Utvikling av menneskelige neseutfordringsmodeller med mikrobielle bestanddeler og gresspollen

STUDIEDESIGN OG METODOLOGI

Studien involverer 3 deler med ulike nesesprayutfordringer som administreres til forsøkspersoner:

1. Bakterielle eller virale komponenter, omfattende en av følgende i en bestemt pasient;

   1. MPLA (monofosforyllipid A) ligner bakterielt lipopolysakkarid
   2. PolyIC (polyinosin- og cytidylsyrer): viral komponent
   3. PolyICLC (polyIC stabilisert med polyLlysine): viral komponent
   4. Resiquimod: viral etterligning
2. Tuberkulin: delvis renset proteinderivat (PPD) fra Mycobacterium bovis, bakterien som forårsaker tuberkulose.
3. Allergen: Utfordringsmidlet for nesespray er Timothy-gresspollen.

REKRUTTERING

Målet er å rekruttere totalt 174 fag. Emner vil bli identifisert gjennom annonser i avisene, plakater på campus, fastlegetjenester, poliklinikker ved St. Mary's hospital inkludert TB-klinikker ved St. Mary's Hospital. Vi vil få fullt informert samtykke. Alle data vil bli administrert i henhold til GCP og lokale retningslinjer for informasjonsstyring.

ANTALL EMNER OG DOSERING

DEL 1: Nasal stigende doseutfordring med mikrobielle bestanddeler ved bruk av MPLA, polyIC, polyICLC og resiquimod. Dette er delt inn i del A og del B.

DEL 1A (n=32): Studie med inkrementell stigende dose basert på tolerabilitet og SAM. 4 kohorter av 8 friske frivillige (4 av 8 med allergi mot gresspollen, husstøvmidd eller høysnue). En kohort for hver mikrobiell bestanddel. Hver kohort vil bli gitt en nasal saltvannskontrollutfordring og tre stigende doser av den nasale mikrobielle bestanddelutfordringen:

• 10μg mikrobiell bestanddel i 100μl saltvann
• 100μg mikrobiell bestanddel i 100μl saltvann
• 500μg mikrobiell bestanddel i 100μl saltvann

DEL 1B (n=64): Enkel toppdose med ekstra spesiell prøvetakingssonde (SSP) og curettage, enkelt kohort på opptil 16 friske frivillige (8 av 16 allergier mot gresspollen, husstøvmidd, høysnue i historien). Hvert individ fikk saltvannskontroll og enkelt toppdose etter å ha etablert tolerabilitet og SAM-respons.

RESIQUIMOD:

Del B vil se at 10 μg per nesebor blir gitt til 36 frivillige:

12 allergiske astmatikere 12 atopiske frivillige 12 ikke-atopiske frivillige

DEL 2: Nasal stigende doseutfordring med tuberkulin. Dette er delt inn i del A og del B.

DEL 2A (n=16): Dette omfatter totalt 16 latent TB (LTB) individer. Denne gruppen er delt inn i 4 kohorter på 4 individer i henhold til dosen av tuberkulinet som administreres;

• 0,1 TU i 100 μl, n = 4
• 1,0 TU i 100 μl, n = 4
• 2,0 TU i 100 μl, n = 4
• 5,0 TU i 100μl, n = 4 Hver kohort har kun 1 utfordring. Startdosen er svært lav ved 0,1 TU. Hvis det tolereres godt, vil forsøkspersonen fortsette til neste høyere dose på 1,0 TU. Hvis dette også tolereres godt, vil forsøkspersonen fortsette til neste høyere dose på 2,0 TU og deretter til den høyeste dosen på 5,0 TU i denne gruppen, for å sikre pasientens sikkerhet til enhver tid.

DEL 2B (N=16): Toppdose med ekstra prøvetaking. Dette består av 16 personer i to grupper (8 friske frivillige og 8 personer med latent tuberkulose).

Gruppe 1: Latent TB-fag, nr. av personer = 8 Denne gruppen vil få toppdosen (5-10,0 TU) av tuberkulinutfordringen. Av de 8 forsøkspersonene i hver gruppe vil 2 motta placebo (saltvannsdummyspray) og de resterende 6 vil få tuberkulinsprayutfordringen.

Gruppe 2: Friske frivillige, nei. av personer = 8 Denne gruppen vil også motta toppdosen (5-10,0 TU) av tuberkulinutfordringen, med forbehold om toleranse. Av de 8 forsøkspersonene vil 2 få placebo (saltvannsdummyspray) og de resterende 6 vil få tuberkulinsprayutfordringen

DEL 3 (n=46): Nasal Allergen Challenge med Timothy Grass Pollen

I utgangspunktet skal 30 personer studeres: en gruppe på 12 personer har høysnue, en gruppe på 12 personer har astma med gresspollenallergi, og en gruppe på 6 personer er ikke-allergiske og har ikke astma. I en ekstra gruppe skal 16 personer med høysnue studeres ved å ta kontinuerlige prøver av overflaten av neseslimhinnevæsken med en spesiell prøvetakingssonde (SSP) etter nesesprayutfordringen.

1. Gruppe 1: personer med høysnue, n = 12
2. Gruppe 2: personer med allergisk astma, n = 12
3. Gruppe 3: friske, ikke-natopiske mennesker, n = 6
4. Tilleggsgruppe 4: personer med høysnue, n=16

NASALE PROSEDYRER I STUDIEN

1. Neseskylling (neseskylling): På begynnelsen av dagen vil neseskylling i nesen utføres ved å føre et lite volum saltvann (saltvann) inn i nesen. Denne prosedyren utføres før andre prosedyrer for å rense nesen. Væsken som oppnås fra nesevaskingene kastes og analyseres ikke.
2. Absorpsjon av neseslimhinnevæske (nasosorpsjon eller SAM): En liten stripe av absorberende materiale, som ser ut og føles som mykt silkepapir, vil bli brukt til å absorbere fuktighet fra innsiden av neseboret. Det spesielle absorberende papiret vil bli plassert inne i neseboret og la det stå i en periode på 2 minutter for å absorbere neseslimhinnevæsken før det fjernes, og suger forsiktig opp væske som tøypapir. Å putte papiret inn i nesen kan kile, og få øynene til å renne litt. Nasosorpsjonen gjør imidlertid ikke vondt og metoden vår har vist seg å tolereres godt hos babyer, barn og voksne. Papiret absorberer nesevæsken og mange stoffer som produseres av nesecellene kan deretter trekkes ut av papiret og måles i laboratoriet.
3. Neseskraping (nesekurettage eller neseprobe): En liten steril engangsplastprobe settes inn i nesen og presses forsiktig mot innsiden av neseborets overflate. Den 3 tommer lange sonden har en liten scoop på enden, som knapt kan ses. 24 bittesmå prøver fra hvert nesebor (et knappenålshode, 2 mm, vev) vil bli tatt fra en del av nesen som har redusert nervetilførsel for å begrense eventuell ubehag. Å ta denne prøven forårsaker ikke blødning, men kan forårsake noe mildt ubehag, og kan få øynene til å renne litt. Sonden vil samle neseceller fra overflaten av neseboret som deretter sendes til analyse. Denne metoden har blitt utført på mange voksne, barn og babyer, og har blitt veldig godt tolerert.
4. Spesiell prøvetakingssonde (SSP): Væsken for neseoverflaten kan også samles opp ved hjelp av en spesiell prøvetakingssonde eller SSP som bruker en elektrospray for å sprette dråper av neseslimhinnen. Dette vil gjøres ved kontinuerlig prøvetaking i noen timer fra et enkelt nesebor. Når du bruker denne spesielle prøvetakingssonden (SSP) i folks nese, er det en lett kilende følelse mens prøven tas. Dette kan knapt merkes.

STATISTISK ANALYSE

Fordelingen av data vil bli vurdert av ShapiroWilks-testen, som avgjør om dataene har en normal (parametrisk) eller ikke-normal (ikke-parametrisk) fordeling.

Normale data vil vises grafisk som:

• aritmetiske gjennomsnitt og standard feil på gjennomsnitt (SEM)
• eller betyr med SD-er
• eller betyr med konfidensintervaller (CI)

Ikke-normale data vil vises grafisk som:

Boks-whisker: median, kvartiler, rekkevidde

For ikke-normale data vil forskjellene fra baseline bli målt for aktivt provokasjonsmiddel (ved forskjellige doser) og placebo på hvert tidspunkt, og AUC beregnes. Forskjellene i AUC fra placebo (aktiv placebo) beregnes, og signifikansen testes med den ikke-parametriske Wilcoxon signed rank test (enkeltpopulasjon). Area under the curve (AUC) skal saksøkes over ulike definerte tider avhengig av neseprovokasjonsmiddel.