Diabeetikoiden periodontaalisten sairauksien aktiivisuuteen liittyvät diagnostiset biomarkkerit

Tämä tapauskontrollin pitkittäistutkimus tehtiin São Paulon yliopistossa maaliskuun 2009 ja kesäkuun 2012 välisenä aikana suunkirurgian ja parodontologian osaston ja sisätautien osaston endokrinologian ja aineenvaihdunnan osaston yhteisenä yhteistyönä. Sen arvioi ja hyväksyi Ribeirãon hammaslääketieteen korkeakoulun Institutional Human Ethics Research Committee - University of Sao Paulo (prosessinro 2009.1.88.58.7).

Yli 1 mm:n kliininen kiinnittymishäviö määritettiin tietokoneistettuun parodontaalianturiin sovitetun toleranssimenetelmän mukaisesti ottaen huomioon elektronisen anturin 0,3 mm:n standardipoikkeama kerrottuna 3:lla. Proteesilla varustettuja hampaita tai furkaatiovaurioita ei otettu huomioon. Parodontaalikohtia, joissa oli tämä kliininen kiinnitys, kutsuttiin aktiivisiksi kohdiksi.

Ennen alustavan kliinisen tutkimuksen aloittamista suoritettiin ultraäänilaitteella supragingivaalinen hilseily tutkimuksen helpottamiseksi. Arvioidut kliiniset parametrit olivat: mittaustaskun syvyys, suhteellinen kliinisen kiinnittymisen taso ja verenvuoto koetuksissa rekisteröitiin kuudessa kohdassa hammasta kohti tietokoneistetun parodontaalisen koettimen avulla. Perustason ja 12 kuukauden arviointien välisten erojen vähentämiseksi akryylistenttiä käytettiin standardoimaan tietokoneistetun parodontaalisen koettimen sijainti. Verenvuoto koettimen aikana arvioitiin verenvuodon olemassaolon tai puuttumisen mukaan 20 sekuntiin asti koettamisen jälkeen. Plakkiindeksi, biofilmin läsnäolo tai puuttuminen, rekisteröitiin neljästä kohdasta hammasta kohti. Furkaatioon osallistuminen varmistettiin myös manuaalisen parodontaalisen anturin avulla.

Kaikki kliiniset parametrit rekisteröitiin kaksi viikkoa supragingivaalisen skaalauksen jälkeen (perustaso) ja kaksi kuukautta ei-kirurgisen parodontaalihoidon jälkeen yksisokkoutetulla kalibroidulla tutkijalla. Kalibrointiharjoitus suoritettiin hyväksyttävän intraexaminer-toistettavuuden saavuttamiseksi.

Aineenvaihduntakontrollin arviointia varten HbA1c-tasot analysoitiin molempien ryhmien potilailla lähtötilanteessa ja kaksi kuukautta ei-kirurgisen parodontaalihoidon jälkeen Ribeirão Preton lääketieteellisen korkeakoulun endokrinologiaklinikalla, São Paulon yliopistossa. Kaikki diabeetikot olivat endokrinologin valvonnassa, ja häntä kehotettiin ilmoittamaan kaikista lääkkeiden saannin tai ruokavalion muutoksista.

PD- ja PD+DM-ryhmissä sama operaattori suoritti plakintorjuntaohjelman hampaiden ennaltaehkäisyllä ja suuhygieniaopetuksella sekä hilseily- ja juurisuunnitteluistunnoilla kyreteillä ja ultraäänilaitteella. Kaikki skaalaus- ja juurisuunnittelumenettelyt tarkastettiin toista käyttäjää varten. Suun hygienia tarkistettiin viikon ja kuukauden parodontaalisen desinfioinnin jälkeen, jota seurasi hampaiden ennaltaehkäisy.

PD+DM-ryhmässä ei-kirurgiseen parodontaalihoitoon yhdistettiin systeeminen doksisykliini 100 mg/vrk kahden viikon ajan 200 mg:n aloitusannoksen jälkeen, joka aloitettiin parodontaalihoitoa edeltävänä päivänä. PD-ryhmän potilailla ei ollut pääsyä tietoihin antibioottien antamisesta PD+DM-ryhmän potilaille.

Ei-stimuloitua kokonaisena yskättyä sylkeä kerättiin (~ 3 ml) jokaiselta koehenkilöltä steriileihin putkiin. Koehenkilöt pidättäytyivät syömästä, juomasta ja suuhygieniasta 2 tunnin ajan ennen syljen keräämistä. Sylkinäytteet asetettiin heti jäälle ja jaettiin eriin ennen jäädyttämistä -80 celsiusasteeseen. Näytteet sulatettiin ja analysoitiin 6 kuukauden kuluessa keräämisestä.

Jokaisesta potilaasta otettiin lähtötilanteessa täydellinen sarja röntgenkuvia käyttäen rinnakkaistekniikkaa. Kaksi kuukautta parodontaalihoidon jälkeen otettiin röntgenkuvat samalla tekniikalla hampaista, joissa oli aktiiviset parodontaalikohdat. Sen jälkeen röntgenkuvat digitoitiin skannerilla merkittyyn kuvatiedostomuotoon (TIFF). Digitaaliset vähennysröntgenkuvat tehtiin perusviivalla ja 2 kuukauden röntgenkuvilla käyttämällä erityistä ohjelmistoa. Tähän analyysiin otettiin mukaan vain hampaat, joissa oli interproksimaalisia kohtia, joissa oli parodontaalista aktiivisuutta. Röntgenkuvien väliset muutokset kuvattiin tummuneena alueena alveolaarisen luumassan menetyksen vuoksi. Nämä alueet mitattiin (mm2) käyttämällä erityistä mittausohjelmistoa. Kuten kliinisessä tutkimuksessa, tehtiin tutkijan sisäinen kalibrointi röntgentiheyshäviön alueiden mittauksia varten.

Ienkudosnäytteet otettiin kunkin potilaan aktiivisista kohdista molemmissa ryhmissä säännöllisen parodontaalileikkauksen aikana. Leikattu ienkaulus poistettiin sitten varovasti juurista ja keuhkorakkuloista. Ienbiopsia käsitti epiteeli- ja sidekudokset. Näytteet upotetaan välittömästi nestetyppeen ja säilytetään sitten -80 ºC:ssa RNA:n uuttamista ja geeniekspressioanalyysiä varten.

Kokonais-RNA biopsioista uutettiin käyttämällä Trizol-reagenssia valmistajan toimittamien ohjeiden mukaisesti. 1 ug:sta kokonais-RNA:ta syntetisoitiin komplementaarisen DNA:n (cDNA) juoste käänteistranskriptioreaktion avulla valmistajan toimittamien ohjeiden mukaisesti. Tämän reaktion lopussa cDNA säilytettiin -20 °C:ssa myöhempää käyttöä varten. Real Time Polymerase Chain Reaction (PCR) Array mahdollisti 84 geenin samanaikaisen analyysin, jotka osallistuvat tiettyihin signalointireitteihin. Geenit, jotka sisältyvät ihmisen tulehduksellisten sytokiinien ja reseptoreiden PCR-levyihin.