Nawracające świszczący oddech u niemowląt: czynniki ryzyka i zapobieganie za pomocą probiotyków.

CELE

OGÓLNY

• Ocena, czy suplementacja probiotykami zmniejsza częstość nawracających świszczących oddechów u niemowląt.

KONKRETNY

• Identyfikacja obecności czynników środowiskowych i genetycznych na nawracające świszczące oddechy u niemowląt, które mogą być głównymi czynnikami zakłócającymi działanie probiotyków w badanej próbie czynników ryzyka.
• Sprawdź wpływ probiotyków na nawroty świszczącego oddechu u niemowląt.
• Ocena wpływu probiotyków na odpowiedź immunologiczną świszczącego oddechu u niemowląt poprzez pomiar IL-10, IL-12 i interferonu-gama przed i po interwencji z zastosowaniem probiotyków.

BADANIA PROJEKTOWE

Projekt badania

• Wnioskowanie, typu podłużne, randomizowane badanie, podwójnie ślepe, równoległe badanie kontrolowane placebo.

Interwencja, która ma się odbyć:

• Pacjenci hospitalizowani w Szpitalu Dziecięcym Uniwersytetu Federalnego w Pernambuco zostaną poddani badaniu klinicznemu, a ukończenie podstawowych badań jest uprawnione do udziału w badaniu po uzyskaniu świadomej zgody rodziców lub opiekunów. Niemowlęta z nawracającymi świszczącymi oddechami, w wieku od sześciu miesięcy do dwóch lat, zostaną podzielone na dwie grupy – jedną otrzymującą mieszankę z probiotykami (grupa leczona) i drugą mieszankę o podobnych właściwościach organoleptycznych, placebo (grupa kontrolna).

Schemat blokowy randomizacji

• Pacjenci oceniani pod kątem weryfikacji kwalifikowalności zostaną przydzieleni losowo i będą postępować zgodnie ze schematem blokowym CONSORT drugi Przewodnik – 2011.

REALIZACJA BADAŃ

Okres lokalny i badawczy

• Hospital das Clinicals, Uniwersytet Federalny Pernambuco – UFPE, Brazylia. Okres od kwietnia 2014 do kwietnia 2015.

Badania populacji

• Metoda doboru próby
• Wybór próby niemowląt z nawracającymi świszczącymi oddechami przyjmowanych do szpitala dla niemowląt das Clinicas UFPE, aby zostały uznane za kwalifikujące się do przyjęcia do badania i spełniające kryteria włączenia i wyłączenia. Świszczące niemowlęta wybrane jako kwalifikujące się do badania nadal miały świszczący oddech nawet przy stosowaniu wziewnych kortykosteroidów.

Rodzaj mechanizmu randomizacji i alokacji

• Prosta randomizacja pacjentów będzie polegała na losowaniu liczb od 1 do 60.

Randomizacja została przeprowadzona przez osobę trzecią, która korzystała z programu do randomizacji na komputerze.

Przeprowadzona zostanie kolejność losowania liczb, rekrutacja i przydział pacjentów do interwencji przez głównego badacza badania.

Wielkość próbki

• Obliczenia wielkości próby oparto na dwóch badaniach dotyczących probiotyków i astmy, podczas gdy poziom poniżej 5%, badanie mocy 80% i dopuszczalny błąd do 20%, istotność 60 pacjentów może być wystarczająca do przeanalizowania liczby oceny pożądanego efektu świszczącego oddechu u niemowląt i odrzucenia lub przyjęcia hipotezy zerowej.

Etapy operacjonalizacji

• Niemowlęta zostały uznane za kwalifikujące się do badania, będą miały dobrowolną i świadomą zgodę na udział w badaniu podpisaną przez rodziców i/lub opiekunów.

Pacjenci ci początkowo objęci, zostaną poddani protokołowi badania lekarskiego z pytaniami i odpowiedziami QE - EISL (wywiad techniczny z rodzicami lub opiekunami) oraz uzyskaniu natychmiastowego testu wrażliwości skóry na główne alergeny wziewne i pokarmowe (roztocza, nabłonek kotów i psów, pleśnie, piór, karaluchów, żółtka jaj, białek jaj i białek mleka krowiego) za pomocą punktowego testu skórnego i radiografii klatki piersiowej.

Pacjenci przed rozpoczęciem probiotyków lub placebo będą dawkować cytokiny IL-10, IL-12 i INF-gamma, IgE i eozynofile.

Świszczące niemowlęta będą stosować wziewny kortykosteroid beklometazon 50mcg - 02 strumienie dziennie (100mcg - dia), znalazł ten lek za darmo, nazwa handlowa i specyfikacje: Clenil HFA 50mcg spray 200 dawek jako początkowe i podstawowe leczenie świszczącego oddechu w tej grupie wiekowej, w dawkach uważanych za minimalne.

Formuła z probiotykami zawierająca 10 CFU (Colony Forming Unit)/g konsorcjum szczepów probiotycznych pałeczek kwasu mlekowego, laktokoków, paciorkowców, drożdży i acetobacter w odpowiednich stężeniach na gram. Będzie dostarczany w postaci liofilizowanej, w każdej saszetce zawierającej 1 g probiotyku, do stosowania jako dodatek do mleka, soku lub jogurtu w pierwszym porannym posiłku raz dziennie. Placebo będzie dostarczane w ten sam sposób o takich samych właściwościach organoleptycznych jak formuła z probiotykami.

W tym okresie świszczący oddech u niemowlęcia obecny kryzys, rodzice lub opiekunowie odnotują dzień napadu świszczącego oddechu i zastosowane leczenie w wystandaryzowanej formie z otwartymi odpowiedziami, które zostaną udzielone i skontaktują się z Tobą telefonicznie z badaczem. Rodzice lub opiekunowie otrzymają dzienny zapis kontroli, aby ocenić występowanie napadów świszczącego oddechu.

Po ośmiu tygodniach stosowania probiotyków niemowlęta zostaną poddane nowym pomiarom cytokin IL-10, IL-12 i interferonu-gama, w celu oceny odpowiedzi immunologicznej probiotyków w obu grupach.

Przed i na koniec każdej miesiączki pacjentka zostanie poddana badaniu przedmiotowemu, a rodzice lub opiekunowie zostaną przesłuchani w celu oceny występowania napadów świszczącego oddechu.

Dane te zostaną przeanalizowane w celu oceny, czy suplementacja probiotykami zmniejsza częstość występowania świszczącego oddechu u niemowląt.

Mechanizm maskowania i alokacji

Trzeci członek badania przypisze numer probiotykom i biorcom placebo zgodnie z numerami randomizacji, bez wiedzy badacza i pacjenta. Pojemniki powinny być równe i zawierać substancje o takich samych właściwościach organoleptycznych. Kontenery będą dostarczane w kolejności numerycznej, jako usługa i uprzednia randomizacja.

Pomiary i oceny przyrządów

QE-EISL: kwestionariusz pisemny (International Study of Wheezing in Infants) – patrz Załącznik 01, który jest narzędziem składającym się z 45 pytań dotyczących charakterystyki demograficznej, świszczącego oddechu i jego potencjalnych czynników ryzyka. Pierwotnie opracowany w języku hiszpańskim, został przetłumaczony na portugalski (brazylijski) i zatwierdzony. Protokół ten będzie stosowany przy pytaniach zamkniętych z odpowiedziami, z wykorzystaniem wywiadu technicznego, prowadzonego przez badacza, rodziców lub opiekunów.

Formularz oświadczenia o świadomej zgodzie (ICF) – patrz apêncice 02 – po zatwierdzeniu udziału ich dzieci w badaniu.

Korek kontrolny – kliniczny – patrz Załącznik 03: będzie używany przez rodziców lub opiekunów do opisania daty, „świszczącego oddechu” i odczuwanej potrzeby leczenia, podczas stosowania probiotyku lub placebo (08 tydzień) i 08 tydzień więcej.

Test punktowy: użyte zostaną standaryzowane ekstrakty dihiclorady histaminy (10 mg/ml) i 0,9% soli fizjologicznej (FDA – Immunotech, Rio de Janeiro, Brazylia). Wyciągi będą kapane na powierzchnię dłoniową przedramienia, a następnie wykonywane jedno nakłucie sterylnym lancetem. Jako kontrolę pozytywną stosujemy histaminę i negatywną kontrolę soli fizjologicznej. Średnica każdej reakcji zostanie oceniona po 15 minutach, a wynik zostanie uznany za pozytywny, jeśli bąbel ≥ 3 mm kontroli negatywnej.

Liczba eozynofilów i całkowita surowica IgE Dawkowanie: odbędzie się w naczyniu do pobierania krwi obwodowej z wykwalifikowanym profesjonalnym laboratorium, w ilości 7,0 ml. Wartości odniesienia są odpowiednie do wieku i standaryzacji laboratorium.

RTG klatki piersiowej: wykonywane na oddziale radiologii Hospital das Clinicals - UFPE.

Dawka IL-10, IL-12 i Interferon-gama: będzie przechowywana w naczyniu do pobierania krwi obwodowej z wykwalifikowanym profesjonalnym laboratorium w ilości 5,0 ml. Krew ta zostanie przewieziona do Laboratorium Ageu Magalhães, które zostanie poddane odwirowaniu i wykonaniu supernatantu jednojądrzastych komórek krwi obwodowej (PBMC), zliczenia cytokin w surowicy. Następnie przeprowadza się hodowlę tych komórek przez 48 godzin, a następnie zlicza cytokiny IL-10, IL-12 i interferon-gama.

Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej w stężeniu 1 x 106 komórek/ml pobiera się od pacjentów z grupy leczonej iz grupy placebo i inkubuje z fitohemaglutyniną (PHA; 10 μg/ml) przez 48 godzin. Produkcja IL-10, IL-12 i interferonu-gama w supernatancie hodowli będzie analizowana przy użyciu zestawów do testów immunoenzymatycznych (ELISA). Granica wykrywalności dla tych cytokin będzie wynosić 5ρg/ml.

ANALIZA STATYSTYCZNA

Statystyczne metody analizy danych

• Do analizy statystycznej Na początku przeprowadzany jest rozkład prawdopodobieństwa (analiza procentowa). Następnie techniki rozkładu normalnego i jednorodności wariancji za pomocą odpowiednio testów ShapiroWillksa i Bartletta zostaną zastosowane do scharakteryzowania wykorzystania parametrycznych testów t-Studenta lub Manny'ego Whitneya dla prób niezależnych. Dla zmiennych kategorycznych zastosowany zostanie test chi-kwadrat na związek z poprawką Yatesa. Dane wyrażono jako średnią i odchylenie standardowe (test parametryczny) lub medianę i błąd standardowy (test nieparametryczny) z poziomem istotności p < 0,05. 21 dla Windows 2011 - do generowania analiz zostanie wykorzystany pakiet statystyczny SPSS.