당뇨병 환자의 치주질환 활동과 관련된 진단 바이오마커

이 케이스 컨트롤 종적 연구는 2009년 3월부터 2012년 6월까지 상파울루 대학에서 구강외과 및 치주과와 내분비 및 대사과 내과의 공동 협력으로 수행되었습니다. Ribeirão School of Dentistry - University of Sao Paulo의 Institutional Human Ethics Research Committee에서 검토하고 승인했습니다(프로세스 n. 2009.1.88.58.7).

1mm 이상의 임상 부착 손실은 전자 탐침의 표준 편차 0.3mm에 3을 곱한 것을 고려하여 전산 치주 탐침에 적응된 공차 방법에 따라 결정되었습니다. 보철물 또는 이개부 병변이 있는 치아는 고려하지 않았습니다. 이러한 임상 부착을 갖는 치주 부위를 활성 부위라고 합니다.

초기 임상 검사를 시작하기 전에 검사를 용이하게 하기 위해 초음파 장치를 사용한 치은연상 스케일링을 수행했습니다. 평가된 임상 매개변수는 다음과 같습니다: 프로빙 포켓 깊이, 상대적인 임상 부착 수준 및 프로빙 시 출혈은 컴퓨터화된 치주 탐침의 도움으로 치아당 6개 부위에서 기록되었습니다. 기준선과 12개월 평가 사이의 편차를 줄이기 위해 아크릴 스텐트를 사용하여 전산화된 치주 탐침의 위치를 ​​표준화했습니다. 탐침 시 출혈은 탐침 후 최대 20초까지 출혈의 유무에 따라 평가되었습니다. 치태 지수, 생물막의 유무를 치아당 4개 부위에서 기록했습니다. 또한 수동 치주 탐침의 도움으로 이개부 침범을 확인했습니다.

모든 임상 매개변수는 치은연상 스케일링(기준선) 2주 후와 비수술적 치주 치료 2개월 후 1-맹검 보정 검사자에 의해 기록되었습니다. 허용 가능한 심사관 내 재현성을 달성하기 위해 보정 연습을 수행했습니다.

대사 조절 평가를 위해 상파울루 대학교 Ribeirão Preto 의과대학의 내분비학 클리닉에서 기준선과 비수술적 치주 치료 2개월 후 두 그룹의 환자에서 HbA1c 수치를 분석했습니다. 모든 당뇨병 환자는 내분비학자의 감독 하에 약물 섭취 또는 식이의 변화를 알리도록 권고받았습니다.

PD 및 PD+DM 그룹에서 동일한 작업자가 큐렛과 초음파 장치를 사용하여 치과 예방 및 구강 위생 교육을 통한 플라크 제어 프로그램, 스케일링 및 치근 계획 세션을 수행했습니다. 두 번째 작업자를 위해 모든 스케일링 및 루트 계획 절차를 검사했습니다. 구강위생은 1주일 후, 1개월 후 치주소독 후 치아예방을 시행하였다.

PD+DM 그룹에서 비수술적 치주 치료는 치주 치료 전날 시작하여 200mg의 초기 용량을 투여한 후 2주 동안 전신 독시사이클린 100mg/일과 관련이 있었습니다. PD 그룹의 환자는 PD+DM 그룹의 환자에 대한 항생제 투여에 대한 정보에 접근할 수 없었습니다.

비자극된 전체 객담 타액을 멸균 튜브에 각 피험자로부터 수집했습니다(~ 3 ml). 대상자는 타액 채취 전 2시간 동안 음식물 섭취 및 구강위생을 삼가하였다. 타액 샘플을 즉시 얼음 위에 놓고 -80ºC에서 동결하기 전에 분주했습니다. 샘플은 수집 후 6개월 이내에 해동 및 분석되었습니다.

평행 기술을 사용하여 기준선에서 각 환자의 완전한 일련의 방사선 사진을 촬영했습니다. 치주 치료 2개월 후 활성 치주 부위가 있는 치아에서 동일한 기술로 방사선 사진을 촬영했습니다. 그 후, 방사선 사진은 스캐너에서 TIFF(tagged image file format)로 디지털화되었습니다. 특정 소프트웨어를 사용하여 기준선 및 2개월 방사선 사진으로 디지털 빼기 방사선 사진을 수행했습니다. 치주 질환 활동이 있는 치간 부위가 있는 치아만 이 분석에 포함되었습니다. 방사선 사진 사이의 변화는 치조골 질량 손실에 대해 어두운 영역으로 묘사되었습니다. 이 영역은 특정 측정 소프트웨어를 사용하여 측정되었습니다(mm2). 임상검사에서와 마찬가지로 방사선학적 밀도 손실 부위 측정을 위해 검사자 내 교정을 시행하였다.

잇몸 조직 샘플은 정기적인 치주 수술 동안 두 그룹의 각 환자의 활성 부위에서 채취되었습니다. 그런 다음 절제된 치은 칼라를 치근과 치조 돌기에서 조심스럽게 제거했습니다. 치은 생검은 상피 조직과 결합 조직으로 구성됩니다. RNA 추출 및 유전자 발현 분석을 위해 샘플을 즉시 액체 질소에 담근 후 -80ºC에 보관합니다.

제조업체에서 제공한 지침에 따라 Trizol 시약을 사용하여 생검에서 총 RNA를 추출했습니다. 총 RNA 1 μg에서 제조업체의 지시에 따라 역전사 반응을 통해 상보적 DNA(cDNA) 가닥을 합성했습니다. 이 반응이 끝나면 cDNA는 나중에 사용하기 위해 -20ºC에 보관했습니다. Real Time Polymerase Chain Reaction (PCR) Array는 특정 신호 전달 경로에 관련된 84개의 유전자를 동시에 분석할 수 있게 해주었습니다. 인간 염증성 사이토카인 및 수용체에 대한 PCR 어레이 플레이트에 포함된 유전자.