Respiration sifflante récurrente chez les nourrissons : facteurs de risque et prévention avec les probiotiques.

OBJECTIFS

GÉNÉRAL

• Évaluer si la supplémentation en probiotiques réduit la fréquence des sifflements récurrents chez les nourrissons.

SPÉCIFIQUE

• Identifier la présence de facteurs environnementaux et génétiques à la respiration sifflante récurrente chez les nourrissons, qui peuvent servir de facteurs de confusion majeurs de l'effet des probiotiques dans l'échantillon étudié facteurs de risque .
• Vérifiez l'effet des probiotiques comme la récurrence de la respiration sifflante chez les nourrissons.
• Évaluer les effets des probiotiques sur la réponse immunitaire de la respiration sifflante du nourrisson, grâce à la mesure de l'IL-10, de l'IL-12 et de l'interféron-gama avant et après l'intervention avec l'utilisation de probiotiques.

RECHERCHE DE CONCEPTION

Étudier le design

• Inférentielle, de type longitudinale, étude randomisée, en double aveugle, parallèle, contrôlée par placebo.

Intervention à effectuer :

• Les patients soignés à l'hôpital infantile de l'Université fédérale de Pernambuco subiront une enquête clinique et l'achèvement des examens de base est éligible pour participer à l'étude après le consentement éclairé des parents ou des tuteurs. Les nourrissons souffrant de respiration sifflante récurrente, âgés de six mois à deux ans, seront divisés en deux groupes - l'un recevant la formule avec probiotiques (groupe de traitement) et l'autre formule avec des caractéristiques organoleptiques similaires, placebo (groupe témoin).

Organigramme de randomisation

• Les patients évalués pour la vérification de l'éligibilité seront randomisés et suivront le deuxième guide du diagramme CONSORT - 2011.

MISE EN ŒUVRE DE LA RECHERCHE

Local et période d'enquête

• Hospital das Clinicals, Université Fédérale de Pernambuco - UFPE, Brésil. Période avril 2014 à avril 2015.

Recherche démographique

• Méthode de sélection de l'échantillon
• Sélection d'un échantillon de nourrissons souffrant d'une respiration sifflante récurrente soignés au Infant Hospital das Clinicas UFPE, pour être considérés comme éligibles à l'admission à l'étude et répondre aux critères d'inclusion et d'exclusion. Les nourrissons ayant une respiration sifflante sélectionnés comme éligibles pour l'étude sont restés avec une respiration sifflante même en utilisant des corticostéroïdes inhalés.

Type de mécanisme de randomisation et d'attribution

• Une simple randomisation des patients se fera par tirage au sort des numéros 1 à 60.

La randomisation a été effectuée par une tierce personne qui a utilisé un programme de randomisation sur l'ordinateur.

La séquence des numéros aléatoires, le recrutement et l'affectation des patients à l'intervention par l'investigateur principal de l'étude seront effectués.

Taille de l'échantillon

• Le calcul de la taille de l'échantillon s'est basé sur deux études sur les probiotiques et l'asthme, alors qu'un niveau inférieur à 5%, une étude de puissance de 80% et une erreur acceptable allant jusqu'à 20%, la signification de 60 patients peut être suffisante pour analyser le nombre de évaluation de l'effet désiré de la respiration sifflante chez les nourrissons et rejet ou acceptation de l'hypothèse nulle.

Étapes d'opérationnalisation

• Les nourrissons ont été considérés comme éligibles pour l'étude, auront le consentement libre et éclairé pour participer à l'étude signé par leurs parents et/ou tuteurs.

Ces patients initialement pris en charge, doivent subir un protocole d'examen médical avec questions-réponses QE - EISL (entretien technique avec les parents ou tuteurs) et réalisation d'un test cutané immédiat de sensibilité aux aéroallergènes majeurs et allergènes alimentaires (acariens, épithélium de chat et de chien, moisissures, plumes, cafards, jaune d'œuf, blanc d'œuf et protéines de lait de vache) par le test cutané et la radiographie pulmonaire.

Avant de commencer les probiotiques ou les placebos, les patients prendront le dosage des cytokines IL-10, IL-12 et INF-gamma, IgE et éosinophiles.

Les nourrissons souffrant de respiration sifflante utiliseront le corticostéroïde inhalé béclométhasone 50mcg - 02 jets par jour (100mcg - dia), ont trouvé ce médicament gratuitement, nom de marque et spécifications : Clenil HFA 50mcg spray 200 doses comme traitement initial et fondamental pour la respiration sifflante de ce groupe d'âge, à des doses considérées comme minimales.

La formule avec probiotiques contenant 10 UFC (Unité Formant Colonie)/g consortium de souches probiotiques de type lactobacilles, lactocoques, streptocoques, levures et acétobacter en concentrations appropriées par gramme. Il sera fourni sous forme lyophilisée, dans chaque sachet contenant 1 g de probiotique, à utiliser en complément du lait, du jus ou du yaourt au premier repas du matin une fois par jour. Le placebo sera alimenté de la même manière avec les mêmes caractéristiques organoleptiques de formule avec probiotiques.

Pendant cette période, la crise de respiration sifflante du nourrisson présente, les parents ou les tuteurs noteront le jour des crises de respiration sifflante et le traitement utilisé dans un formulaire standardisé avec des réponses ouvertes, qui vous sera fourni, et vous contactera par téléphone, avec le chercheur. Les parents ou les tuteurs recevront un dossier de contrôle quotidien, pour évaluer la survenue d'attaques de respiration sifflante.

Après huit semaines d'utilisation de probiotiques, les nourrissons subiront une nouvelle mesure des cytokines IL-10, IL-12 et Interféron-gama, dans le but d'évaluer la réponse immunitaire des probiotiques dans les deux groupes.

Avant et à la fin de chaque période, le patient sera soumis à un examen physique et les parents ou tuteurs à un entretien, pour évaluer la survenue d'attaques de respiration sifflante.

Ces données seront analysées pour évaluer si la supplémentation en probiotiques réduit la fréquence de la respiration sifflante chez les nourrissons.

Mécanisme de masquage et d'attribution

Un troisième membre de l'étude attribuera un numéro aux receveurs de probiotiques et de placebo en fonction des numéros de randomisation, à l'insu de l'investigateur et du patient. Les récipients doivent être égaux et contenir des substances de mêmes caractéristiques organoleptiques. Les conteneurs seront fournis dans l'ordre numérique, au fur et à mesure du service et de la randomisation précédente.

Mesures et évaluations des instruments

QE- EISL : questionnaire écrit (International Study of Wheezing in Infants) - voir Annexe 01, qui est un instrument composé de 45 questions sur les caractéristiques démographiques, la respiration sifflante et ses facteurs de risque potentiels. Développé à l'origine en espagnol, a été traduit en portugais (brésilien) et validé. Ce protocole sera utilisé avec des questions fermées avec réponses, en utilisant l'entretien technique, mené par le chercheur, les parents ou les tuteurs.

Formulaire de déclaration de consentement éclairé (ICF) - voir annexe 02 - après approbation de celui-ci à faire participer leurs enfants à l'étude.

Fiche de contrôle - clinique - voir Annexe 03 : sera utilisée par les parents ou tuteurs pour décrire la date, la « respiration sifflante » et le besoin de traitement perçu, tout en utilisant le probiotique ou le placebo (08 semaines) et 08 semaines de plus.

Prick Test : des extraits standardisés d'histamine dihiclorada (10 mg/ml) et une solution saline à 0,9 % (FDA - Immunotech, Rio de Janeiro, Brésil) seront utilisés. Les extraits seront égouttés sur la surface palmaire de l'avant-bras, puis effectués une ponction avec une lancette stérile. En tant que contrôle positif, nous utilisons l'histamine et le contrôle salin négatif. Le diamètre de chaque réaction sera évalué après 15 minutes et le résultat exprimé comme positif si papule ≥ 3mm contrôle négatif.

Numération des éosinophiles et dose totale d'IgE sériques : se tiendra dans un récipient de collecte de sang périphérique avec un laboratoire professionnel qualifié, d'une quantité de 7,0 ml. Les valeurs de référence sont adaptées à l'âge et à la standardisation du laboratoire.

Radiographie thoracique: tenue au service de radiologie de l'Hospital das Clinicals - UFPE.

Dose d'IL-10, d'IL-12 et d'interféron-gama : sera conservée dans un récipient de prélèvement sanguin périphérique avec un laboratoire professionnel qualifié d'une quantité de 5,0 ml. Ce sang sera acheminé au Laboratoire Ageu Magalhães, qui sera soumis à une centrifugation et effectué par le surnageant des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC), le comptage des cytokines dans le sérum. Ensuite, la culture de ces cellules pendant 48 heures et le comptage ultérieur des cytokines IL-10, IL-12 et Interféron-gama sont effectués.

Les cellules mononucléaires du sang périphérique à une concentration de 1 x 106 cellules/mL sont prélevées chez les patients du groupe traitement et du groupe placebo et sont incubées avec de la phytohémagglutinine (PHA ; 10µg/ml) pendant 48 heures. La production d'IL-10, d'IL-12 et d'interféron-gama dans le surnageant de culture sera analysée à l'aide de kits de dosage immuno-enzymatique (ELISA). La limite de détection de ces cytokines sera de 5ρg/ml .

ANALYSES STATISTIQUES

Méthodes statistiques pour l'analyse des données

• Pour l'analyse statistique Initialement, une distribution de probabilité (analyse en pourcentage) est effectuée. Par la suite, les techniques de distribution normale et d'homogénéité des variances au moyen des tests de ShapiroWillks et de Bartlett, respectivement, seront appliquées pour caractériser l'utilisation des tests t paramétriques de Student ou de Manny Whitney pour des échantillons indépendants. Pour les variables catégorielles, le test du chi carré pour l'association avec la correction de Yates sera utilisé. Les données sont exprimées en moyenne et écart type ( test paramétrique ) ou en médiane et erreur type ( test non paramétrique ) avec un niveau de signification de p < 0,05 . 21 pour Windows 2011 - pour générer les analyses, le progiciel statistique SPSS sera utilisé.