用 rhFGF-2/HA 再生人类骨内缺损

研究人群和实验设计 本研究设计为随机、前瞻性、分口对照临床试验。 它是根据世界医学协会赫尔辛基宣言（第六版，2002 年）的指导方针进行的，经过研究设计的批准并得到联邦弗鲁米嫩塞大学医学研究伦理委员会医学院的同意（批准协议 CEP -HUAM/CCM 21/03)。 获得所有受试者的书面知情同意书。 全身健康的中度至晚期慢性牙周炎患者被转诊至联邦弗鲁米嫩塞大学牙科学院牙周病学系进行晚期牙周炎的牙周治疗，并在该研究中进行了治疗。

该研究的纳入标准是：(a) 患有慢性牙周炎的成年受试者表现出 (b) 牙齿近端的影像学证据表明牙槽骨丢失，(c) 骨内缺损深度超过 4 毫米，(d) 探诊深度 >6 毫米在现场，(e) 根据病史和临床判断，一般健康状况不明显，(f) 在研究开始前至少六个月未服用药物且十二个月未服用抗生素。 在研究开始前戒烟至少一年的受试者被视为非吸烟者，如果满足其他纳入标准，则被纳入本样本。 该研究的排除标准是：(a) 患有“早发性”或侵袭性牙周炎的受试者，(b) 当前吸烟者，(c) 存在严重的全身性疾病（即癌症、艾滋病、糖尿病），(d) 临床分叉缺陷的证据，(e) 存在根尖放射性和 (f) 之前缺乏与维护计划的合作。

从每位患者中选择两个缺损，并在每次手术预约之前通过计算机生成的随机序列分配随机分配给所采用的两种治疗方式之一：（a）对照：通过皮瓣开放根表面和骨缺损的仪器改良乳头保留皮瓣； (b) 测试：通过皮瓣改良的乳头保存皮瓣和在骨内缺损中应用 rhFGF-2/HA 对根表面和骨缺损进行开放式器械检查。 治疗分配记录在分配表中，临床检查员在整个研究过程中无法获得该表。 对照部位和试验部位均在同一次手术预约中接受治疗，但未向患者提供有关治疗分配的信息。 所有外科手术均由一名操作员执行，该操作员仅在完成根部规划和调节后，以及在测试部位应用生长因子之前，才了解部位分配。 采用了严格的手术方案，强调仔细的硬组织和软组织管理、牙根清创术、伤口稳定性和感染控制（Santana 等人 2009 年；Miranda 等人 2013 年）。 非手术感染控制是在病因相关牙周治疗的背景下进行的，包括口腔卫生指导、刮治和牙根平整、牙齿抛光和再生手术前六个月进行的牙菌斑控制措施。 在完成非手术原因相关牙周治疗后三个月和六个月，对患者进行了重新评估，并在随后的评估预约后入组。

临床记录 临床参数使用牙骨质牙釉质交界处 (CEJ) 或适用时另一个定义的地标作为固定参考点进行评估。 所有测量值均由一位经过培训和校准的盲法检查员 (CMMS) 使用 UNC #15 牙周探针（PCP-UNC 15，Hu-Friedy，美国伊利诺伊州芝加哥）记录，该检查员不知道基线时和一年后提供的治疗治疗。 测量结果记录到最接近的毫米。 全口菌斑评分 (FMPS) 以二分法记录为总表面的百分比（每颗牙齿四个部位）（O'Leary 等人，1972 年）。 还在同一部位对 BOP 进行了二分法评估，并计算了全口出血评分。 衰退 (REC) 测量为从 CEJ 到牙龈边缘 (GM) 的距离。 探测深度 (PD) 测量为从 GM 到龈沟底部的距离。 PD 和 REC 用于计算垂直临床附着水平 (PAL)。 在局部麻醉下，进行穿龈探查并记录 CEJ 与缺损底部之间的距离（距离 CEJ-BD）。 报告了在基线（紧接在手术前）和十二个月时获得的临床测量值。 手术部位清创后，缺损底部 (BD) 定义为牙骨质-牙釉质交界处与缺损基底部之间的距离。 骨嵴水平 (BC) 测量为牙骨质牙釉质交界处和缺损嵴之间的距离，骨内缺损深度 (INTRA) 测量为从 BD 测量值 (BD-BC) 中减去 BC。 此外，还测量了骨缺损的三个、两个和一个壁子组件的深度。 本研究的主要和次要结果变量分别是 PAL 和骨增益的变化（CEJ-BD 距离的变化）。

为了确保干预前后测量的可重复性和一致性，在研究开始前进行了检查者校准。 检查者在两个不同的场合评估了 7 名患者的 14 个部位，探诊深度 > 6 毫米，相隔 48 小时。

皮瓣设计 做牙槽内切口，并通过钝性分离抬高颊舌粘膜骨膜瓣，包括至少一颗牙齿近中和另一颗远中牙齿。 非常小心地保护边缘牙龈和牙间组织，以实现治疗部位更好的闭合。 因此，根据适应症，使用乳头保护瓣技术（Takey 1985，Cortellini 等人 1995，Cortellini 等人 1999）接近缺损相关的牙间乳头。 必要时在皮瓣的内侧进行垂直释放切口，以优化、无张力地进入手术区域。

根部和骨缺损清创术 用外科刮匙和超声仪器仔细清创骨缺损，特别努力去除所有炎性肉芽组织，但不打算穿孔皮质骨壁。 用手（Hu-Friedy，IL，美国）、旋转（Intensiv，Grancia，瑞士）和超声波仪器（Cavitron，Dentisply，美国）进行彻底的根面平整，以去除龈下菌斑和牙结石，直到所有根面都达到坚硬的玻璃状表面。 在器械操作过程中，皮瓣略微升高，用骨膜剥离器小心保护，并经常用生理盐水冲洗。

牙根调理和 rhFGF-2 应用 仪器处理后，用盐水溶液清洗牙根表面，以去除缺损和手术区域中任何剩余的脱落碎片。 然后，在测试组和对照组的仪器化和干燥的根表面上以轻微的圆周运动施加新鲜配制的四环素盐酸盐糊剂三分钟。 之后，用生理盐水仔细冲洗缺损区域。 最后，在实验部位，将 0.2ml 含有 4mg/ml rhFGF-2 的透明质酸钠凝胶 MW 1.3 x 106 应用于干燥的牙根表面和骨缺损处。 然后将皮瓣重新定位，并使用内部床垫和单间断缝合（5.0 Ethicon Sutures，Johnson & Johnson，NJ，USA 或 Gore-tex Sutures，W.L Gore，AZ，USA）获得无张力初级皮瓣闭合。

术后治疗 患者在手术前一天接受全身抗生素治疗，包括 200 毫克多西环素*****，然后每天 100 毫克，一直持续到手术后第 20 天。 没有使用手术敷料。 指示患者继续进行常规的家庭卫生护理，但手术区域除外，手术区域通过在饱和棉签中轻轻局部涂抹 0.2% 葡萄糖酸氯己定（Perioxidin®，Lacer，巴塞罗那，西班牙）进行清洁。 指导患者在 4 周内不要刷牙或使用牙线清洁手术区域，届时将重新建立机械斑块控制。 手术两周后拆线。 在外科手术之前或之后立即用夹板夹住过度活动的牙齿。

维护计划 患者在手术后参加了严格的术后支持性护理计划（Santana 等人，2009 年）。 所有患者在前三个月每周一次，在接下来的三个月每两周一次。 此后，在研究的最后六个月期间，每月对患者进行一次检查。 1 年后，患者被召回并重新指导他们正确的口腔卫生。 当指示时，站点被重新缩放。

射线照相评估 射线照相是在基线时采用平行的、标准化的技术拍摄的（Eickholz 等人，2004 年）。 使用 NIH 图像分析软件对射线照片进行数字化和分析。 该研究的解剖学标志包括牙骨质-牙釉质交界处 (CEJ)、牙槽嵴 (AC) 和缺损基部 (BD)（Schei 等人，1959 年）。 沿根面平行于根轴测量射线照相缺陷深度，作为 CEJ 和 BD 之间的距离。

统计分析 定量数据记录为平均值和标准偏差。 没有数据点丢失。 样本量由功效分析确定，假设差异的标准偏差为 0.5，这表明对于 20 名受试者的样本，该研究将具有 >90% 的功效来检测主要结果测量 PAL 增益的 1 毫米差异和两组之间的 CEJ-BD 减少。 为了验证数据的正态性，使用了峰度和偏度曲线。 因为所有数据都被认为对于所分析的参数是正常的，所以使用学生配对 t 检验进行组内（基线与 12 个月）和组间（测试与对照）比较。 在 ProStat 软件（Poly Software International，Pearl River，NY，USA）中执行的所有统计比较均使用设置为 5% 的显着性水平。