Sibilancias recurrentes en lactantes: factores de riesgo y prevención con probióticos.

OBJETIVOS

GENERAL

• Evaluar si la suplementación con probióticos reduce la frecuencia de sibilancias recurrentes en los lactantes.

ESPECÍFICO

• Identificar la presencia de factores ambientales y genéticos para las sibilancias recurrentes en lactantes, que pueden servir como principales factores de confusión del efecto de los probióticos en la muestra de factores de riesgo estudiados.
• Comprobar el efecto de los probióticos como la recurrencia de sibilancias en lactantes.
• Evaluar los efectos de los probióticos sobre la respuesta inmune del lactante con sibilancias, mediante la medición de IL-10, IL-12 e Interferón-gama antes y después de la intervención con el uso de probióticos.

INVESTIGACIÓN DE DISEÑO

Diseño del estudio

• Estudio inferencial, del tipo longitudinal, aleatorizado, doble ciego, paralelo, controlado con placebo.

Intervención a realizar:

• Los pacientes atendidos en el Hospital Infantil de la Universidad Federal de Pernambuco serán sometidos a investigación clínica y la finalización de los exámenes de referencia es elegible para participar en el estudio después del consentimiento informado de los padres o tutores. Los lactantes con sibilancias recurrentes, de seis meses a dos años de edad, se dividirán en dos grupos: uno que reciba la fórmula con probióticos (grupo de tratamiento) y el otro fórmula con características organolépticas similares, placebo (grupo de control).

Diagrama de flujo de la aleatorización

• Los pacientes evaluados para verificación de elegibilidad serán aleatorizados y seguirán el diagrama de flujo CONSORT segunda Guía - 2011.

IMPLEMENTACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN

Período local y de encuesta

• Hospital das Clinicals, Universidad Federal de Pernambuco - UFPE, Brasil. Periodo Abril 2014 a Abril 2015.

Investigación de la población

• Método de Selección de Muestra
• Selección de la muestra de lactantes con sibilancias recurrentes atendidos en el Hospital Infantil das Clínicas UFPE, para ser considerados elegibles para la admisión al estudio y cumplir los criterios de inclusión y exclusión. Los lactantes con sibilancias seleccionados como elegibles para el estudio permanecieron con sibilancias incluso usando corticosteroides inhalados.

Tipo de mecanismo de aleatorización y asignación

• Una aleatorización simple de pacientes será por sorteo de los números 1 - 60.

La aleatorización fue realizada por una tercera persona que utilizó un programa de aleatorización en la computadora.

Se realizará la secuencia de números aleatorios, reclutamiento y asignación de pacientes a la intervención por parte del investigador principal del estudio.

Tamaño de la muestra

• El cálculo del tamaño de la muestra se basó en dos estudios sobre probióticos y asma, mientras que un nivel inferior al 5 %, un estudio de potencia del 80 % y un error aceptable de hasta el 20 %, la significación de 60 pacientes puede ser suficiente para analizar el número de pacientes. evaluación del efecto deseado de las sibilancias en lactantes y rechazar o aceptar la hipótesis nula.

Pasos de operacionalización

• Los infantes que fueran considerados elegibles para el estudio, tendrán el consentimiento libre e informado para participar en el estudio firmado por sus padres y/o tutores.

Estos pacientes atendidos inicialmente, deberán someterse a un protocolo de exploración médica con preguntas y respuestas QE - EISL (entrevista técnica con los padres o tutores) y obtención de pruebas cutáneas inmediatas de sensibilidad a los principales aeroalérgenos y alérgenos alimentarios (ácaros, epitelio de perro y gato, mohos, plumas, cucarachas, yema de huevo, clara de huevo y proteínas de leche de vaca) a través de la prueba cutánea y la radiografía de tórax.

Los pacientes antes de comenzar con probióticos o placebos, se les administrará la dosificación de las citocinas IL-10, IL-12 e INF-gamma, IgE y eosinófilos.

Los bebés con sibilancias utilizarán el corticosteroide inhalado beclometasona 50 mcg - 02 chorros por día (100 mcg - dia), este medicamento se encuentra de forma gratuita, marca y especificaciones: Clenil HFA 50 mcg spray 200 dosis como tratamiento inicial y fundamental para las sibilancias en este grupo de edad, a dosis consideradas mínimas.

La fórmula con probióticos contiene 10 CFU (Unidad Formadora de Colonias)/g consorcio de cepas probióticas de tipo lactobacilli, lactococcus, streptococcus, levaduras y acetobacter en concentraciones adecuadas por gramo. Se suministrará en forma liofilizada, en cada sobre conteniendo 1 g del probiótico, para ser utilizado junto con la leche, zumo o yogur en la primera comida de la mañana una vez al día. El placebo se suministrará de la misma forma con las mismas características organolépticas de la fórmula con probióticos.

Durante este período, el lactante presente crisis de sibilancias, los padres o tutores anotarán el día de las crisis de sibilancias y el tratamiento utilizado en un formulario estandarizado con respuestas abiertas, que se facilitará, y se pondrá en contacto telefónico con el investigador. Los padres o tutores recibirán un registro diario de control, para evaluar la aparición de ataques de sibilancias.

Luego de ocho semanas de uso de probióticos, los infantes serán sometidos a una nueva medición de citoquinas IL-10, IL-12 e Interferón-gama, con el objetivo de evaluar la respuesta inmune de los probióticos en ambos grupos.

Antes y al final de cada período, el paciente se someterá a un examen físico y los padres o tutores a una entrevista, para evaluar la aparición de ataques de sibilancias.

Estos datos se analizarán para evaluar si la suplementación con probióticos reduce la frecuencia de sibilancias en los lactantes.

Mecanismo de enmascaramiento y asignación

Un tercer miembro del estudio asignará un número a los receptores de probióticos y placebo de acuerdo con los números de aleatorización, sin el conocimiento del investigador y del paciente. Los envases deben ser iguales y contener sustancias de las mismas características organolépticas. Los envases se facilitarán por orden numérico, según servicio y previa aleatorización.

Instrumentos Medición y Evaluaciones

QE- EISL: cuestionario escrito (International Study of Wheezing in Infants) - ver Anexo 01, que es un instrumento compuesto por 45 preguntas sobre características demográficas, sibilancias y sus potenciales factores de riesgo. Originalmente desarrollado en español, fue traducido al portugués (brasileño) y validado. Este protocolo se utilizará con preguntas cerradas con respuesta, utilizando la entrevista técnica, realizada por el investigador, los padres o tutores.

Formulario de Declaración de Consentimiento Libre e Informado (ICF) - ver apéndice 02 - después de la aprobación del mismo en la participación de sus hijos en el estudio.

Tapón de control - clínico - ver Apéndice 03: será utilizado por los padres o tutores para describir la fecha, "sibilancias" y necesidad de tratamiento percibida, mientras se usa el probiótico o el placebo (08 semanas) y 08 semanas más.

Prick Test: se utilizarán extractos estandarizados de histamina dihiclorada (10mg/ml) y solución salina al 0,9% (FDA - Immunotech, Rio de Janeiro, Brasil). Los extractos serán goteados sobre la superficie volar del antebrazo y luego se realizará una punción con lanceta estéril. Como control positivo tenemos histamina y control salino negativo. El diámetro de cada reacción se evaluará después de 15 minutos y el resultado se expresará como positivo si la roncha ≥ 3 mm del control negativo.

Recuento de eosinófilos e IgE sérica total Dosificación: se realizará en vaso de extracción de sangre periférica con laboratorio profesional calificado, en la cantidad de 7,0 ml. Los valores de referencia son apropiados para la edad y la estandarización del laboratorio.

Radiografía de tórax: realizada en el servicio de radiología del Hospital das Clinicals - UFPE.

Dosis de IL - 10 , IL - 12 e Interferón-gama: se mantendrá en un vaso de extracción de sangre periférica con un laboratorio profesional calificado en la cantidad de 5,0 ml. Esta sangre será llevada al Laboratorio Ageu Magalhães, que será sometida a centrifugación y realizada por el sobrenadante de células mononucleares de sangre periférica (PBMC), el recuento de citocinas en suero. Luego se realiza el cultivo de estas células durante 48 horas y posterior conteo de citocinas IL-10, IL-12 e Interferón-gama.

Las células mononucleares de sangre periférica a una concentración de 1 x 106 células/ml se recogen de los pacientes del grupo de tratamiento y del grupo placebo y se incuban con fitohemaglutinina (PHA; 10 μg/ml) durante 48 horas. La producción de IL-10, IL-12 e interferón-gama en el sobrenadante del cultivo se analizará utilizando kits de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). El límite de detección de estas citocinas será de 5ρg/ml.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Métodos estadísticos para el análisis de datos

• Para el análisis estadístico Inicialmente, se realiza una distribución de probabilidad (análisis porcentual). Posteriormente, se aplicarán las técnicas de distribución normal y homogeneidad de varianzas mediante pruebas de ShapiroWillks y bartlett, respectivamente, para caracterizar el uso de las pruebas paramétricas t de Student o Manny Whitney para muestras independientes. Para variables categóricas se utilizará la prueba de chi-cuadrado para asociación con corrección de Yates. Los datos se expresan como media y desviación estándar (prueba paramétrica) o mediana y error estándar (prueba no paramétrica) con un nivel de significación de p < 0,05. 21 para Windows 2011 - para generar los análisis se utilizará el paquete estadístico SPSS.