Biomarqueurs diagnostiques liés à l'activité de la maladie parodontale chez les diabétiques

Cette étude longitudinale cas-témoins a été réalisée à l'Université de São Paulo entre mars 2009 et juin 2012 dans le cadre d'une collaboration conjointe du Département de chirurgie buccale et de parodontologie et du Département de médecine interne, Division d'endocrinologie et métabolisme. Il a été examiné et approuvé par le Comité de recherche sur l'éthique humaine institutionnelle de l'École de médecine dentaire Ribeirão - Université de Sao Paulo (processus n. 2009.1.88.58.7).

La perte d'attache clinique supérieure à 1 mm a été déterminée selon la méthode de tolérance adaptée à la sonde parodontale informatisée, en considérant l'écart type de 0,3 mm pour la sonde électronique multiplié par 3. Les dents présentant des lésions de prothèse ou de furcation n'ont pas été prises en compte. Les sites parodontaux qui avaient cet attachement clinique étaient appelés sites actifs.

Avant de débuter l'examen clinique initial, un détartrage supragingival à l'aide d'un appareil à ultrasons a été réalisé pour faciliter l'examen. Les paramètres cliniques évalués étaient : la profondeur de la poche au sondage, le niveau d'attache clinique relatif et le saignement au sondage ont été enregistrés sur six sites par dent à l'aide d'une sonde parodontale informatisée. Pour réduire les variations entre les évaluations de base et à 12 mois, un stent en acrylique a été utilisé pour normaliser la position de la sonde parodontale informatisée. Le saignement au sondage a été évalué selon la présence ou l'absence de saignement jusqu'à 20 secondes après le sondage. L'indice de plaque, présence ou absence de biofilm, a été enregistré sur quatre sites par dent. Il a également été vérifié l'implication de la furcation à l'aide d'une sonde parodontale manuelle.

Tous les paramètres cliniques ont été enregistrés deux semaines après le détartrage supragingival (ligne de base) et deux mois après le traitement parodontal non chirurgical par un examinateur calibré en un aveugle. Un exercice d'étalonnage a été effectué pour obtenir une reproductibilité intra-examinateur acceptable.

Pour l'évaluation du contrôle métabolique, les niveaux d'HbA1c ont été analysés chez les patients des deux groupes au départ et deux mois après le traitement parodontal non chirurgical, à la Clinique d'endocrinologie de l'École de médecine Ribeirão Preto, Université de São Paulo. Tous les diabétiques étaient sous la supervision d'un endocrinologue avisé de communiquer tout changement de prise de médicaments ou de régime alimentaire.

Un programme de contrôle de la plaque avec prophylaxie dentaire et instruction d'hygiène bucco-dentaire, ainsi que les séances de détartrage et de surfaçage radiculaire ont été réalisés par le même opérateur à l'aide de curettes et d'un appareil à ultrasons dans les groupes PD et PD+DM. Toutes les procédures de détartrage et de surfaçage radiculaire ont été inspectées pour un deuxième opérateur. L'hygiène buccale a été revue après une semaine et après un mois de désinfection parodontale, suivie d'une prophylaxie dentaire.

Dans le groupe PD+DM, le traitement parodontal non chirurgical était associé à la doxycycline systémique 100 mg/j, pendant deux semaines après une dose initiale de 200 mg, débutée la veille du traitement parodontal. Les patients du groupe PD n'avaient pas accès aux informations sur l'administration d'antibiotiques aux patients du groupe PD+DM.

La salive expectorée entière non stimulée a été recueillie (~ 3 ml) de chaque sujet dans des tubes stériles. Les sujets ont été abstenus de manger, de boire et d'hygiène buccale pendant 2 heures avant le prélèvement de salive. Les échantillons de salive ont été immédiatement placés sur de la glace et aliquotés avant d'être congelés à -80° Celsius. Les échantillons ont été décongelés et analysés dans les 6 mois suivant le prélèvement.

Une série complète de radiographies a été prise chez chaque patient au départ, en utilisant la technique de mise en parallèle. Deux mois après le traitement parodontal, des radiographies ont été prises avec la même technique sur les dents avec des sites parodontaux actifs. Par la suite, les radiographies ont été numérisées au format TIFF (tagged image file format) sur un scanner. Des radiographies numériques en soustraction ont été réalisées avec les radiographies de référence et à 2 mois à l'aide d'un logiciel spécifique. Seules les dents avec des sites interproximaux avec une activité de maladie parodontale ont été incluses dans cette analyse. Les changements entre les radiographies ont été représentés comme une zone sombre pour la perte de masse osseuse alvéolaire. Ces surfaces ont été mesurées (mm2) à l'aide d'un logiciel de mesure spécifique. Comme pour l'examen clinique, il a été effectué un calibrage intra-examinateur pour les mesures des zones de perte de densité radiographique.

Des échantillons de tissu gingival ont été obtenus à partir des sites actifs de chaque patient dans les deux groupes au cours d'une chirurgie parodontale régulière. Le collet gingival excisé a ensuite été soigneusement retiré des racines et du processus alvéolaire. La biopsie gingivale comprenait des tissus épithéliaux et conjonctifs. Les échantillons sont immédiatement immergés dans de l'azote liquide pour être ensuite stockés à -80 ° Celsius pour l'extraction de l'ARN et l'analyse de l'expression génique.

L'ARN total des biopsies a été extrait à l'aide du réactif Trizol selon les instructions fournies par le fabricant. A partir de 1 µg d'ARN total, un brin d'ADN complémentaire (ADNc) a été synthétisé par une réaction de transcription inverse selon les instructions fournies par le fabricant. À la fin de cette réaction, l'ADNc a été stocké à -20 ° Celsius pour une utilisation ultérieure. Le Real Time Polymerase Chain Reaction (PCR) Array a permis l'analyse simultanée de 84 gènes impliqués dans des voies de signalisation spécifiques. Les gènes inclus dans les plaques de matrice PCR pour les cytokines et les récepteurs inflammatoires humains.