Utveckling av mänskliga nasala utmaningsmodeller med mikrobiella beståndsdelar och gräspollen

STUDIEDESIGN OCH METODIK

Studien omfattar tre delar med olika nässprayutmaningar som administreras till försökspersoner:

1. Bakteriella eller virala komponenter, innefattande en av följande i en speciell patient;

   1. MPLA (monofosforyllipid A) liknar bakteriell lipopolysackarid
   2. PolyIC (polyinosin- och cytidylsyror): viral komponent
   3. PolyICLC (polyIC stabiliserad med polyLlysine): viral komponent
   4. Resiquimod: viral mimik
2. Tuberkulin: delvis renat proteinderivat (PPD) från Mycobacterium bovis, bakterien som orsakar TB.
3. Allergen: Utmaningsmedlet för nässprayen är Timothy gräspollen.

REKRYTERING

Målet är att rekrytera totalt 174 ämnen. Ämnen kommer att identifieras genom annonser i tidningar, affischer på campus, GP-tjänster, öppenvårdsmottagningar på St. Mary's hospital inklusive TB-kliniker på St. Mary's Hospital. Vi kommer att få fullt informerat samtycke. All data kommer att hanteras enligt GCP och lokala riktlinjer för informationsstyrning.

ANTAL ÄMNEN OCH DOSERING

DEL 1: Nasal stigande dosutmaning med mikrobiella beståndsdelar med hjälp av MPLA, polyIC, polyICLC och resiquimod. Detta är uppdelat i del A och del B.

DEL 1A (n=32): Studie av inkrementell stigande dos baserad på tolerabilitet och SAM. 4 kohorter av 8 friska frivilliga (4 av 8 med allergier mot gräspollen, husdammskvalster eller historia av hösnuva). En kohort för varje mikrobiell beståndsdel. Varje kohort kommer att ges en nasal saltlösningskontrollutmaning och tre stigande doser av den nasala mikrobiella beståndsdelen:

• 10μg mikrobiell beståndsdel i 100μl saltlösning
• 100μg mikrobiell beståndsdel i 100μl saltlösning
• 500μg mikrobiell beståndsdel i 100μl saltlösning

DEL 1B (n=64): Enkel toppdos med ytterligare specialprovtagningssond (SSP) och curettage, enstaka kohort med upp till 16 friska frivilliga (8 av 16 allergier mot gräspollen, husdammskvalster, hösnuva). Varje försöksperson fick saltlösningskontroll och en enda toppdos efter fastställande av tolerabilitet och SAM-svar.

RESIQUIMOD:

Del B kommer att se 10 μg per näsborre ges till 36 frivilliga:

12 allergiska astmatiker 12 atopiska frivilliga 12 icke-atopiska frivilliga

DEL 2: Nasal stigande dosutmaning med tuberkulin. Detta är uppdelat i del A och del B.

DEL 2A (n=16): Detta omfattar totalt 16 latent TB (LTB) patienter. Denna grupp är uppdelad i 4 kohorter av 4 försökspersoner beroende på dosen av tuberkulinet som administreras;

• 0,1 TU i 100 μl, n = 4
• 1,0 TU i 100 μl, n = 4
• 2,0 TU i 100 μl, n = 4
• 5,0 TU i 100μl, n = 4 Varje kohort har endast 1 utmaning. Startdosen är mycket låg vid 0,1 TU. Om det tolereras väl kommer patienten att fortsätta till nästa högre dos på 1,0 TU. Om detta också tolereras väl, kommer patienten att fortsätta till nästa högre dos på 2,0 TU och sedan till den högsta dosen på 5,0 TU i denna grupp, vilket garanterar patienternas säkerhet hela tiden.

DEL 2B (N=16): Toppdos med ytterligare provtagning. Detta består av 16 personer i två grupper (8 friska frivilliga och 8 försökspersoner med latent TB).

Grupp 1: Latent TB-ämne, nr. av personer = 8 Denna grupp kommer att få den högsta dosen (5-10,0 TU) av tuberkulinutmaningen. Av de 8 försökspersonerna i varje grupp kommer 2 att få placebo (koksaltlösningsspray) och de återstående 6 kommer att få tuberkulinsprayprovokation.

Grupp 2: Friska volontärer, nr. av personer = 8 Denna grupp kommer också att få den högsta dosen (5-10,0 TU) av tuberkulinutmaningen, med förbehåll för tolerabilitet. Av de 8 försökspersonerna kommer 2 att få placebo (saltlösning dummy spray) och de återstående 6 kommer att få tuberkulinsprayprovokation

DEL 3 (n=46): Nasal Allergen Challenge med Timothy Grass Pollen

Inledningsvis ska 30 personer studeras: en grupp på 12 personer har hösnuva, en grupp om 12 personer har astma med gräspollenallergi och en grupp på 6 personer är icke-allergiska och inte har astma. I ytterligare en grupp ska 16 personer med hösnuva studeras genom att ta kontinuerliga prover av nässlemhinnan på ytan med en speciell provtagningssond (SSP) efter nässprayutmaningen.

1. Grupp 1: personer med hösnuva, n = 12
2. Grupp 2: personer med allergisk astma, n = 12
3. Grupp 3: friska, icke-natopiska människor, n = 6
4. Ytterligare grupp 4: personer med hösnuva, n=16

NASALA PROCEDURER I STUDIEN

1. Nässköljning (nässköljning): I början av dagen kommer nässköljningar i näsan att utföras genom att en liten volym saltvatten (saltlösning) släpps in i näsan. Denna procedur utförs före andra procedurer för att rensa upp näsan. Vätskan som erhålls från nässköljningarna kasseras och analyseras inte.
2. Näsfodervätskeabsorption (nasosorption eller SAM): En liten remsa av absorberande material, som ser ut och känns som mjukt silkespapper, kommer att användas för att absorbera fukt från näsborrens insida. Det speciella absorberande papperet kommer att placeras inuti näsborren och lämnas i en period av 2 minuter för att absorbera nässlemhinnan innan det tas bort, och suger försiktigt upp vätska som läskpapper. Att stoppa in papperet i näsan kan kittla och få ögonen att vattnas lite. Nasosorptionen gör dock inte ont och vår metod har visat sig tolereras väl av spädbarn, barn och vuxna. Papperet absorberar näsvätskan och många ämnen som produceras av näscellerna kan sedan extraheras från papperet och mätas i laboratoriet.
3. Nässkrapa (nässkrapning eller noshörning): En liten steril engångssond av plast förs in i näsan och trycks försiktigt mot näsborrens insida. Den 3 tum långa sonden har en liten skopa på änden, som knappt kan ses. 24 små prover från varje näsborre (ett nålhuvud, 2 mm, vävnad) kommer att tas från en del av näsan som har en minskad nervtillförsel för att begränsa eventuella obehag. Att ta detta prov orsakar ingen blödning, men kan orsaka lite lätt obehag och kan få ögonen att vattnas något. Sonden kommer att samla in näsceller från näsborrens yta som sedan skickas för analys. Denna metod har utförts på många vuxna, barn och spädbarn och har tolererats mycket väl.
4. Speciell provtagningssond (SSP): Näsytans vätska kan också samlas upp med en speciell provtagningssond eller SSP som använder en elektrospray för att studsa droppar från nässlemhinnan. Detta kommer att göras genom att kontinuerligt ta prover under några timmar från en enda näsborre. När man använder denna speciella provtagningssond (SSP) i människors näsor, uppstår en lätt kittlande känsla när provet tas. Detta kan knappt märkas.

STATISTISK ANALYS

Fördelningen av data kommer att bedömas av ShapiroWilks test, som avgör om data har en normal (parametrisk) eller icke-normal (icke-parametrisk) fördelning.

Normal data kommer att visas grafiskt som:

• aritmetiska medelvärden och standardfel för medelvärden (SEM)
• eller medel med SD
• eller medel med konfidensintervall (CI)

Icke-normala data kommer att visas grafiskt som:

Box-whisker: median, kvartiler, intervall

För icke-normala data kommer skillnaderna från baslinjen att mätas för aktivt utmanande medel (vid olika doser) och placebo vid varje tidpunkt, och AUC beräknas. Skillnaderna i AUC från placebo (aktiv placebo) beräknas och signifikansen testas med det icke-parametriska Wilcoxon signed rank-testet (enkel population). Area under the curve (AUC) ska stämmas över olika definierade tider beroende på näsprovokationsmedlet.