Terugkerende piepende ademhaling bij zuigelingen: risicofactoren en preventie met probiotica.

DOELSTELLINGEN

ALGEMEEN

• Beoordeel of suppletie met probiotica de frequentie van terugkerende piepende ademhaling bij zuigelingen vermindert.

SPECIFIEK

• Identificatie van de aanwezigheid van omgevings- en genetische factoren voor terugkerende piepende ademhaling bij zuigelingen, die kunnen dienen als belangrijke verstorende factoren voor het effect van probiotica in de onderzochte risicofactoren.
• Controleer het effect van probiotica als de herhaling van piepende ademhaling bij zuigelingen.
• Evalueer de effecten van probiotica op de immuunrespons van het piepende kind door de meting van IL-10, IL-12 en Interferon-gama voor en na interventie met het gebruik van probiotica.

ONTWERP ONDERZOEK

Ontwerp ontwerpen

• Inferentieel, het type longitudinaal, gerandomiseerd onderzoek, dubbelblind, parallel, placebogecontroleerd onderzoek.

Interventie te houden:

• Patiënten die in het kinderziekenhuis van de Federale Universiteit van Pernambuco zijn opgenomen, ondergaan een klinisch onderzoek en de afronding van basisonderzoeken komt in aanmerking voor deelname aan het onderzoek na geïnformeerde toestemming van ouders of voogden. Baby's met terugkerende piepende ademhaling, zes maanden tot twee jaar oud, zullen in twee groepen worden verdeeld - de ene krijgt de formule met probiotica (behandelingsgroep) en de andere formule met vergelijkbare organoleptische kenmerken, placebo (controlegroep).

Stroomschema van randomisatie

• Patiënten die zijn beoordeeld voor geschiktheidsverificatie worden gerandomiseerd en volgen het CONSORT-stroomschema tweede gids - 2011.

UITVOERING VAN ONDERZOEK

Lokale en enquêteperiode

• Hospital das Clinicals, Federale Universiteit van Pernambuco - UFPE, Brazilië. Periode april 2014 tot april 2015.

Bevolkingsonderzoek

• Wijze van selectie van monster
• Steekproefselectie van terugkerende piepende baby's die werden bijgewoond in het Infant Hospital das Clinicas UFPE, om in aanmerking te komen voor toelating tot het onderzoek en te voldoen aan de criteria voor opname en uitsluiting. De piepende baby's die werden geselecteerd om in aanmerking te komen voor het onderzoek, bleven piepen, zelfs als ze inhalatiecorticosteroïden gebruikten.

Type randomisatie- en toewijzingsmechanisme

• Een eenvoudige randomisatie van patiënten is door middel van trekking van de nummers 1 - 60.

Randomisatie werd uitgevoerd door een derde persoon die een randomisatieprogramma op de computer gebruikte.

De volgorde van willekeurige getallen, werving en toewijzing van patiënten aan de interventie door de hoofdonderzoeker van de studie zal worden uitgevoerd.

Steekproefgrootte

• De berekening van de steekproefomvang was gebaseerd op twee studies over probiotica en astma, terwijl een niveau van minder dan 5%, een powerstudie van 80% en een aanvaardbare fout van maximaal 20%, de significantie van 60 patiënten voldoende kan zijn om het aantal evaluatie van het gewenste effect van piepende ademhaling bij zuigelingen en verwerp of accepteer de nulhypothese.

Operationele stappen

• De baby's die geschikt werden geacht voor het onderzoek, krijgen de vrije en geïnformeerde toestemming om deel te nemen aan het onderzoek, ondertekend door hun ouders en/of voogden.

Deze patiënten die aanvankelijk werden bezocht, ondergaan een medisch onderzoeksprotocol met vragen en antwoorden QE - EISL (technisch interview met de ouders of voogden) en het bereiken van een onmiddellijke huidtestgevoeligheid voor belangrijke aeroallergenen en voedselallergenen (mijten, katten- en hondenepitheel, schimmels, veren, kakkerlakken, eigeel, eiwit en koemelkeiwitten) via de huidpriktest en thoraxfoto.

Patiënten moeten vóór het starten met probiotica of placebo's de dosering van de cytokines IL-10, IL-12 en INF-gamma, IgE en eosinofielen nemen.

De piepende baby's gebruiken de inhalatiecorticosteroïde beclomethason 50mcg - 02 stralen per dag (100mcg - dia), vonden dit medicijn gratis, merknaam en specificaties: Clenil HFA 50mcg spray 200 doses als initiële en fundamentele behandeling voor piepende ademhaling in deze leeftijdsgroep, bij doses die als minimaal worden beschouwd.

De formule met probiotica met 10 CFU (Colony Forming Unit)/g consortium van probiotische stammen van lactobacilli, lactococcus, streptococcus, gisten en acetobacter type in geschikte concentraties per gram. Het wordt geleverd in gelyofiliseerde vorm, in elk sachet met 1 g van het probioticum, om eenmaal daags naast melk, sap of yoghurt te gebruiken bij de eerste ochtendmaaltijd. De placebo wordt op dezelfde manier geleverd met dezelfde organoleptische kenmerken van formule met probiotica.

Gedurende deze periode, wanneer de baby een piepende ademhaling heeft, zullen de ouders of voogden de dag van de piepende aanvallen en de behandeling noteren in een gestandaardiseerde vorm met open antwoorden, die zullen worden verstrekt, en zullen telefonisch contact met u opnemen met de onderzoeker. Ouders of voogden ontvangen dagelijks een controlerapport om het optreden van piepende ademhalingsaanvallen te beoordelen.

Na acht weken gebruik van probiotica ondergaan zuigelingen een nieuwe meting van cytokines IL-10, IL-12 en Interferongama, met als doel de immuunrespons van probiotica in beide groepen te evalueren.

Voor en aan het einde van elke periode zal de patiënt een lichamelijk onderzoek ondergaan en zullen de ouders of voogden een interview afnemen om het optreden van piepende ademhaling te beoordelen.

Deze gegevens zullen worden geanalyseerd om te beoordelen of suppletie met probiotica de frequentie van piepende ademhaling bij zuigelingen vermindert.

Maskerings- en toewijzingsmechanisme

Een derde lid van de studie zal een nummer toekennen aan ontvangers van probiotica en placebo's in overeenstemming met de aantallen van randomisatie, zonder medeweten van de onderzoeker en de patiënt. Containers moeten gelijk zijn en stoffen met dezelfde organoleptische kenmerken bevatten. De containers worden geleverd in numerieke volgorde, als service en voorafgaande randomisatie.

Instrumenten Meting en beoordelingen

QE-EISL: schriftelijke vragenlijst (International Study of Wheezing in Infants) - zie bijlage 01, een instrument bestaande uit 45 vragen over demografische kenmerken, piepende ademhaling en de mogelijke risicofactoren. Oorspronkelijk ontwikkeld in het Spaans, vertaald in het Portugees (Braziliaans) en gevalideerd. Dit protocol wordt gebruikt bij gesloten vragen met antwoorden, waarbij gebruik wordt gemaakt van het technisch interview, afgenomen door de onderzoeker, de ouders of verzorgers.

Verklaring van geïnformeerde toestemming (ICF) - zie bijlage 02 - na goedkeuring daarvan om hun kinderen aan het onderzoek te laten deelnemen.

Controleplug - klinisch - zie bijlage 03: wordt gebruikt door ouders of verzorgers om de datum, "piepende ademhaling" en waargenomen behandelingsbehoefte te beschrijven, tijdens het gebruik van het probioticum of placebo (08 weken) en 08 weken meer.

Priktest: er worden gestandaardiseerde extracten dihiclorada histamine (10mg/ml) en 0,9% zoutoplossing (FDA - Immunotech, Rio de Janeiro, Brazilië) gebruikt. De extracten worden op het handpalmoppervlak van de onderarm gedruppeld en vervolgens wordt er één punctie uitgevoerd met een steriel lancet. Als positieve controle hebben we histamine en negatieve zoutcontrole. De diameter van elke reactie wordt na 15 minuten beoordeeld en het resultaat wordt als positief uitgedrukt als de kwaddel ≥ 3 mm negatieve controle is.

Aantal eosinofielen en totaal IgE-serum Dosering: wordt gehouden in een perifeer bloedafnamevat met een gekwalificeerd professioneel laboratorium, in een hoeveelheid van 7,0 ml. De referentiewaarden zijn geschikt voor leeftijd en standaardisatie van laboratorium.

Borstradiografie: gehouden op de afdeling radiologie van het Hospital das Clinicals - UFPE.

Dosering van IL-10, IL-12 en Interferon-gama: wordt gehouden in een perifeer bloedafnamevat met een gekwalificeerd professioneel laboratorium in een hoeveelheid van 5,0 ml. Dit bloed zal naar het Ageu Magalhães-laboratorium worden gebracht, dat zal worden onderworpen aan centrifugatie en uitgevoerd door het supernatant van perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC), het tellen van cytokines in serum. Vervolgens wordt het kweken van deze cellen gedurende 48 uur uitgevoerd en vervolgens wordt het tellen van cytokine IL-10, IL-12 en Interferongama uitgevoerd.

De perifere mononucleaire bloedcellen in een concentratie van 1 x 106 cellen/ml worden verzameld van de patiënten van de behandelingsgroep en de placebogroep en worden gedurende 48 uur geïncubeerd met fytohemaglutinine (PHA; 10 μg/ml). De productie van IL-10, IL-12 en Interferon-gama in kweeksupernatant zal worden geanalyseerd met behulp van enzym-gekoppelde immunosorbent assay (ELISA) kits. De detectiegrens voor deze cytokines zal 5ρg/ml zijn.

STATISTISCHE ANALYSE

Statistische methoden voor gegevensanalyse

• Voor statistische analyse In eerste instantie wordt een kansverdeling (procentanalyse) uitgevoerd. Vervolgens zullen de technieken van normale verdeling en homogeniteit van varianties door middel van respectievelijk ShapiroWillks en Bartlett-testen worden toegepast om het gebruik van de parametrische Student's t-test of Manny Whitney voor onafhankelijke steekproeven te karakteriseren. Voor categorische variabelen wordt de chikwadraattoets voor associatie met Yates-correctie gebruikt. Gegevens worden uitgedrukt als gemiddelde en standaarddeviatie (parametrische test) of mediaan en standaardfout (niet-parametrische test) met een significantieniveau van p < 0,05. 21 voor Windows 2011 - voor het genereren van de analyses wordt gebruik gemaakt van het statistische pakket SPSS.