Diagnosztikai biomarkerek a diabéteszes fogágybetegségek aktivitásával kapcsolatban

Ezt az eset-kontroll longitudinális vizsgálatot a São Paulo Egyetemen végezték 2009 márciusa és 2012 júniusa között a Szájsebészeti és Parodontológiai Osztály és a Belgyógyászati ​​Osztály, az Endokrinológiai és Metabolizmus Osztály közös együttműködéseként. A Sao Paulói Egyetem Ribeirão Fogorvosi Iskola Intézményi Humánetikai Kutatóbizottsága felülvizsgálta és jóváhagyta (folyamat száma 2009.1.88.58.7).

Az 1 mm feletti klinikai tapadási veszteséget a számítógépes periodontális szondához adaptált tolerancia módszerrel határoztuk meg, figyelembe véve az elektronikus szonda 0,3 mm-es szórását szorozva 3-mal. A protézises vagy furkációs elváltozásokat nem vettük figyelembe. Azokat a periodontális helyeket, amelyeknél ez a klinikai kötődés volt, aktív helyeknek nevezték.

A kezdeti klinikai vizsgálat megkezdése előtt ultrahangos készülékkel supragingivális hámozást végeztünk a vizsgálat megkönnyítése érdekében. Az értékelt klinikai paraméterek a következők voltak: a szondázási zseb mélységét, a relatív klinikai kötődési szintet és a szondázáskor jelentkező vérzést foganként hat helyen rögzítettük egy számítógépes periodontális szonda segítségével. Az alapvonal és a 12 hónapos értékelések közötti eltérések csökkentése érdekében akril stentet alkalmaztak a számítógépes periodontális szonda helyzetének szabványosítására. A szondázáskor jelentkező vérzést a vérzés megléte vagy hiánya szerint értékeltük a szondázás után 20 másodpercig. A plakk indexet, a biofilm jelenlétét vagy hiányát foganként négy helyen rögzítettük. A furkáció érintettségét kézi parodontális szondával is igazoltuk.

Az összes klinikai paramétert két héttel a supragingivális skálázás után (alapvonal) és két hónappal a nem sebészeti parodontális terápia után rögzítettük egy vakkalibrált vizsgáló által. Kalibrációs gyakorlatot végeztünk az elfogadható intraexaminer reprodukálhatóság elérése érdekében.

A metabolikus kontroll értékeléséhez a HbA1c-szinteket mindkét csoportban elemezték a kiinduláskor és két hónappal a nem sebészeti parodontális terápia után a Ribeirão Preto Orvostudományi Kar endokrinológiai klinikáján, a São Paulo-i Egyetemen. Minden cukorbeteg endokrinológus felügyelete alatt állt, és azt tanácsolták, hogy közöljék a gyógyszerbevitel vagy az étrend változásait.

A PD és PD+DM csoportokban egy plakk kontroll programot fogászati ​​profilaxissal és szájhigiénés oktatással, valamint a pikkelysömör és a gyökértervezést ugyanaz a kezelő végezte küretekkel és ultrahangos készülékkel. Minden méretezési és gyökértervezési eljárást megvizsgáltak egy második operátor számára. A szájhigiéniát egy hét és egy hónapos parodontális fertőtlenítés után felülvizsgálták, majd fogászati ​​profilaxist követtek.

A PD+DM csoportban a nem műtéti periodontális terápia 100 mg/nap szisztémás doxiciklinnel járt, két hétig a 200 mg-os kezdő adag után, a parodontális kezelést megelőző napon elkezdve. A PD csoportba tartozó betegek nem fértek hozzá a PD+DM csoportba tartozó betegek antibiotikum-kezelésére vonatkozó információkhoz.

Nem stimulált, teljes köptető nyálat gyűjtöttünk (~ 3 ml) minden alanytól steril csövekbe. Az alanyok a nyálgyűjtés előtt 2 órával tartózkodtak az evéstől, ivástól és a szájhigiéniától. A nyálmintákat azonnal jégre helyeztük, és -80 °C-ra történő fagyasztás előtt aliquot részekre osztották. A mintákat felolvasztottuk és elemeztük a begyűjtést követő 6 hónapon belül.

A kiinduláskor minden betegről teljes röntgenfelvétel-sorozat készült, párhuzamosítási technikával. Két hónappal a parodontális kezelés után röntgenfelvételt készítettek ugyanazzal a technikával az aktív parodontális helyekkel rendelkező fogakról. Ezt követően a röntgenfelvételeket címkézett képfájl formátumban (TIFF) digitalizálták egy szkenneren. A digitális kivonásos röntgenfelvételeket az alapvonal és a 2 hónapos röntgenfelvételekkel végeztük speciális szoftver segítségével. Csak olyan fogak kerültek bele ebbe az elemzésbe, amelyeknek interproximális helyei vannak, amelyekben a parodontális betegség aktív. A röntgenfelvételek közötti változásokat az alveoláris csonttömeg elvesztése miatt elsötétített területként ábrázoltuk. Ezeket a területeket (mm2) speciális mérőszoftverrel mértük. A klinikai vizsgálathoz hasonlóan a radiográfiás denzitásvesztéses területek mérésére intra-vizsgáló kalibrációt végeztünk.

A fogínyszövet mintákat mindkét csoportban a páciensek aktív helyéről vettük a rendszeres parodontális műtét során. A kimetszett ínygallért ezután óvatosan eltávolítottuk a gyökerekről és az alveoláris folyamatról. Az ínybiopszia epitheliális és kötőszövetekből állt. A mintákat azonnal folyékony nitrogénbe merítik, majd -80°C-on tárolják RNS extrakcióhoz és génexpressziós elemzéshez.

A biopsziákból származó teljes RNS-t Trizol reagenssel extraháltuk a gyártó utasításai szerint. 1 µg teljes RNS-ből egy komplementer DNS (cDNS) szálat szintetizáltunk reverz transzkripciós reakcióval a gyártó utasításai szerint. A reakció végén a cDNS-t -20 °C-on tároltuk későbbi felhasználás céljából. A valós idejű polimeráz láncreakció (PCR) array lehetővé tette 84 gén egyidejű elemzését, amelyek specifikus jelátviteli útvonalakban vesznek részt. A humán gyulladásos citokinek és receptorok PCR array lemezeiben szereplő gének.