Диагностические биомаркеры, связанные с активностью заболеваний пародонта у диабетиков

Это лонгитюдное исследование методом случай-контроль проводилось в Университете Сан-Паулу в период с марта 2009 г. по июнь 2012 г. в рамках совместного сотрудничества кафедры челюстно-лицевой хирургии и пародонтологии и кафедры внутренней медицины отделения эндокринологии и обмена веществ. Он был рассмотрен и одобрен Институциональным исследовательским комитетом по этике человека Стоматологической школы Рибейрао Университета Сан-Паулу (номер процесса 2009.1.88.58.7).

Потеря клинического прикрепления более 1 мм определялась в соответствии с методом толерантности, адаптированным к компьютерному пародонтальному зонду, с учетом стандартного отклонения 0,3 мм для электронного зонда, умноженного на 3. Зубы с протезами или поражением фуркаций не учитывались. Пародонтальные участки, которые имели такое клиническое прикрепление, назывались активными участками.

Перед началом первоначального клинического осмотра для облегчения осмотра было выполнено наддесневое удаление зубного камня с помощью ультразвукового устройства. Оценивались следующие клинические параметры: глубина кармана при зондировании, относительный уровень клинического прикрепления и кровоточивость при зондировании были зарегистрированы в шести местах на зуб с помощью компьютеризированного пародонтального зонда. Чтобы уменьшить различия между исходными и 12-месячными оценками, был использован акриловый стент для стандартизации положения компьютеризированного пародонтального зонда. Кровотечение при зондировании оценивали по наличию или отсутствию кровотечения в течение 20 с после зондирования. Индекс зубного налета, наличие или отсутствие биопленки регистрировали в четырех местах на зуб. Вовлечение фуркаций также было подтверждено с помощью ручного пародонтального зонда.

Все клинические параметры были зарегистрированы через две недели после наддесневого скейлинга (исходный уровень) и через два месяца после нехирургического пародонтологического лечения с помощью одного слепого калиброванного эксперта. Была проведена калибровка для достижения приемлемой воспроизводимости внутри исследователя.

Для оценки метаболического контроля уровни HbA1c были проанализированы у пациентов из обеих групп в начале исследования и через два месяца после нехирургического пародонтологического лечения в Клинике эндокринологии Медицинской школы Рибейран-Прету Университета Сан-Паулу. Все диабетики находились под наблюдением эндокринолога, которому было рекомендовано сообщать о любых изменениях в приеме лекарств или диете.

Программа борьбы с зубным налетом с профилактикой зубов и инструктажем по гигиене полости рта, а также сеансы удаления зубного камня и планирования корней выполнялись одним и тем же оператором с использованием кюреток и ультразвукового устройства в группах ПД и ПД+ДМ. Все процедуры масштабирования и корневого планирования были проверены для второго оператора. Гигиена полости рта была пересмотрена через неделю и через месяц пародонтальной дезинфекции с последующей стоматологической профилактикой.

В группе БП+СД нехирургическая пародонтальная терапия была связана с системным доксициклином 100 мг/сут в течение двух недель после начальной дозы 200 мг, начатой ​​за день до пародонтальной терапии. Пациенты группы БП не имели доступа к информации о назначении антибиотиков больным группы БП+СД.

Нестимулированную цельную отхаркивающую слюну собирали (~ 3 мл) у каждого субъекта в стерильные пробирки. Субъекты воздерживались от еды, питья и гигиены полости рта в течение 2 часов до сбора слюны. Образцы слюны немедленно помещали на лед и разделяли на аликвоты перед замораживанием при температуре -80°С. Образцы размораживали и анализировали в течение 6 месяцев после сбора.

Полная серия рентгенограмм была сделана у каждого пациента в начале исследования с использованием техники параллелизма. Через два месяца после пародонтологического лечения по той же методике были сделаны рентгенограммы зубов с активными участками пародонта. После этого рентгенограммы были оцифрованы в формате файла изображения с тегами (TIFF) на сканере. Цифровые субтракционные рентгенограммы были выполнены с исходными и 2-месячными рентгенограммами с использованием специального программного обеспечения. В этот анализ были включены только зубы с интерпроксимальными участками с активностью заболевания пародонта. Изменения между рентгенограммами изображались в виде затемненной области потери массы альвеолярной кости. Эти площади были измерены (мм2) с использованием специального программного обеспечения для измерений. Как и при клиническом обследовании, была проведена интраэкзаменаторская калибровка для измерения зон рентгенографической потери плотности.

Образцы десневой ткани были получены из активных участков каждого пациента в обеих группах во время обычной пародонтальной хирургии. Иссеченный десневой воротник осторожно удаляли с корней и альвеолярного отростка. Биопсия десны включала эпителиальную и соединительную ткани. Образцы немедленно погружают в жидкий азот, а затем хранят при температуре -80º по Цельсию для выделения РНК и анализа экспрессии генов.

Тотальную РНК из биоптатов экстрагировали с использованием реагента Trizol в соответствии с указаниями производителя. Из 1 мкг тотальной РНК синтезировали цепь комплементарной ДНК (кДНК) с помощью реакции обратной транскрипции в соответствии с указаниями производителя. По окончании этой реакции кДНК хранили при -20°С для последующего использования. Массив полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР) позволил провести одновременный анализ 84 генов, участвующих в определенных сигнальных путях. Гены, включенные в планшеты для ПЦР, для воспалительных цитокинов и рецепторов человека.