Diagnostiske biomarkører relateret til periodontal sygdomsaktivitet hos diabetikere

Denne case-kontrol longitudinelle undersøgelse blev udført ved University of São Paulo mellem marts 2009 og juni 2012 som et fælles samarbejde mellem afdelingen for oral kirurgi og parodontologi og afdelingen for intern medicin, afdelingen for endokrinologi og stofskifte. Det blev gennemgået og godkendt af Institutional Human Ethics Research Committee ved Ribeirão School of Dentistry - University of Sao Paulo (proces n. 2009.1.88.58.7).

Det kliniske tilknytningstab over 1 mm blev bestemt i overensstemmelse med tolerancemetoden tilpasset den computeriserede parodontale sonde under hensyntagen til standardafvigelsen på 0,3 mm for den elektroniske sonde ganget med 3. Tænder med protese eller furkationslæsioner blev ikke taget i betragtning. De parodontale steder, der havde denne kliniske tilknytning, blev kaldt aktive steder.

Før den indledende kliniske undersøgelse blev påbegyndt, blev der udført en supragingival skalering med ultralydsanordning for at lette undersøgelsen. De evaluerede kliniske parametre var: sonderingslommedybde, relativ klinisk tilknytningsniveau og blødning ved sondering blev registreret på seks steder pr. tand ved hjælp af en computerstyret parodontalsonde. For at reducere variationerne mellem baseline og 12-måneders evalueringer blev en akrylstent brugt til at standardisere positionen af ​​den computeriserede parodontale sonde. Blødning ved sondering blev vurderet efter tilstedeværelse eller fravær af blødning op til 20 sekunder efter sondering. Plaqueindekset, tilstedeværelse eller fravær af biofilm, blev registreret på fire steder pr. tand. Det blev også verificeret, at furkationen var involveret ved hjælp af en manuel parodontalsonde.

Alle kliniske parametre blev registreret to uger efter supragingival skalering (baseline) og to måneder efter ikke-kirurgisk periodontal terapi af en-blindet kalibreret undersøger. En kalibreringsøvelse blev udført for at opnå acceptabel intraeksaminator reproducerbarhed.

Til den metaboliske kontrolvurdering blev HbA1c-niveauerne analyseret hos patienter fra begge grupper ved baseline og to måneder efter ikke-kirurgisk parodontal terapi på endokrinologisk klinik ved Ribeirão Preto School of Medicine, University of São Paulo. Alle diabetikere var under opsyn af en endokrinolog, der blev rådet til at meddele enhver ændring i medicinindtagelse eller kost.

Et program for plakkontrol med tandprofylakse og mundhygiejneinstruktion, og skalerings- og rodplanlægningssessionerne blev udført af den samme operatør ved hjælp af curetter og en ultralydsanordning i PD- og PD+DM-grupper. Alle skalerings- og rodplanlægningsprocedurer blev inspiceret for en anden operatør. Mundhygiejnen blev gennemgået efter en uge og efter en måneds periodontal desinfektion, efterfulgt af tandprofylakse.

I PD+DM-gruppen var den ikke-kirurgiske parodontale terapi forbundet med systemisk doxycyclin 100 mg/dag i to uger efter en indledende dosis på 200 mg, startet dagen før parodontalbehandling. Patienter i PD-gruppen havde ingen adgang til information om administration af antibiotika til patienter i PD+DM-gruppen.

Ikke-stimuleret hel ekspektoreret spyt blev opsamlet (~ 3 ml) fra hvert individ i sterile rør. Forsøgspersoner blev afholdt fra at spise, drikke og mundhygiejne i 2 timer før spytopsamling. Spytprøver blev anbragt på is med det samme og alikvoteret før frysning ved -80º Celsius. Prøver blev optøet og analyseret inden for 6 måneder efter indsamling.

En komplet serie af røntgenbilleder blev taget af hver patient ved baseline ved hjælp af parallelteknikken. To måneder efter parodontalbehandling blev der taget røntgenbilleder med samme teknik i tænder med aktive parodontale steder. Herefter blev røntgenbillederne digitaliseret i tagget billedfilformat (TIFF) på en scanner. Digitale subtraktionsrøntgenbilleder blev udført med baseline- og 2-måneders røntgenbilleder ved brug af specifik software. Kun tænder med interproksimale steder med periodontal sygdomsaktivitet blev inkluderet i denne analyse. Ændringer mellem røntgenbilleder blev afbildet som et mørklagt område for tab af alveolær knoglemasse. Disse områder blev målt (mm2) ved hjælp af specifik målesoftware. Som i den kliniske undersøgelse blev det udført intra-eksaminatorkalibrering til målingerne af områder med radiografisk tæthedstab.

Gingivalvævsprøver blev opnået fra aktive steder hos hver patient i begge grupper under regelmæssig periodontal kirurgi. Den udskårne tandkødskrave blev derefter forsigtigt fjernet fra rødderne og den alveolære proces. Gingival biopsi omfattede epitel- og bindevæv. Prøverne nedsænkes straks i flydende nitrogen for derefter at blive opbevaret ved -80º Celsius til RNA-ekstraktion og genekspressionsanalyse.

Total RNA fra biopsier blev ekstraheret under anvendelse af Trizol-reagenset i henhold til anvisningerne fra producenten. Fra 1 µg totalt RNA blev en streng af komplementært DNA (cDNA) syntetiseret gennem en omvendt transkriptionsreaktion i henhold til anvisningerne leveret af producenten. Ved afslutningen af ​​denne reaktion blev cDNA opbevaret ved -20º Celsius til senere brug. Real Time Polymerase Chain Reaction (PCR) Array tillod samtidig analyse af 84 gener involveret i specifikke signalveje. Generne inkluderet i PCR-arrayplader for humane inflammatoriske cytokiner og receptorer.