Sibilo sibilante ricorrente nei neonati: fattori di rischio e prevenzione con i probiotici.

OBIETTIVI

GENERALE

• Valutare se l'integrazione di probiotici riduce la frequenza del respiro sibilante ricorrente nei neonati.

SPECIFICA

• Identificare la presenza di fattori ambientali e genetici al respiro sibilante ricorrente nei neonati, che possono fungere da principali confondenti dell'effetto dei probiotici nel campione studiato fattori di rischio.
• Controlla l'effetto dei probiotici come la ricorrenza del respiro sibilante nei neonati.
• Valutare gli effetti dei probiotici sulla risposta immunitaria del respiro sibilante del lattante, attraverso la misurazione di IL-10, IL-12 e Interferone-gama prima e dopo l'intervento con l'uso di probiotici.

RICERCA PROGETTUALE

Progettazione dello studio

• Inferenziale, il tipo di studio longitudinale, randomizzato, in doppio cieco, parallelo, controllato con placebo.

Intervento che si terrà:

• I pazienti frequentati presso l'ospedale infantile dell'Università Federale di Pernambuco saranno sottoposti a indagine clinica e il completamento degli esami di riferimento è idoneo a partecipare allo studio dopo il consenso informato dei genitori o dei tutori. I neonati con respiro sibilante ricorrente, dai sei mesi ai due anni, saranno divisi in due gruppi: uno che riceverà la formula con probiotici (gruppo di trattamento) e l'altro formula con caratteristiche organolettiche simili, placebo (gruppo di controllo).

Diagramma di flusso della randomizzazione

• I pazienti valutati per la verifica dell'idoneità saranno randomizzati e seguiranno la seconda guida del diagramma di flusso CONSORT - 2011.

IMPLEMENTAZIONE DELLA RICERCA

Locale e periodo di indagine

• Hospital das Clinicals, Università Federale di Pernambuco - UFPE, Brasile. Periodo da aprile 2014 ad aprile 2015.

Ricerca sulla popolazione

• Metodo di selezione del campione
• Selezione del campione di neonati con sibili ricorrenti frequentati presso l'Infant Hospital das Clinicas UFPE, per essere considerati idonei per l'ammissione allo studio e soddisfare i criteri di inclusione ed esclusione. I bambini con respiro sibilante selezionati come ammissibili per lo studio sono rimasti con respiro sibilante anche usando corticosteroidi per via inalatoria.

Tipo di randomizzazione e meccanismo di allocazione

• Una semplice randomizzazione dei pazienti avverrà mediante estrazione dei numeri da 1 a 60.

La randomizzazione è stata eseguita da una terza persona che ha utilizzato un programma di randomizzazione sul computer.

Verrà condotta la sequenza di numeri casuali, il reclutamento e l'assegnazione dei pazienti all'intervento da parte del ricercatore principale dello studio.

Misura di prova

• Il calcolo della dimensione del campione si è basato su due studi sui probiotici e sull'asma, mentre un livello inferiore al 5%, uno studio sulla potenza dell'80% e un errore accettabile fino al 20%, la significatività di 60 pazienti può essere sufficiente per analizzare il numero di valutazione dell'effetto desiderato del respiro sibilante nei neonati e rifiutare o accettare l'ipotesi nulla.

Fasi di operatività

• I neonati sono stati considerati idonei per lo studio, avranno il consenso libero e informato a partecipare allo studio firmato dai loro genitori e/o tutori.

Questi pazienti inizialmente frequentati, dovranno sottoporsi ad un protocollo di visita medica con domande e risposte QE - EISL (colloquio tecnico con i genitori o tutori) e conseguimento di test cutaneo immediato di sensibilità ai principali aeroallergeni e allergeni alimentari (acari, epitelio del gatto e del cane, muffe, piume, scarafaggi, tuorlo d'uovo, albume d'uovo e proteine ​​del latte vaccino) attraverso lo skin prick test e la radiografia del torace.

I pazienti prima di iniziare i probiotici o il placebo, dovranno il dosaggio delle citochine IL-10, IL-12 e INF-gamma, IgE ed eosinofili.

I bambini con respiro sibilante useranno il corticosteroide per via inalatoria beclometasone 50 mcg - 02 getti al giorno (100 mcg - dia), hanno trovato questo farmaco gratuitamente, nome del marchio e specifiche: Clenil HFA 50 mcg spray 200 dosi come trattamento iniziale e fondamentale per il respiro sibilante in questa fascia di età, a dosi considerate minime.

La formula con probiotici contenente 10 UFC (Unità Formanti Colonie)/g consorzio di ceppi probiotici di tipo lattobacilli, lattococchi, streptococchi, lieviti e acetobatteri in adeguate concentrazioni per grammo. Verrà fornito in forma liofilizzata, in ogni bustina contenente 1 g di probiotico, da utilizzare in aggiunta a latte, succo o yogurt nel primo pasto mattutino una volta al giorno. Il placebo verrà fornito allo stesso modo con le stesse caratteristiche organolettiche della formula con probiotici.

Durante questo periodo, la crisi attuale del respiro sibilante del neonato, i genitori o i tutori noteranno il giorno degli attacchi di respiro sibilante e il trattamento utilizzato in una forma standardizzata con risposte aperte, che verranno fornite e ti contatteranno telefonicamente con il ricercatore. I genitori o tutori riceveranno una registrazione giornaliera del controllo, per valutare l'insorgenza di attacchi di respiro sibilante.

Dopo otto settimane di utilizzo dei probiotici, i bambini saranno sottoposti a una nuova misurazione delle citochine IL-10, IL-12 e Interferon-gama, con l'obiettivo di valutare la risposta immunitaria dei probiotici in entrambi i gruppi.

Prima e alla fine di ogni periodo, il paziente sarà sottoposto a esame fisico e genitori o tutori a un colloquio, per valutare l'insorgenza di attacchi di respiro sibilante.

Questi dati saranno analizzati per valutare se l'integrazione con probiotici riduca la frequenza del respiro sibilante nei neonati.

Meccanismo di mascheramento e allocazione

Un terzo membro dello studio assegnerà un numero ai destinatari di probiotici e placebo in base ai numeri di randomizzazione, all'insaputa dello sperimentatore e del paziente. I contenitori devono essere uguali e contenere sostanze con le stesse caratteristiche organolettiche. I contenitori verranno forniti in ordine numerico, come servizio e previa randomizzazione.

Strumenti Misurazione e Valutazioni

QE- EISL: questionario scritto (International Study of Wheezing in Infants) - vedi Appendice 01, che è uno strumento composto da 45 domande sulle caratteristiche demografiche, sul respiro sibilante e sui suoi potenziali fattori di rischio. Originariamente sviluppato in spagnolo, è stato tradotto in portoghese (brasiliano) e convalidato. Questo protocollo sarà utilizzato con domande chiuse con risposte, utilizzando il colloquio tecnico, condotto dal ricercatore, dai genitori o dai tutori.

Dichiarazione di modulo di consenso informato (ICF) - vedi allegato 02 - dopo l'approvazione della partecipazione dei propri figli allo studio.

Spina di controllo - clinica - vedi Appendice 03: verrà utilizzata da genitori o tutori per descrivere la data, il "respiro sibilante" e la necessità di trattamento percepita, durante l'utilizzo del probiotico o del placebo (08 settimane) e 08 settimane in più.

Prick Test: verranno utilizzati estratti standardizzati dihiclorada istamina (10 mg/ml) e soluzione salina allo 0,9% (FDA - Immunotech, Rio de Janeiro, Brasile). Gli estratti verranno gocciolati sulla superficie volare dell'avambraccio e quindi eseguita una puntura con bisturi sterile. Come controllo positivo abbiamo l'istamina e il controllo salino negativo. Il diametro di ciascuna reazione sarà valutato dopo 15 minuti e il risultato espresso come positivo se pomfo ≥ 3mm controllo negativo.

Conta degli eosinofili e dosaggio totale delle IgE sieriche: sarà tenuto in un recipiente per la raccolta del sangue periferico presso un laboratorio professionale qualificato, nella quantità di 7,0 ml. I valori di riferimento sono appropriati per l'età e la standardizzazione del laboratorio.

Radiografia del torace: tenuta presso il dipartimento di radiologia dell'Hospital das Clinicals - UFPE.

Dose di IL-10, IL-12 e interferone-gama: sarà conservata in un recipiente per la raccolta del sangue periferico presso un laboratorio professionale qualificato nella quantità di 5,0 ml. Questo sangue verrà portato al Laboratorio Ageu Magalhães, che sarà sottoposto a centrifugazione ed eseguito dal surnatante di cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC), il conteggio delle citochine nel siero. Quindi viene eseguita la coltura di queste cellule per 48 ore e il successivo conteggio delle citochine IL-10, IL-12 e Interferon-gama.

Le cellule mononucleate del sangue periferico ad una concentrazione di 1 x 106 cellule/mL vengono raccolte dai pazienti del gruppo di trattamento e del gruppo placebo e vengono incubate con fitoemagglutinina (PHA; 10μg/ml) per 48 ore. La produzione di IL-10, IL-12 e Interferon-gama nel surnatante di coltura sarà analizzata utilizzando kit ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Il limite di rilevamento per queste citochine sarà di 5ρg/ml.

ANALISI STATISTICA

Metodi statistici per l'analisi dei dati

• Per l'analisi statistica Inizialmente, viene eseguita una distribuzione di probabilità (analisi percentuale). Successivamente, le tecniche di distribuzione normale e di omogeneità delle varianze mediante i test di ShapiroWillks e di Bartlett, rispettivamente, saranno applicate per caratterizzare l'uso dei test parametrici t di Student o di Manny Whitney per campioni indipendenti. Per le variabili categoriali verrà utilizzato il test del chi-quadrato per l'associazione con la correzione di Yates. I dati sono espressi come media e deviazione standard (test parametrico) o mediana ed errore standard (test non parametrico) con un livello di significatività di p<0.05. 21 per Windows 2011 - per generare le analisi verrà utilizzato il pacchetto statistico SPSS.