximaal 16 gezonde vrijwilligers (8 van de 16 allergieën voor graspollen, huisstofmijt, voorgeschiedenis van hooikoorts). Elke proefpersoon kreeg een zoutoplossing en een enkele topdosis nadat de verdraagbaarheid en de SAM-respons waren vastgesteld.

RESIQUIMOD:

In deel B wordt 10 μg per neusgat gegeven aan 36 vrijwilligers:

12 allergische astmapatiënten 12 atopische vrijwilligers 12 niet-atopische vrijwilligers

DEEL 2: Nasale oplopende dosis provocatie met tuberculine. Deze is opgedeeld in deel A en deel B.

DEEL 2A (n=16): Dit omvat in totaal 16 latente tuberculose (LTB) proefpersonen. Deze groep is onderverdeeld in 4 cohorten van 4 proefpersonen volgens de dosis van de toegediende tuberculine;

• 0,1 TU in 100μl, n = 4
• 1,0 TU in 100μl, n = 4
• 2,0 TU in 100μl, n = 4
• 5,0 TU in 100μl, n = 4 Elk cohort heeft slechts 1 uitdaging. De startdosering is met 0,1 TU erg laag. Als het goed wordt verdragen, gaat de proefpersoon over naar de eerstvolgende hogere dosis van 1,0 TU. Als dit ook goed wordt verdragen, gaat de proefpersoon over naar de volgende hogere dosis van 2,0 TU en vervolgens naar de hoogste dosis van 5,0 TU in deze groep, waardoor de veiligheid van de proefpersonen te allen tijde wordt gewaarborgd.

DEEL 2B (N=16): Topdosis met aanvullende bemonstering. Dit bestaat uit 16 mensen in twee groepen (8 gezonde vrijwilligers en 8 proefpersonen met latente tuberculose).

Groep 1: Latente tbc-patiënt, nee. mensen = 8 Deze groep krijgt de hoogste dosis (5-10,0 TU) van de tuberculine-challenge. Van de 8 proefpersonen in elke groep krijgen er 2 een placebo (nepspray met zoutoplossing) en de overige 6 krijgen de tuberculinespray-uitdaging.

Groep 2: Gezonde vrijwilligers, nee. mensen = 8 Deze groep krijgt ook de hoogste dosis (5-10,0 TU) van de tuberculine-uitdaging, onder voorbehoud van verdraagbaarheid. Van de 8 proefpersonen krijgen er 2 de placebo (nepspray met zoutoplossing) en de overige 6 krijgen de tuberculinespray-uitdaging

DEEL 3 (n=46): Neusallergeenuitdaging met Timothy Grass Pollen

In eerste instantie worden 30 mensen onderzocht: een groep van 12 mensen heeft hooikoorts, een groep van 12 mensen heeft astma met graspollenallergie en een groep van 6 mensen is niet allergisch en heeft geen astma. In een aanvullende groep zullen 16 mensen met hooikoorts worden onderzocht door continu monsters te nemen van de oppervlaktevloeistof van het neusslijmvlies met behulp van een speciale bemonsteringssonde (SSP) na de neussprayprovocatie.

1. Groep 1: mensen met hooikoorts, n = 12
2. Groep 2: mensen met allergisch astma, n = 12
3. Groep 3: gezonde, niet-atopische mensen, n = 6
4. Additionele groep 4: mensen met hooikoorts, n=16

NASALE PROCEDURES IN DE STUDIE

1. Neusspoeling (neusspoeling): Aan het begin van de dag worden neusspoelingen in de neus uitgevoerd door een kleine hoeveelheid zoutwater (zoutoplossing) vloeistof in de neus te laten lopen. Deze procedure wordt uitgevoerd vóór andere procedures om de neus schoon te maken. De vloeistof die wordt verkregen uit de neusspoelingen wordt weggegooid en niet geanalyseerd.
2. Vloeistofabsorptie van de neusvoering (nasosorptie of SAM): een kleine strook absorberend materiaal, dat eruitziet en aanvoelt als zacht tissuepapier, zal worden gebruikt om vocht van het binnenoppervlak van het neusgat te absorberen. Het speciale absorberende papier wordt in het neusgat geplaatst en gedurende 2 minuten gelaten om de vloeistof van het neusslijmvlies te absorberen voordat het wordt verwijderd, waarbij vloeistof zoals vloeipapier voorzichtig wordt opgezogen. Het papier in de neus stoppen kan kriebelen en ervoor zorgen dat je ogen een beetje gaan tranen. De nasosorptie doet echter geen pijn en onze methode is goed verdragen door baby's, kinderen en volwassenen. Het papier absorbeert de neusvloeistof en veel stoffen die door de neuscellen worden geproduceerd, kunnen vervolgens uit het papier worden gehaald en in het laboratorium worden gemeten.
3. Neusschrapen (neuscurettage of Rhinoprobe): een kleine steriele plastic wegwerpsonde wordt in de neus gestoken en wordt voorzichtig tegen de binnenkant van het neusgat gedrukt. De 3 inch lange sonde heeft een klein bolletje aan het uiteinde, dat nauwelijks te zien is. Er zullen 24 kleine monsters uit elk neusgat (een speldenknop, 2 mm weefsel) worden genomen uit een deel van de neus met een verminderde zenuwtoevoer om ongemak te beperken. Het nemen van dit monster veroorzaakt geen bloedingen, maar kan een licht ongemak veroorzaken en kan de ogen lichtjes doen tranen. De sonde verzamelt neuscellen van het oppervlak van het neusgat, die vervolgens voor analyse worden verzonden. Deze methode is bij veel volwassenen, kinderen en baby's uitgevoerd en wordt zeer goed verdragen.
4. Speciale bemonsteringssonde (SSP): De vloeistof van de neusvoering kan ook worden opgevangen met behulp van een speciale bemonsteringssonde of SSP die een elektrospray gebruikt om druppeltjes van de vloeistof van de neusvoering af te kaatsen. Dit wordt gedaan door gedurende een paar uur continu monsters te nemen uit één enkel neusgat. Bij het gebruik van deze speciale bemonsteringssonde (SSP) in de neus van mensen is er een licht kriebelend gevoel tijdens het nemen van het monster. Dit valt nauwelijks op.

STATISTISCHE ANALYSE

De verdeling van gegevens wordt beoordeeld door de ShapiroWilks-test, die bepaalt of de gegevens een normale (parametrische) of niet-normale (niet-parametrische) verdeling hebben.

Normale gegevens worden grafisch weergegeven als:

• rekenkundige gemiddelden en standaardfout van gemiddelden (SEM)
• of middelen met SD's
• of middelen met betrouwbaarheidsintervallen (CI's)

Niet-normale gegevens worden grafisch weergegeven als:

Box-whisker: mediaan, kwartielen, bereik

Voor niet-normale gegevens worden de verschillen ten opzichte van de uitgangswaarde gemeten voor het actieve provocatiemiddel (in verschillende doses) en placebo op elk tijdstip, en wordt de AUC berekend. De verschillen in AUC ten opzichte van placebo (actieve placebo) worden berekend en de significantie wordt getest met de niet-parametrische Wilcoxon Signed Ranking Test (enkele populatie). Area under the curve (AUC) zal gedurende verschillende gedefinieerde tijden worden uitgevoerd, afhankelijk van het nasale provocatiemiddel.