Рецидивирующие свистящие хрипы у младенцев: факторы риска и профилактика с помощью пробиотиков.

ЦЕЛИ

ОБЩИЙ

• Оцените, снижает ли добавление пробиотиков частоту рецидивирующих свистящих хрипов у младенцев.

СПЕЦИФИЧЕСКИЙ

• Выявление наличия экологических и генетических факторов, вызывающих рецидивирующие хрипы у младенцев, которые могут служить основными искажающими факторами эффекта пробиотиков в выборке изучаемых факторов риска.
• Проверьте действие пробиотиков по мере рецидива хрипов у младенцев.
• Оценить влияние пробиотиков на иммунный ответ при хрипах у младенцев путем измерения ИЛ-10, ИЛ-12 и интерферона-гама до и после вмешательства с использованием пробиотиков.

ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ

Дизайн исследования

• Инференциальное, по типу продольное, рандомизированное исследование, двойное слепое, параллельное, плацебо-контролируемое исследование.

Предстоящее вмешательство:

• Пациенты, посещаемые в Детской больнице Федерального университета Пернамбуку, будут проходить клиническое обследование, и завершение исходных обследований имеет право участвовать в исследовании после информированного согласия родителей или опекунов. Младенцы с рецидивирующим свистящим дыханием в возрасте от шести месяцев до двух лет будут разделены на две группы: одна получает смесь с пробиотиками (группа лечения) и другая смесь с аналогичными органолептическими характеристиками, плацебо (контрольная группа).

Блок-схема рандомизации

• Пациенты, оцениваемые для проверки соответствия требованиям, будут рандомизированы и будут следовать блок-схеме второго руководства CONSORT - 2011.

ВЫПОЛНЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

Локальный и обзорный период

• Hospital das Clinicals, Федеральный университет Пернамбуку – UFPE, Бразилия. Период с апреля 2014 года по апрель 2015 года.

Популяционные исследования

• Метод отбора проб
• Выборочная выборка младенцев с рецидивирующими свистящими хрипами, посещаемых детской больницей das Clinicas UFPE, которые считаются подходящими для включения в исследование и соответствуют критериям включения и исключения. У младенцев с хрипами, отобранных как подходящие для исследования, свистящие хрипы сохранялись даже при использовании ингаляционных кортикостероидов.

Тип рандомизации и механизм распределения

• Простая рандомизация пациентов будет проводиться путем жеребьевки номеров от 1 до 60.

Рандомизация проводилась третьим лицом, которое использовало программу рандомизации на компьютере.

Последовательность случайных чисел, набор и распределение пациентов для вмешательства будет проводиться главным исследователем исследования.

Размер образца

• Расчет размера выборки был основан на двух исследованиях пробиотиков и астмы, тогда как уровень менее 5%, мощность исследования 80% и допустимая ошибка до 20%, значимость 60 пациентов может быть достаточной для анализа количества оценка желаемого эффекта хрипов у младенцев и отклонение или принятие нулевой гипотезы.

Этапы операционализации

• Младенцы, признанные подходящими для участия в исследовании, должны иметь свободное и информированное согласие на участие в исследовании, подписанное их родителями и/или опекунами.

Эти первично посещаемые пациенты должны пройти протокол медицинского осмотра с вопросами и ответами QE - EISL (техническое интервью с родителями или опекунами) и достижение немедленной кожной пробы на чувствительность к основным аэроаллергенам и пищевым аллергенам (клещи, кошачий и собачий эпителий, плесневые грибы, перья, тараканы, яичный желток, яичный белок и белки коровьего молока) с помощью прик-теста и рентгенографии грудной клетки.

Пациентам перед началом приема пробиотиков или плацебо назначают дозировку цитокинов ИЛ-10, ИЛ-12 и ИНФ-гамма, IgE и эозинофилов.

Младенцы с одышкой будут использовать ингаляционный кортикостероид беклометазон 50 мкг - 02 струи в день (100 мкг - диам.), нашел это лекарство бесплатно, торговая марка и спецификации: Clenil HFA 50 мкг спрей 200 доз в качестве начального и основного лечения хрипов в этой возрастной группе, в дозах, считающихся минимальными.

Формула с пробиотиками, содержащая 10 КОЕ (колониеобразующих единиц)/г консорциума пробиотических штаммов лактобацилл, лактококков, стрептококков, дрожжей и ацетобактерий в соответствующих концентрациях на грамм. Он будет поставляться в лиофилизированной форме, в каждом пакетике, содержащем 1 г пробиотика, для использования в дополнение к молоку, соку или йогурту во время первого утреннего приема пищи один раз в день. Плацебо будет поставляться таким же образом с такими же органолептическими характеристиками смеси с пробиотиками.

В течение этого периода у младенца с хрипом присутствует кризис, родители или опекуны отметят день приступа хрипов и лечение, используемое в стандартизированной форме с открытыми ответами, которые будут предоставлены, и свяжутся с вами по телефону, с исследователем. Родители или опекуны будут получать ежедневную запись о контроле, чтобы оценить возникновение приступов свистящего дыхания.

После восьми недель использования пробиотиков у младенцев будут проведены новые измерения цитокинов IL-10, IL-12 и интерферона-гама с целью оценки иммунного ответа на пробиотики в обеих группах.

До и в конце каждого периода пациент проходит физикальное обследование, а его родители или опекуны проводят собеседование, чтобы оценить возникновение приступов свистящего дыхания.

Эти данные будут проанализированы, чтобы оценить, снижает ли добавление пробиотиков частоту хрипов у младенцев.

Маскировка и механизм распределения

Третий участник исследования будет присваивать номера получателям пробиотиков и плацебо в соответствии с номерами рандомизации без ведома исследователя и пациента. Тара должна быть одинаковой и содержать вещества с одинаковыми органолептическими характеристиками. Контейнеры будут предоставляться по порядку номеров, по мере обслуживания и предыдущей рандомизации.

Инструменты измерения и оценки

QE-EISL: письменный вопросник (Международное исследование хрипов у младенцев) — см. Приложение 01, которое представляет собой инструмент, состоящий из 45 вопросов о демографических характеристиках, хрипах и их потенциальных факторах риска. Первоначально разработанная на испанском языке, она была переведена на португальский (бразильский) язык и утверждена. Этот протокол будет использоваться с закрытыми вопросами с ответами, используя техническое интервью, проводимое исследователем, родителями или опекунами.

Форма Заявления об информированном согласии (ICF) — см. Приложение 02 — после его одобрения на участие их детей в исследовании.

Контрольная пробка — клиническая — см. Приложение 03: будет использоваться родителями или опекунами для описания даты, «хрипов» и предполагаемой потребности в лечении при использовании пробиотика или плацебо (08 недель) и еще 08 недель.

Прик-тест: будут использоваться стандартизированные экстракты дигидрогистамина (10 мг/мл) и 0,9% солевой раствор (FDA – Immunotech, Рио-де-Жанейро, Бразилия). Экстракты будут капать на ладонную поверхность предплечья, а затем выполнять один прокол стерильным ланцетом. В качестве положительного контроля использовали гистамин и отрицательный физиологический контроль. Диаметр каждой реакции оценивают через 15 минут, и результат выражается как положительный, если волдырь ≥ 3 мм в отрицательном контроле.

Подсчет эозинофилов и общий сывороточный IgE. Дозировка: проводится в сосуде для сбора периферической крови квалифицированной профессиональной лабораторией в количестве 7,0 мл. Референтные значения соответствуют возрасту и стандартизации лаборатории.

Рентгенография грудной клетки: проводится в рентгенологическом отделении Hospital das Clinicals — UFPE.

Доза ИЛ-10, ИЛ-12 и Интерферона-гама: будет проведена в сосуде для сбора периферической крови квалифицированной профессиональной лабораторией в количестве 5,0 мл. Эта кровь будет доставлена ​​в лабораторию Ageu Magalhães, где будет проведено центрифугирование и проведено супернатант мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC), количество цитокинов в сыворотке. Затем проводят культивирование этих клеток в течение 48 часов и последующий подсчет цитокинов ИЛ-10, ИЛ-12 и Интерферон-гама.

Мононуклеарные клетки периферической крови в концентрации 1×106 клеток/мл собирают у пациентов группы лечения и группы плацебо и инкубируют с фитогемаглютинином (ФГА; 10 мкг/мл) в течение 48 часов. Продуцирование IL-10, IL-12 и интерферона-гама в культуральном супернатанте будет проанализировано с использованием наборов для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Предел обнаружения для этих цитокинов составляет 5 ρг/мл.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

Статистические методы анализа данных

• Для статистического анализа Сначала выполняется распределение вероятностей (процентный анализ). Впоследствии методы нормального распределения и однородности дисперсий с помощью тестов Шапиро-Уиллкса и Бартлетта соответственно будут применяться для характеристики использования параметрических t-критериев Стьюдента или Мэнни-Уитни для независимых выборок. Для категориальных переменных будет использоваться критерий хи-квадрат для связи с поправкой Йейтса. Данные выражены в виде среднего значения и стандартного отклонения (параметрический тест) или медианы и стандартной ошибки (непараметрический тест) с уровнем значимости p<0,05. 21 для Windows 2011 - для генерации анализа будет использоваться статистический пакет SPSS.