Biomarcadores de diagnóstico relacionados con la actividad de la enfermedad periodontal en diabéticos

Este estudio longitudinal de casos y controles se llevó a cabo en la Universidad de São Paulo entre marzo de 2009 y junio de 2012 como una colaboración conjunta del Departamento de Cirugía Oral y Periodoncia y el Departamento de Medicina Interna, División de Endocrinología y Metabolismo. Fue revisado y aprobado por el Comité Institucional de Investigación en Ética Humana de la Facultad de Odontología de Ribeirão - Universidad de São Paulo (proceso n. 2009.1.88.58.7).

La pérdida de inserción clínica superior a 1 mm se determinó según el método de tolerancia adaptado a la sonda periodontal computarizada, considerando la desviación estándar de 0,3 mm para la sonda electrónica multiplicada por 3. No se consideraron los dientes con prótesis o lesiones de furca. Los sitios periodontales que tenían esta unión clínica se denominaron sitios activos.

Antes de iniciar el examen clínico inicial, se realizó un raspado supragingival con aparato ultrasónico para facilitar el examen. Los parámetros clínicos evaluados fueron: la profundidad de la bolsa al sondaje, el nivel relativo de inserción clínica y el sangrado al sondaje se registraron en seis sitios por diente con la ayuda de una sonda periodontal computarizada. Para reducir las variaciones entre la línea de base y las evaluaciones a los 12 meses, se utilizó un stent acrílico para estandarizar la posición de la sonda periodontal computarizada. El sangrado al sondaje se evaluó según la presencia o ausencia de sangrado hasta 20 segundos después del sondaje. El índice de placa, presencia o ausencia de biopelícula, se registró en cuatro sitios por diente. También se verificó el compromiso de la furca con la ayuda de una sonda periodontal manual.

Todos los parámetros clínicos se registraron dos semanas después del raspado supragingival (línea de base) y dos meses después de la terapia periodontal no quirúrgica por un examinador calibrado a ciegas. Se realizó un ejercicio de calibración para lograr una reproducibilidad intraexaminador aceptable.

Para la evaluación del control metabólico, se analizaron los niveles de HbA1c en pacientes de ambos grupos al inicio y dos meses después de la terapia periodontal no quirúrgica, en la Clínica de Endocrinología de la Facultad de Medicina de Ribeirão Preto, Universidad de São Paulo. Todos los diabéticos estaban bajo la supervisión de un endocrinólogo aconsejado para comunicar cualquier cambio en la toma de medicamentos o dieta.

Un mismo operador realizó un programa de control de placa con profilaxis dental e instrucción de higiene oral, y las sesiones de raspado y alisado radicular utilizando curetas y un dispositivo ultrasónico en los grupos de DP y DP+DM. Todos los procedimientos de raspado y alisado radicular fueron inspeccionados por un segundo operador. Se revisó la higiene bucal a la semana y al mes de desinfección periodontal, seguida de profilaxis dental.

En el grupo DP+DM, la terapia periodontal no quirúrgica se asoció con doxiciclina sistémica 100 mg/día, durante dos semanas después de una dosis inicial de 200 mg, iniciada el día anterior a la terapia periodontal. Los pacientes del grupo DP no tuvieron acceso a la información sobre la administración de antibióticos a los pacientes del grupo DP+DM.

Se recogió saliva total expectorada no estimulada (~ 3 ml) de cada sujeto en tubos estériles. Los sujetos se abstuvieron de comer, beber e higienizarse la boca durante 2 horas antes de la recolección de saliva. Las muestras de saliva se colocaron en hielo inmediatamente y se dividieron en alícuotas antes de congelarlas a -80º Celsius. Las muestras se descongelaron y analizaron dentro de los 6 meses posteriores a su recolección.

Se tomó una serie completa de radiografías en cada paciente al inicio del estudio, utilizando la técnica paralela. Dos meses después de la terapia periodontal, se tomaron radiografías con la misma técnica en dientes con sitios periodontales activos. Posteriormente, las radiografías se digitalizaron en formato de archivo de imagen etiquetada (TIFF) en un escáner. Se realizaron radiografías de sustracción digital con la basal ya los 2 meses mediante un software específico. Solo se incluyeron en este análisis los dientes con sitios interproximales con actividad de enfermedad periodontal. Los cambios entre las radiografías se representaron como un área oscurecida por la pérdida de masa ósea alveolar. Estas áreas se midieron (mm2) utilizando un software de medición específico. Al igual que en el examen clínico, se realizó calibración intraexaminador para las mediciones de áreas de pérdida de densidad radiográfica.

Se obtuvieron muestras de tejido gingival de los sitios activos de cada paciente en ambos grupos durante la cirugía periodontal regular. El cuello gingival extirpado se eliminó cuidadosamente de las raíces y del proceso alveolar. La biopsia gingival comprendió tejido epitelial y conectivo. Las muestras se sumergen inmediatamente en nitrógeno líquido para luego ser almacenadas a -80º Celsius para la extracción de ARN y análisis de expresión génica.

El ARN total de las biopsias se extrajo con el reactivo Trizol de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante. A partir de 1 µg de ARN total, se sintetizó una hebra de ADN complementario (ADNc) a través de una reacción de transcripción inversa de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante. Al final de esta reacción, el cDNA se almacenó a -20º Celsius para su uso posterior. La matriz de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR) permitió el análisis simultáneo de 84 genes implicados en vías de señalización específicas. Los genes incluidos en placas de matriz de PCR para citoquinas y receptores inflamatorios humanos.