Diagnostiske biomarkører relatert til periodontal sykdomsaktivitet hos diabetikere

Denne case-control longitudinelle studien ble utført ved University of São Paulo mellom mars 2009 og juni 2012 som et samarbeid mellom Institutt for oral kirurgi og periodontologi og Institutt for indremedisin, avdeling for endokrinologi og metabolisme. Den ble gjennomgått og godkjent av Institutional Human Ethics Research Committee ved Ribeirão School of Dentistry - University of Sao Paulo (prosess nr. 2009.1.88.58.7).

Det kliniske festetapet over 1 mm ble bestemt i henhold til toleransemetoden tilpasset den datastyrte periodontale sonden, tatt i betraktning standardavviket på 0,3 mm for den elektroniske sonden multiplisert med 3. Tenner med protese eller furkasjonslesjoner ble ikke vurdert. De periodontale stedene som hadde denne kliniske tilknytningen ble kalt aktive steder.

Før den første kliniske undersøkelsen startet, ble det utført en supragingival skalering med ultralydapparat for å lette undersøkelsen. De kliniske parametrene som ble evaluert var: sonderingslommedybde, relativ klinisk festenivå og blødning ved sondering ble registrert på seks steder per tann ved hjelp av en datastyrt periodontal probe. For å redusere variasjonene mellom baseline- og 12-månedersevalueringer, ble en akrylstent brukt for å standardisere plasseringen av den datastyrte periodontale proben. Blødning ved sondering ble vurdert i henhold til tilstedeværelse eller fravær av blødning opptil 20 sekunder etter sondering. Plakkindeksen, tilstedeværelse eller fravær av biofilm, ble registrert på fire steder per tann. Det ble også verifisert furkasjonsinvolveringen ved hjelp av en manuell periodontal sonde.

Alle kliniske parametere ble registrert to uker etter supragingival skalering (baseline) og to måneder etter ikke-kirurgisk periodontal terapi av en-blindet kalibrert undersøker. En kalibreringsøvelse ble utført for å oppnå akseptabel intraeksaminator reproduserbarhet.

For den metabolske kontrollvurderingen ble HbA1c-nivåene analysert hos pasienter fra begge grupper ved baseline og to måneder etter ikke-kirurgisk periodontal terapi, ved endokrinologisk klinikk ved Ribeirão Preto School of Medicine, University of São Paulo. Alle diabetikere var under tilsyn av en endokrinolog som ble bedt om å informere om enhver endring i medisininntak eller kosthold.

Et program for plakkkontroll med tannprofylakse og instruksjoner om munnhygiene, og skalerings- og rotplanleggingsøktene ble utført av samme operatør ved bruk av kyretter og et ultralydapparat i PD- og PD+DM-grupper. Alle prosedyrer for skalering og rotplanlegging ble inspisert for en annen operatør. Munnhygiene ble gjennomgått etter en uke og etter en måned med periodontal desinfeksjon, etterfulgt av tannprofylakse.

I PD+DM-gruppen var den ikke-kirurgiske periodontale behandlingen assosiert med systemisk doksycyklin 100 mg/dag, i to uker etter en startdose på 200 mg, startet dagen før periodontal behandling. Pasienter i PD-gruppen hadde ikke tilgang til informasjon om antibiotikaadministrasjon til pasienter i PD+DM-gruppen.

Ikke-stimulert helt ekspektorert spytt ble samlet (~ 3 ml) fra hvert individ i sterile rør. Forsøkspersonene ble avholdt fra å spise, drikke og munnhygiene i 2 timer før spyttoppsamling. Spyttprøver ble plassert på is umiddelbart og alikvotert før frysing ved -80º Celsius. Prøver ble tint og analysert innen 6 måneder etter innsamling.

En komplett serie med røntgenbilder ble tatt av hver pasient ved baseline ved bruk av parallellteknikk. To måneder etter periodontal terapi ble det tatt røntgenbilder med samme teknikk på tenner med aktive periodontale steder. Deretter ble røntgenbildene digitalisert i tagged image file format (TIFF) på en skanner. Digitale subtraksjonsrøntgenbilder ble utført med baseline- og 2-måneders røntgenbilder ved bruk av spesifikk programvare. Kun tenner med interproksimale steder med periodontal sykdomsaktivitet ble inkludert i denne analysen. Endringer mellom røntgenbilder ble avbildet som et mørklagt område for tap av alveolær benmasse. Disse områdene ble målt (mm2) ved hjelp av spesifikk måleprogramvare. Som i den kliniske undersøkelsen ble det utført intra-eksaminatorkalibrering for målinger av områder med radiografisk tetthetstap.

Gingivalvevsprøver ble tatt fra aktive steder hos hver pasient i begge grupper under vanlig periodontal kirurgi. Den utskårne tannkjøttkragen ble deretter forsiktig fjernet fra røttene og den alveolære prosessen. Gingivalbiopsi omfattet epitel- og bindevev. Prøvene blir umiddelbart nedsenket i flytende nitrogen for deretter å lagres ved -80º Celsius for RNA-ekstraksjon og genekspresjonsanalyse.

Totalt RNA fra biopsier ble ekstrahert ved å bruke Trizol-reagenset i henhold til instruksjonene gitt av produsenten. Fra 1 µg totalt RNA ble en tråd av komplementært DNA (cDNA) syntetisert gjennom en revers transkripsjonsreaksjon i henhold til instruksjonene gitt av produsenten. Ved slutten av denne reaksjonen ble cDNA lagret ved -20º Celsius for senere bruk. Real Time Polymerase Chain Reaction (PCR) Array tillot samtidig analyse av 84 gener involvert i spesifikke signalveier. Genene inkludert i PCR-arrayplater for humane inflammatoriske cytokiner og reseptorer.