婴儿反复喘息：危险因素和益生菌预防。

目标

一般的

• 评估益生菌补充剂是否会降低婴儿反复喘息的频率。

具体的

• 确定婴儿反复喘息的环境和遗传因素的存在，这可能是益生菌在研究风险因素样本中影响的主要混杂因素。
• 检查益生菌对婴儿喘息复发的影响。
• 通过益生菌干预前后IL-10、IL-12和Interferon-gama的测定，评价益生菌对婴幼儿喘息免疫反应的影响。

设计研究

学习规划

• 推论，类型纵向，随机试验，双盲，平行，安慰剂对照研究。

干预措施：

• 在伯南布哥联邦大学婴儿医院就诊的患者将接受临床调查，并在获得父母或监护人的知情同意后完成基线检查才有资格参加研究。 反复喘息的婴儿，6 个月至 2 岁，将分为两组 - 一组接受益生菌配方（治疗组），另一组接受具有相似感官特征的安慰剂配方（对照组）。

随机化流程图

• 评估资格验证的患者将被随机分配并遵循 CONSORT 流程图第二指南 - 2011。

研究的实施

当地和调查期

• 伯南布哥联邦大学临床医院 - UFPE，巴西。 2014 年 4 月至 2015 年 4 月期间。

人口研究

• 样品选择方法
• 在 Infant Hospital das Clinicas UFPE 就诊的复发性喘息婴儿的样本选择，被认为有资格参加研究并符合纳入和排除标准。 被选为符合研究条件的喘息婴儿即使使用吸入性皮质类固醇仍会喘息。

随机化类型和分配机制

• 患者的简单随机化将通过抽取数字 1 - 60 进行。

随机化由第三方使用计算机上的随机化程序进行。

随机数的顺序、患者的招募和分配将由研究的主要研究者进行干预。

样本量

• 样本量计算基于益生菌和哮喘的两项研究，而低于 5% 的水平、80% 的功效研究和高达 20% 的可接受误差，60 名患者的显着性足以分析数量婴儿喘息的预期效果评估并拒绝或接受原假设。

操作步骤

• 被认为有资格参加研究的婴儿将获得由其父母和/或监护人签署的自由和知情同意书以参加研究。

这些最初就诊的患者应接受带有问答 QE - EISL（与父母或监护人的技术面谈）的体检方案，并立即对主要空气过敏原和食物过敏原（螨虫、猫狗上皮、霉菌、羽毛、蟑螂、蛋黄、蛋清和牛奶蛋白）通过皮肤点刺试验和胸片。

患者在开始服用益生菌或安慰剂之前，会先确定细胞因子 IL-10、IL-12 和 INF-γ、IgE 和嗜酸性粒细胞的剂量。

喘息婴儿将使用吸入性皮质类固醇倍氯米松 50mcg - 每天 02 次（100mcg - 直径），免费发现此药物，品牌名称和规格：Clenil HFA 50mcg 喷雾 200 剂作为该年龄组喘息的初始和基本治疗，剂量被认为是最小的。

该配方含有益生菌，每克含有 10 CFU（菌落形成单位）/g 乳酸杆菌、乳球菌、链球菌、酵母菌和醋杆菌类型的益生菌菌株，浓度适当。 它将以冻干形式提供，每袋含 1 克益生菌，可在每日第一顿早餐中与牛奶、果汁或酸奶一起使用。 安慰剂将以相同的方式提供，具有与益生菌配方相同的感官特征。

在此期间，婴儿出现喘息危机，父母或监护人将记录喘息发作的日期和以标准化形式使用的开放式答案的治疗，将提供，并将通过电话与研究人员联系。 父母或监护人将收到每日控制记录，以评估喘息发作的发生。

使用益生菌八周后，婴儿将接受新的细胞因子 IL-10、IL-12 和干扰素-γ 测量，目的是评估两组益生菌的免疫反应。

在每个时期之前和结束时，患者将接受身体检查并与父母或监护人面谈，以评估喘息发作的发生。

将对这些数据进行分析，以评估补充益生菌是否会降低婴儿喘息的频率。

屏蔽和分配机制

该研究的第三名成员将在研究者和患者不知情的情况下，根据随机分组的数量为益生菌和安慰剂接受者分配一个数字。 容器应相同，并盛装具有相同感官特性的物质。 容器将按数字顺序提供，作为服务和先前的随机化。

仪器测量和评估

QE- EISL：书面问卷（国际婴儿喘息研究）​​——见附录 01，这是一个由 45 个问题组成的关于人口统计学特征、喘息及其潜在危险因素的工具。 最初用西班牙语开发，被翻译成葡萄牙语（巴西）并经过验证。 该协议将与由研究人员、父母或监护人进行的技术访谈一起使用，包括封闭式问题和答案。

知情同意书 (ICF) 声明 - 参见 apêncice 02 - 在批准让他们的孩子参与研究后。

控制插件 - 临床 - 见附录 03：将被父母或监护人用来描述日期、“喘息”和感知治疗需要，同时使用益生菌或安慰剂（08 周）和 08 周以上。

点刺试验：将使用标准化提取物双喜氯草组胺 (10mg/ml) 和 0.9% 盐水（FDA - Immunotech，巴西里约热内卢）。 将提取物滴于前臂掌侧，然后用消毒过的柳叶刀进行一次穿刺。 作为阳性对照，我们使用组胺和阴性盐水对照。 15分钟后评估每个反应的直径，如果风团≥3mm阴性对照，则结果表示为阳性。

嗜酸性粒细胞计数和血清总IgE用量：用有资质的专业实验室采集外周血，7.0ml。 参考值适合于实验室的年龄和标准化。

胸片：在 Hospital das Clinicals - UFPE 的放射科进行。

IL-10、IL-12和干扰素-gama的用量：5.0 ml，装在有资质的专业实验室外周血采集容器中。 这种血液将被带到 Ageu Magalhães 实验室，进行离心分离，并通过外周血单核细胞 (PBMC) 的上清液进行检测，即血清中细胞因子的计数。 然后将这些细胞培养 48 小时，随后进行细胞因子 IL-10、IL-12 和干扰素-γ 的计数。

从治疗组和安慰剂组的患者中收集浓度为 1 x 106 个细胞/mL 的外周血单核细胞，并与植物凝集素（PHA；10μg/ml）一起孵育 48 小时。 将使用酶联免疫吸附测定 (ELISA) 试剂盒分析培养物上清液中 IL-10、IL-12 和干扰素-γ 的产生。 这些细胞因子的检测限为 5ρg/ml。

统计分析

数据分析的统计方法

• 对于统计分析最初，执行概率分布（百分比分析）。 随后，分别通过 ShapiroWillks 和 bartlett 检验的正态分布和方差齐性技术将应用于表征参数学生 t 检验或 Manny Whitney 对独立样本的使用。 对于分类变量，将使用与 Yates 校正关联的卡方检验。 数据表示为平均值和标准偏差（参数检验）或中值和标准误差（非参数检验），显着性水平为 p < 0.05。 21 for Windows 2011 - 要生成分析，将使用统计包 SPSS。