Sviluppo di modelli di sfida nasale umana con costituenti microbici e polline di graminacee

PROGETTAZIONE E METODOLOGIA DELLO STUDIO

Lo studio prevede 3 parti con diverse prove di spray nasale somministrate ai soggetti:

1. Componenti batteriche o virali, comprendenti uno dei seguenti in un particolare paziente;

   1. L'MPLA (monofosforil lipide A) assomiglia al lipopolisaccaride batterico
   2. PolyIC (acidi poliinosinici e citidilici): componente virale
   3. PolyICLC (poliIC stabilizzato con polilisina): componente virale
   4. Resiquimod: mimico virale
2. Tubercolina: derivato proteico parzialmente purificato (PPD) dal Mycobacterium bovis, il batterio che causa la tubercolosi.
3. Allergene: l'agente di sfida dello spray nasale è il polline di gramigna.

RECLUTAMENTO

L'obiettivo è quello di reclutare un totale di 174 soggetti. I soggetti saranno identificati attraverso annunci sui giornali, manifesti nel campus, servizi di medicina generale, cliniche ambulatoriali presso l'ospedale St. Mary, comprese le cliniche per la tubercolosi presso l'ospedale St. Mary. Otterremo un consenso pienamente informato. Tutti i dati saranno gestiti secondo GCP e le linee guida locali sulla governance delle informazioni.

NUMERO DI SOGGETTI E DOSAGGIO

PARTE 1: Sfida a dose ascendente nasale con costituenti microbici utilizzando MPLA, polyIC, polyICLC e resiquimod. Questo è diviso in parte A e parte B.

PARTE 1A (n=32): Studio della dose crescente incrementale basato su tollerabilità e SAM. 4 coorti di 8 volontari sani (4 su 8 con allergie a polline di graminacee, acari della polvere domestica o storia di raffreddore da fieno). Una coorte per ciascun costituente microbico. Ad ogni coorte verrà somministrato un test di controllo della soluzione salina nasale e tre dosi crescenti del test costituente microbico nasale:

• 10μg di costituente microbico in 100μl di soluzione fisiologica
• 100μg di costituente microbico in 100μl di soluzione fisiologica
• 500μg di costituente microbico in 100μl di soluzione fisiologica

PARTE 1B (n=64): dose massima singola con sonda di campionamento speciale aggiuntiva (SSP) e curettage, singola coorte di un massimo di 16 volontari sani (8 su 16 allergie a polline di graminacee, acaro della polvere, storia di raffreddore da fieno). A ciascun soggetto è stato somministrato il controllo salino e una singola dose massima dopo aver stabilito la tollerabilità e la risposta SAM.

RESIQUIMOD:

La parte B vedrà somministrare 10 μg per narice a 36 volontari:

12 asmatici allergici 12 volontari atopici 12 volontari non atopici

PARTE 2: Sfida a dose ascendente nasale con tubercolina. Questo è diviso in parte A e parte B.

PARTE 2A (n=16): Comprende un totale di 16 soggetti con TB latente (LTB), Questo gruppo è suddiviso in 4 coorti di 4 soggetti in base alla dose di tubercolina somministrata;

• 0,1 TU in 100μl, n = 4
• 1,0 TU in 100μl, n = 4
• 2.0 TU in 100μl, n = 4
• 5.0 TU in 100μl, n = 4 Ogni coorte ha solo 1 challenge. La dose iniziale è molto bassa a 0,1 TU. Se è ben tollerato, il soggetto procederà alla successiva dose più alta di 1,0 TU. Se anche questo è ben tollerato, il soggetto procederà alla successiva dose più alta di 2,0 TU e quindi alla dose più alta di 5,0 TU in questo gruppo garantendo la sicurezza dei soggetti in ogni momento.

PARTE 2B (N=16): dose massima con campionamento aggiuntivo. Questo comprende 16 persone in due gruppi (8 volontari sani e 8 soggetti con tubercolosi latente).

Gruppo 1: soggetto tubercolosi latente, n. di persone = 8 Questo gruppo riceverà la dose massima (5-10,0 TU) del test alla tubercolina. Degli 8 soggetti in ciascun gruppo, 2 riceveranno placebo (spray fittizio salino) e i restanti 6 riceveranno la sfida spray alla tubercolina.

Gruppo 2: Volontari sani, n. di persone = 8 Questo gruppo riceverà anche la dose massima (5-10,0 TU) del test alla tubercolina, previa tollerabilità. Degli 8 soggetti, 2 riceveranno il placebo (spray fittizio salino) e i restanti 6 riceveranno il test spray alla tubercolina

PARTE 3 (n=46): Sfida allergena nasale con polline di graminacee

Inizialmente verranno studiate 30 persone: un gruppo di 12 persone ha la febbre da fieno, un gruppo di 12 persone ha l'asma con allergia ai pollini di graminacee e un gruppo di 6 persone non è allergico e non ha l'asma. In un gruppo aggiuntivo, 16 persone con febbre da fieno devono essere studiate prelevando campioni continui del fluido di rivestimento nasale superficiale utilizzando una speciale sonda di campionamento (SSP) dopo la sfida con spray nasale.

1. Gruppo 1: persone con febbre da fieno, n = 12
2. Gruppo 2: persone con asma allergico, n = 12
3. Gruppo 3: persone sane, non atopiche, n = 6
4. Gruppo aggiuntivo 4: persone con febbre da fieno, n=16

PROCEDURE NASALI NELLO STUDIO

1. Lavaggio nasale (lavaggio nasale): all'inizio della giornata, i lavaggi nasali nel naso verranno eseguiti facendo passare un piccolo volume di fluido di acqua salata (soluzione salina) nel naso. Questa procedura viene eseguita prima di altre procedure per pulire il naso. Il fluido ottenuto dai lavaggi nasali viene scartato e non analizzato.
2. Assorbimento del fluido del rivestimento nasale (nasosorbimento o SAM): una piccola striscia di materiale assorbente, che sembra e si sente come carta velina morbida, verrà utilizzata per assorbire l'umidità dalla superficie interna della narice. La speciale carta assorbente verrà posizionata all'interno della narice e lasciata per un periodo di 2 minuti per assorbire il fluido del rivestimento nasale prima di essere rimossa, aspirando delicatamente il fluido come carta assorbente. Mettere la carta nel naso può solleticare e far lacrimare un po' gli occhi. Tuttavia, il nasoassorbimento non fa male e il nostro metodo si è dimostrato ben tollerato da neonati, bambini e adulti. La carta assorbe il fluido nasale e molte sostanze prodotte dalle cellule nasali possono quindi essere estratte dalla carta e misurate in laboratorio.
3. Raschiamento nasale (curettage nasale o Rhinoprobe): una piccola sonda di plastica monouso sterile verrà inserita nel naso e verrà premuta delicatamente contro il rivestimento della superficie interna della narice. La sonda lunga 3 pollici ha una piccola paletta all'estremità, che può essere appena vista. Verranno prelevati 24 minuscoli campioni da ciascuna narice (una capocchia di spillo, 2 mm, di tessuto) da una parte del naso che ha un ridotto apporto nervoso per limitare qualsiasi disagio. L'assunzione di questo campione non provoca sanguinamento, ma può causare un lieve disagio e può far lacrimare leggermente gli occhi. La sonda raccoglierà le cellule nasali dalla superficie della narice che verranno poi inviate per l'analisi. Questo metodo è stato eseguito su molti adulti, bambini e neonati ed è stato molto ben tollerato.
4. Sonda di campionamento speciale (SSP): il fluido di rivestimento della superficie nasale può anche essere raccolto utilizzando una speciale sonda di campionamento o SSP che utilizza un elettrospray per far rimbalzare le goccioline dal fluido di rivestimento nasale. Questo sarà fatto campionando continuamente per alcune ore da una singola narice. Quando si utilizza questa speciale sonda di campionamento (SSP) nel naso delle persone, si avverte una leggera sensazione di solletico durante il prelievo del campione. Questo può essere appena notato.

ANALISI STATISTICA

La distribuzione dei dati sarà valutata dal test ShapiroWilks, che determina se i dati hanno una distribuzione normale (parametrica) o non normale (non parametrica).

I dati normali verranno visualizzati graficamente come:

• medie aritmetiche ed errore standard delle medie (SEM)
• o mezzi con SD
• o medie con intervalli di confidenza (IC)

I dati non normali verranno visualizzati graficamente come:

Box-baffo: mediana, quartili, range

Per i dati non normali, le differenze rispetto al basale saranno misurate per l'agente di provocazione attivo (a dosi diverse) e il placebo in ciascun punto temporale e verrà calcolata l'AUC. Vengono calcolate le differenze nell'AUC rispetto al placebo (placebo attivo) e il significato viene testato con il Wilcoxon Signed rank test non parametrico (singola popolazione). L'area sotto la curva (AUC) deve essere citata per diversi tempi definiti a seconda dell'agente di provocazione nasale.