与糖尿病患者牙周病活动相关的诊断生物标志物

这项病例对照纵向研究于 2009 年 3 月至 2012 年 6 月期间在圣保罗大学进行，由口腔外科和牙周病学系以及内科内分泌学和代谢学系联合合作。 它得到了圣保罗大学 Ribeirão 牙科学院机构人类伦理研究委员会的审查和批准（流程编号 2009.1.88.58.7）。

根据适用于计算机化牙周探针的公差方法确定超过 1 mm 的临床附着损失，考虑到电子探针的标准偏差 0.3 mm 乘以 3。不考虑具有修复体或分叉病变的牙齿。 具有这种临床附着的牙周部位称为活性部位。

在开始初始临床检查之前，使用超声设备进行龈上刮治以方便检查。 评估的临床参数是：在计算机化牙周探针的帮助下，在每颗牙齿的六个位置记录探诊深度、相对临床附着水平和探诊出血。 为了减少基线和 12 个月评估之间的差异，使用丙烯酸支架来标准化计算机化牙周探针的位置。 根据探诊后长达 20 秒是否有出血来评估探诊出血。 在每颗牙齿的四个部位记录菌斑指数、生物膜存在与否。 还借助手动牙周探针验证分叉参与。

单盲校准检查员在龈上刮治（基线）后两周和非手术牙周治疗后两个月记录所有临床参数。 进行了校准练习以实现可接受的考官内再现性。

对于代谢控制评估，在圣保罗大学 Ribeirão Preto 医学院的内分泌诊所，分析了两组患者在基线时和非手术牙周治疗后两个月的 HbA1c 水平。 所有糖尿病患者都在内分泌学家的监督下进行，建议告知药物摄入或饮食的任何变化。

在 PD 和 PD+DM 组中，由同一名操作员使用刮匙和超声波设备执行牙菌斑控制计划，包括牙科预防和口腔卫生指导，以及刮治和牙根规划课程。 由第二个操作员检查所有刮治和根部规划程序。 一周后和一个月的牙周消毒后检查口腔卫生，然后进行牙科预防。

在 PD+DM 组中，非手术牙周治疗与全身性多西环素 100 mg/天相关，初始剂量 200 mg 后持续两周，从牙周治疗前一天开始。 PD 组患者无法获得有关 PD+DM 组患者抗生素给药的信息。

从每个受试者收集未刺激的完整咳出唾液（约 3 毫升）到无菌试管中。 在收集唾液前 2 小时，受试者不得进食、饮水和口腔卫生。 唾液样本立即置于冰上，并在 -80 摄氏度冷冻前进行等分。 样本在采集后 6 个月内解冻并进行分析。

使用平行技术，在基线时对每位患者拍摄了一系列完整的射线照片。 牙周治疗两个月后，用相同的技术对活动牙周部位的牙齿进行 X 光检查。 此后，射线照片在扫描仪上以标记图像文件格式 (TIFF) 数字化。 使用特定软件对基线和 2 个月的射线照片进行数字减影射线照片。 该分析仅包括具有牙周病活动性的邻间部位的牙齿。 X 光片之间的变化被描述为牙槽骨量减少的暗区。 使用特定的测量软件测量这些区域 (mm2)。 与临床检查一样，对射线照相密度损失区域的测量进行检查者内部校准。

在常规牙周手术期间，从两组中每个患者的活动部位获得牙龈组织样本。 然后将切除的牙龈环小心地从牙根和牙槽突上移除。 牙龈活组织检查包括上皮和结缔组织。 样品立即浸入液氮中，然后储存在-80 摄氏度，用于 RNA 提取和基因表达分析。

根据制造商提供的说明，使用 Trizol 试剂从活组织检查中提取总 RNA。 根据制造商提供的说明，通过逆转录反应从 1 µg 总 RNA 中合成一条互补 DNA (cDNA) 链。 反应结束时，cDNA 保存在-20 摄氏度以备后用。 实时聚合酶链反应 (PCR) 阵列允许同时分析参与特定信号通路的 84 个基因。 这些基因包含在 PCR 阵列板中，用于人类炎性细胞因子和受体。