糖尿病患者の歯周病活動性に関連する診断用バイオマーカー

この症例対照縦断研究は、口腔外科・歯周病科と内科・内分泌代謝科の共同研究として、2009年3月から2012年6月までサンパウロ大学で実施された。 これは、サンパウロ大学リベイロン歯学部の施設内人間倫理研究委員会によって審査され、承認されました (プロセス番号 2009.1.88.58.7)。

1 mm を超える臨床的付着損失は、電子プローブの標準偏差 0.3 mm に 3 を乗算して考慮し、コンピュータ化された歯周プローブに適合した公差法に従って決定されました。補綴物または根分岐部病変のある歯は考慮されませんでした。 この臨床的付着を有する歯周部位は活性部位と呼ばれた。

最初の臨床検査を開始する前に、検査を容易にするために、超音波装置を使用した歯肉縁上のスケーリングが実行されました。 評価された臨床パラメータは次のとおりでした。プロービングポケットの深さ、相対的な臨床付着レベル、およびプロービング時の出血は、コンピューター化された歯周プローブを使用して歯ごとに 6 つの部位で記録されました。 ベースライン評価と 12 か月後の評価間の変動を減らすために、アクリル製ステントを使用してコンピューター化された歯周プローブの位置を標準化しました。 プロービング時の出血は、プロービング後20秒までの出血の有無により評価した。 プラークインデックス、バイオフィルムの有無を、歯ごとに 4 つの部位で記録しました。 手動歯周プローブを使用して分岐部の関与も確認されました。

すべての臨床パラメーターは、歯肉縁上のスケーリング (ベースライン) の 2 週間後、および非外科的歯周治療の 2 か月後に、1 盲検校正検査者によって記録されました。 検者内での許容可能な再現性を達成するために、校正作業が実行されました。

代謝制御の評価のために、サンパウロ大学リベイラン・プレト医学部の内分泌クリニックで、ベースライン時と非外科的歯周治療の2か月後の両群の患者のHbA1cレベルが分析された。 すべての糖尿病患者は内分泌専門医の監督下にあり、薬の摂取や食事の変更を伝えるようアドバイスを受けました。

歯科予防と口腔衛生指導を伴うプラークコントロールのプログラム、およびスケーリングとルートプランニングのセッションは、PD グループと PD+DM グループでキューレットと超音波装置を使用して同じオペレーターによって実行されました。 2 人目のオペレーターについては、すべてのスケーリングおよびルート プランニングの手順が検査されました。 歯周消毒の 1 週間後と 1 か月後に口腔衛生を見直し、その後に歯科予防を実施しました。

PD+DM群では、非外科的歯周治療は、歯周治療前日に開始したドキシサイクリン100 mg/日の初回用量200 mgから2週間の全身投与と関連していた。 PD グループの患者は、PD+DM グループの患者への抗生物質投与に関する情報にアクセスできませんでした。

刺激されていない全喀出唾液を各被験者から滅菌チューブに収集しました (約 3 ml)。 被験者は唾液採取前の2時間、飲食および口腔衛生を控えた。 唾液サンプルは直ちに氷上に置かれ、-80℃で凍結する前に小分けされました。 サンプルは収集から 6 か月以内に解凍され、分析されました。

平行法を使用して、ベースライン時に各患者の完全な一連の X 線写真が撮影されました。 歯周治療の 2 か月後、活動性の歯周部位のある歯で同じ技術を使用して X 線写真を撮影しました。 その後、X 線写真はスキャナーでタグ付き画像ファイル形式 (TIFF) でデジタル化されました。 デジタルサブトラクション X 線写真は、特定のソフトウェアを使用して、ベースラインおよび 2 か月後の X 線写真で実行されました。 この分析には、歯周病活動性のある隣接歯間部位を持つ歯のみが含まれていました。 X 線写真間の変化は、歯槽骨量の減少の暗い領域として示されました。 これらの面積は、特定の測定ソフトウェアを使用して測定されました (mm2)。 臨床検査と同様に、X 線濃度損失領域の測定に関して検査者内キャリブレーションが実行されました。

歯肉組織サンプルは、定期的な歯周手術中に両グループの各患者の活動部位から採取されました。 次いで、切除した歯肉カラーを根および歯槽突起から注意深く除去した。 歯肉生検には上皮組織と結合組織が含まれていました。 サンプルはすぐに液体窒素に浸され、RNA 抽出と遺伝子発現分析のために摂氏 -80 度で保存されます。

生検からの全 RNA は、製造元の指示に従って Trizol 試薬を使用して抽出されました。 1 μg のトータル RNA から、メーカーの指示に従って逆転写反応を通じて相補 DNA (cDNA) 鎖を合成しました。 この反応の終了後、後で使用するために cDNA を摂氏 -20 度で保存しました。 リアルタイム ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) アレイにより、特定のシグナル伝達経路に関与する 84 個の遺伝子の同時分析が可能になりました。 ヒト炎症性サイトカインおよび受容体の PCR アレイ プレートに含まれる遺伝子。