Opakované pískoty u kojenců: rizikové faktory a prevence pomocí probiotik.

CÍLE

VŠEOBECNÉ

• Posuďte, zda suplementace probiotik snižuje frekvenci opakujících se pískotů u kojenců.

CHARAKTERISTICKÝ

• Identifikace přítomnosti environmentálních a genetických faktorů pro opakující se pískoty u kojenců, které mohou sloužit jako hlavní zkreslující faktory účinku probiotik ve zkoumaném vzorku rizikových faktorů.
• Zkontrolujte účinek probiotik jako opakování pískotů u kojenců.
• Vyhodnoťte účinky probiotik na imunitní odpověď sípání kojence pomocí měření IL-10, IL-12 a Interferonu-gama před a po intervenci s použitím probiotik.

DESIGNOVÝ VÝZKUM

Studovat design

• Inferenční, typ longitudinální, randomizované studie, dvojitě zaslepené, paralelní, placebem kontrolované studie.

Zásah, který se bude konat:

• Pacienti navštěvovaní v kojenecké nemocnici Federální univerzity v Pernambuco podstoupí klinické vyšetření a dokončení základních vyšetření je způsobilé k účasti ve studii po informovaném souhlasu rodičů nebo opatrovníků. Kojenci s recidivujícími pískoty ve věku od šesti měsíců do dvou let budou rozděleni do dvou skupin – jedna dostávala formu s probiotiky (léčebná skupina) a druhá formule s podobnými organoleptickými vlastnostmi, placebo (kontrolní skupina).

Vývojový diagram randomizace

• Pacienti, u kterých bylo provedeno ověření způsobilosti, budou randomizováni a budou se řídit vývojovým diagramem CONSORT druhého průvodce – 2011.

REALIZACE VÝZKUMU

Místní a průzkumné období

• Hospital das Clinicals, Federal University of Pernambuco - UFPE, Brazílie. Období od dubna 2014 do dubna 2015.

Populační výzkum

• Způsob výběru vzorku
• Výběr vzorku kojenců s opakujícími se pískoty navštěvovanými v kojenecké nemocnici das Clinicas UFPE, aby byli považováni za způsobilé pro přijetí do studie a splňující kritéria pro zařazení a vyloučení. Děti s pískoty, které byly vybrány jako vhodné pro studii, zůstaly s pískoty i při použití inhalačních kortikosteroidů.

Typ randomizačního a alokačního mechanismu

• Jednoduchá randomizace pacientů bude losováním čísel 1 - 60.

Randomizaci provedla třetí osoba, která použila randomizační program na počítači.

Bude provedena sekvence náhodných čísel, nábor a přidělení pacientů k intervenci hlavním zkoušejícím studie.

Velikost vzorku

• Výpočet velikosti vzorku byl založen na dvou studiích o probiotikách a astmatu, přičemž hladina nižší než 5 %, výkonová studie 80 % a přijatelná chyba až 20 %, významnost 60 pacientů může být dostatečná k analýze počtu hodnocení požadovaného účinku pískotů u kojenců a odmítnutí nebo přijetí nulové hypotézy.

Operační kroky

• Děti byly považovány za způsobilé pro studii, budou mít svobodný a informovaný souhlas s účastí ve studii podepsaný jejich rodiči a/nebo opatrovníky.

Tito pacienti, kteří se původně zúčastnili, podstoupí lékařskou prohlídku s otázkami a odpověďmi QE - EISL (technický pohovor s rodiči nebo opatrovníky) a dosažení okamžité citlivosti kožních testů na hlavní aeroalergeny a potravinové alergeny (roztoči, kočičí a psí epitel, plísně, peří, švábi, vaječný žloutek, bílek a bílkoviny kravského mléka) pomocí kožního prick testu a rentgenového snímku hrudníku.

Pacientům před zahájením probiotik nebo placeba bude dávkování cytokinů IL-10, IL-12 a INF-gama, IgE a eozinofilů.

Děti s pískoty budou používat inhalační kortikosteroid beclomethason 50 mcg - 02 trysky denně (100 mcg - dia), tento lék byl nalezen zdarma, značka a specifikace: Clenil HFA 50 mcg sprej 200 dávek jako počáteční a základní léčba sípání v této věkové skupině, v dávkách považovaných za minimální.

Receptura s probiotiky obsahující 10 CFU (Colony Forming Unit)/g konsorcia probiotických kmenů laktobacilů, laktokoků, streptokoků, kvasinek a typu acetobacter ve vhodných koncentracích na gram. Dodává se v lyofilizované formě, v každém sáčku obsahujícím 1 g probiotika, k použití spolu s mlékem, džusem nebo jogurtem v prvním ranním jídle 1x denně. Placebo bude dodáváno stejným způsobem se stejnými organoleptickými vlastnostmi složení s probiotiky.

Během tohoto období dítě s pískoty v přítomné krizi, rodiče nebo opatrovníci zaznamenají den záchvatů sípání a použitou léčbu ve standardizované formě s otevřenými odpověďmi, které budou poskytnuty, a budou vás kontaktovat telefonicky s výzkumníkem. Rodiče nebo opatrovníci obdrží denní záznam o kontrole, aby bylo možné posoudit výskyt záchvatů sípání.

Po osmi týdnech užívání probiotik podstoupí kojenci nové měření cytokinů IL-10, IL-12 a Interferon-gama s cílem vyhodnotit imunitní odpověď probiotik u obou skupin.

Před a na konci každého období se pacient podrobí fyzickému vyšetření a s rodiči nebo opatrovníky pohovor, aby se posoudil výskyt záchvatů sípání.

Tato data budou analyzována za účelem posouzení, zda suplementace probiotiky snižuje frekvenci pískotů u kojenců.

Maskovací a alokační mechanismus

Třetí člen studie přiřadí číslo příjemcům probiotik a placeba v souladu s počty randomizací, bez vědomí zkoušejícího a pacienta. Nádoby by měly být stejné a obsahovat látky se stejnými organoleptickými vlastnostmi. Kontejnery budou poskytovány v číselném pořadí, jako služba a předchozí randomizace.

Měření a hodnocení přístrojů

QE-EISL: písemný dotazník (Mezinárodní studie pískotů u kojenců) – viz příloha 01, což je nástroj skládající se ze 45 otázek o demografických charakteristikách, pískotech a jejich potenciálních rizikových faktorech. Původně vyvinut ve španělštině, byl přeložen do portugalštiny (brazilské) a ověřen. Tento protokol bude použit s uzavřenými otázkami s odpověďmi, s využitím technického rozhovoru vedeného výzkumníkem, rodiči nebo opatrovníky.

Formulář prohlášení o informovaném souhlasu (ICF) - viz příloha 02 - po schválení účasti jejich dětí na studii.

Kontrolní zátka – klinická – viz Příloha 03: bude použita rodiči nebo opatrovníky k popisu data, „sípání“ a vnímané potřeby léčby při použití probiotik nebo placeba (8 týdnů) a dalších 8 týdnů.

Prick test: budou použity standardizované extrakty dihiclorada histamin (10 mg/ml) a 0,9% fyziologický roztok (FDA - Immunotech, Rio de Janeiro, Brazílie). Extrakty budou nakapány na volární plochu předloktí a poté provedeny jedna punkce sterilní lancetou. Jako pozitivní kontrolu používáme histamin a negativní fyziologický roztok. Průměr každé reakce se vyhodnotí po 15 minutách a výsledek se vyjádří jako pozitivní v případě, že pupínek ≥ 3 mm negativní kontrola.

Počet eozinofilů a celkové sérové ​​IgE Dávkování: bude uchováváno v odběrové nádobě periferní krve s kvalifikovanou profesionální laboratoří v množství 7,0 ml. Referenční hodnoty jsou vhodné pro věk a standardizaci laboratoře.

Rentgen hrudníku: provádí se na radiologickém oddělení Hospital das Clinicals - UFPE.

Dávka IL-10, IL-12 a Interferon-gama: bude uložena v odběrové nádobě periferní krve s kvalifikovanou odbornou laboratoří v množství 5,0 ml. Tato krev bude odebrána do laboratoře Ageu Magalhães, která bude podrobena centrifugaci a provedená supernatantem mononukleárních buněk periferní krve (PBMC), což je počet cytokinů v séru. Poté se provádí kultivace těchto buněk po dobu 48 hodin a následné počítání cytokinů IL-10, IL-12 a Interferonu-gama.

Mononukleární buňky periferní krve v koncentraci 1 x 106 buněk/ml se odeberou pacientům z léčebné skupiny a skupiny s placebem a inkubují se s fytohemaglutininem (PHA; 10 ug/ml) po dobu 48 hodin. Produkce IL - 10, IL - 12 a Interferonu - gama v supernatantu kultury bude analyzována pomocí souprav ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Detekční limit pro tyto cytokiny bude 5ρg/ml.

STATISTICKÁ ANALÝZA

Statistické metody pro analýzu dat

• Pro statistickou analýzu Nejprve se provede rozdělení pravděpodobnosti (procentuální analýza). Následně budou aplikovány techniky normálního rozdělení a homogenity rozptylů pomocí ShapiroWillks, resp. bartlettových testů pro charakterizaci použití parametrických Studentových t testů nebo Manny Whitneyho pro nezávislé vzorky. Pro kategorické proměnné bude použit chí-kvadrát test pro asociaci s Yatesovou korekcí. Data jsou vyjádřena jako průměr a směrodatná odchylka ( parametrický test ) nebo medián a standardní chyba ( neparametrický test ) s hladinou významnosti p < 0,05 . 21 pro Windows 2011 - pro generování analýz bude použit statistický balíček SPSS.