Tilbagevendende hvæsen hos spædbørn: Risikofaktorer og forebyggelse med probiotika.

MÅL

GENEREL

• Vurder, om probiotisk tilskud reducerer hyppigheden af ​​tilbagevendende hvæsen hos spædbørn.

BESTEMT

• Identifikation af tilstedeværelsen af ​​miljømæssige og genetiske faktorer til tilbagevendende hvæsende vejrtrækning hos spædbørn, hvilket kan tjene som væsentlige konfoundere af virkningen af ​​probiotika i prøven undersøgte risikofaktorer.
• Tjek effekten af ​​probiotika som tilbagevenden af ​​hvæsende vejrtrækning hos spædbørn.
• Evaluer virkningerne af probiotika på immunreaktionen af ​​spædbarnets hvæsende vejrtrækning gennem måling af IL-10, IL-12 og Interferon-gama før og efter intervention med brug af probiotika.

DESIGN FORSKNING

Studere design

• Inferentiel, typen longitudinelle, randomiserede undersøgelse, dobbeltblind, parallel, placebokontrolleret undersøgelse.

Intervention, der skal afholdes:

• Patienter, der besøges på spædbørnshospitalet på Federal University of Pernambuco, vil gennemgå en klinisk undersøgelse, og færdiggørelse af baseline-undersøgelser er berettiget til at deltage i undersøgelsen efter informeret samtykke fra forældre eller værger. Spædbørn med tilbagevendende hvæsen i alderen seks måneder til to år vil blive opdelt i to grupper - den ene får modermælkserstatningen med probiotika (behandlingsgruppe) og den anden modermælkserstatning med lignende organoleptiske egenskaber, placebo (kontrolgruppen).

Flowchart over randomisering

• Patienter, der vurderes til berettigelsesverifikation, vil blive randomiseret og følge CONSORT flowcharts anden vejledning - 2011.

GENNEMFØRELSE AF FORSKNING

Lokal- og undersøgelsesperiode

• Hospital das Clinicals, Federal University of Pernambuco - UFPE, Brasilien. Periode april 2014 til april 2015.

Befolkningsforskning

• Metode til udvælgelse af prøve
• Prøveudvælgelse af tilbagevendende hvæsende spædbørn, der blev besøgt på Infant Hospital das Clinicas UFPE, for at blive betragtet som kvalificerede til optagelse i undersøgelsen og opfylde kriterierne for inklusion og udelukkelse. De hvæsende spædbørn, der blev udvalgt som kvalificerede til undersøgelsen, forblev med hvæsen selv ved brug af inhalerede kortikosteroider.

Type af randomiserings- og tildelingsmekanisme

• En simpel randomisering af patienter vil være ved lodtrækning af tallene 1 - 60.

Randomisering blev udført af en tredje person, som brugte et randomiseringsprogram på computeren.

Sekvensen af ​​tilfældige tal, rekruttering og allokering af patienter til interventionen af ​​undersøgelsens hovedinvestigator vil blive udført.

Prøvestørrelse

• Stikprøvestørrelsesberegningen var baseret på to undersøgelser af probiotika og astma, hvorimod et niveau på mindre end 5 %, et effektstudie på 80 % og en acceptabel fejl på op til 20 %, 60 patienters signifikans kan være tilstrækkelig til at analysere antallet af ønsket effektevaluering af hvæsende vejrtrækning hos spædbørn og afvise eller acceptere nulhypotesen.

Operationaliseringstrin

• Spædbørnene blev betragtet som kvalificerede til undersøgelsen, vil have det frie og informerede samtykke til at deltage i undersøgelsen underskrevet af deres forældre og/eller værger.

Disse patienter, der i første omgang deltog, skal gennemgå en lægeundersøgelsesprotokol med spørgsmål og svar QE - EISL (teknisk samtale med forældre eller værger) og opnåelse af øjeblikkelig hudtestfølsomhed over for større aeroallergener og fødevareallergener (mider, katte- og hundeepitel, skimmelsvampe, fjer, kakerlakker, æggeblomme, æggehvide og komælksproteiner) gennem hudstikprøven og røntgen af ​​brystet.

Patienter, før de starter probiotika eller placebo, vil doseringen af ​​cytokinerne IL-10, IL-12 og INF-gamma, IgE og eosinofiler.

De hvæsende spædbørn vil bruge det inhalerede kortikosteroid beclomethason 50mcg - 02 dyser om dagen (100mcg - dia), fandt denne medicin gratis, varemærke og specifikationer: Clenil HFA 50mcg spray 200 doser som indledende og grundlæggende behandling for hvæsen i denne aldersgruppe, ved doser, der anses for minimale.

Formlen med probiotika indeholdende 10 CFU (Colony Forming Unit)/g konsortium af probiotiske stammer af lactobacilli, lactococcus, streptokokker, gær og acetobacter-typen i passende koncentrationer pr. gram. Det vil blive leveret i frysetørret form, i hver pose indeholdende 1 g af probiotikumet, som skal bruges sammen med mælk, juice eller yoghurt i det første morgenmåltid én gang dagligt. Placeboen vil blive leveret på samme måde med de samme organoleptiske egenskaber som modermælkserstatning med probiotika.

I denne periode, spædbarnet hvæsende nuværende krise, vil forældre eller værger notere dagen for hvæsen angreb og behandling brugt i en standardiseret form med åbne svar, som vil blive givet, og vil kontakte dig telefonisk med forskeren. Forældre eller værger vil modtage en daglig kontrolregistrering for at vurdere forekomsten af ​​hvæsende anfald.

Efter otte ugers brug af probiotika vil spædbørn gennemgå en ny måling af cytokinerne IL - 10 , IL - 12 og Interferon - gama med det formål at evaluere immunresponsen af ​​probiotika i begge grupper.

Før og i slutningen af ​​hver periode vil patienten gennemgå en fysisk undersøgelse og forældre eller værger til en samtale, for at vurdere forekomsten af ​​hvæsende anfald.

Disse data vil blive analyseret for at vurdere, om tilskud med probiotika reducerer hyppigheden af ​​hvæsende vejrtrækning hos spædbørn.

Maskerings- og tildelingsmekanisme

Et tredje medlem af undersøgelsen vil tildele et nummer til probiotika- og placebo-modtagere i overensstemmelse med antallet af randomiseringer uden investigatorens og patientens viden. Beholdere skal være ens og indeholde stoffer med samme organoleptiske egenskaber. Beholderne vil blive leveret i numerisk rækkefølge, som service og tidligere randomisering.

Instrumentmåling og vurderinger

QE- EISL: skriftligt spørgeskema (International Study of Wheezing in Infants) - se bilag 01, som er et instrument bestående af 45 spørgsmål om demografiske karakteristika, hvæsen og dets potentielle risikofaktorer. Oprindeligt udviklet på spansk, blev oversat til portugisisk (brasiliansk) og valideret. Denne protokol vil blive brugt med lukkede spørgsmål med svar, ved hjælp af det tekniske interview, udført af forskeren, forældrene eller værger.

Formular til erklæring om informeret samtykke (ICF) - se apêncice 02 - efter godkendelse heraf ved at lade deres børn deltage i undersøgelsen.

Kontrolstik - klinisk - se bilag 03: vil blive brugt af forældre eller værger til at beskrive datoen, "hvæsende vejrtrækning" og opfattet behandlingsbehov, mens du bruger probiotika eller placebo (08 uger) og 08 uger mere.

Priktest: standardiserede ekstrakter dihiclorada histamin (10mg/ml) og 0,9% saltvand (FDA - Immunotech, Rio de Janeiro, Brasilien) vil blive brugt. Ekstrakterne dryppes på underarmens volaroverflade og udføres derefter en punktering med steril lancet. Som en positiv kontrol kontrollerer vi histamin og negativ saltvand. Diameteren af ​​hver reaktion vil blive evalueret efter 15 minutter, og resultatet udtrykt som positivt, hvis wheal ≥ 3 mm negativ kontrol.

Eosinofiltal og total serum IgE Dosering: vil blive holdt i et perifert blodopsamlingskar med kvalificeret professionelt laboratorium, i mængden af ​​7,0 ml. Referenceværdierne er passende for alder og standardisering af laboratoriet.

Røntgen af ​​thorax: afholdt på radiologisk afdeling på Hospital das Clinicals - UFPE.

Dosis af IL - 10 , IL - 12 og Interferon-gama: vil blive holdt i perifert blodopsamlingskar med kvalificeret professionelt laboratorium i mængden af ​​5,0 ml. Dette blod vil blive ført til Laboratory Ageu Magalhães, som vil blive underkastet centrifugering og udført af supernatanten af ​​perifere blodmononukleære celler (PBMC), tællingen af ​​cytokiner i serum. Derefter udføres dyrkning af disse celler i 48 timer og efterfølgende optælling af cytokin IL - 10 , IL - 12 og Interferon - gama.

De perifere mononukleære blodceller i en koncentration på 1 x 106 celler/ml opsamles fra patienterne i behandlingsgruppen og placebogruppen og inkuberes med phytohæmaglutinin (PHA; 10μg/ml) i 48 timer. Produktion af IL - 10, IL - 12 og Interferon - gama i kultursupernatant vil blive analyseret ved hjælp af enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) kits. Detektionsgrænsen for disse cytokiner vil være 5ρg/ml.

STATISTISK ANALYSE

Statistiske metoder til dataanalyse

• Til statistisk analyse Indledningsvis udføres en sandsynlighedsfordeling (procentanalyse). Efterfølgende vil teknikkerne til normalfordeling og homogenitet af varians ved hjælp af henholdsvis ShapiroWillks og bartlett, tests blive anvendt til at karakterisere brugen af ​​de parametriske Student's t-tests eller Manny Whitney til uafhængige prøver. For kategoriske variabler vil chi-kvadrat-testen for association med Yates korrektion blive brugt. Data er udtrykt som middelværdi og standardafvigelse (parametrisk test) eller median og standardfejl (ikke-parametrisk test) med et signifikansniveau på p < 0,05. 21 til Windows 2011 - til at generere analyserne vil den statistiske pakke SPSS blive brugt.