RealAmp 方法在巴西流行区诊断疟疾的验证

在全球范围内，每年约有 20 亿人生活在疟疾高发地区，发病率超过 2.5 亿，死亡人数约为 800,000。 在导致人类感染的四种疟疾寄生虫中，恶性疟原虫是大多数严重疟疾病例的罪魁祸首，其次是间日疟原虫。 早期和准确的诊断对于及时和正确的治疗至关重要，可以降低死亡率和阻断传播。 目前，诊断疟疾的常规方法包括薄和厚血涂片的显微镜检查和快速诊断测试 (RDT)。 光学显微镜在实践中通常检测到低至 100 个寄生虫/µl 的寄生虫血症，并且它可以区分物种。 显微镜的优势包括能够估计寄生虫血症、识别寄生虫阶段（包括配子体）的可能性及其低成本。 然而，这种方法是劳动密集型的，难以标准化，并且需要训练有素的显微镜技术人员。 大多数 RDT 基于检测恶性疟原虫富含组氨酸蛋白 2 (HRP-2) 抗原，并不检测所有疟疾种类。 检测乳糖脱氢酶 (LDH) 和醛缩酶的 RDT 通常与所有四种疟疾寄生虫发生广泛反应，因此无法区分物种，尽管正在努力提高其物种检测性能。 在多种疟疾共同传播的环境中，分子方法在准确诊断寄生虫血症低的疟原虫种类方面可能比显微镜和 RDT 更可靠。 然而，传统的分子方法，如巢式聚合酶链反应（巢式 PCR）或实时 PCR，在技术上具有挑战性且资源密集，并且由于需要装备精良的实验室，通常仅限于参考实验室。 最近，开发了可用于现场设置的新分子方法，这为在流行国家探索用于疟疾诊断的分子工具开辟了新的机会。 为了促进疟疾控制计划使用分子工具，美国亚特兰大疾病控制和预防中心 (CDC) 的疟疾实验室开发了一种简单的等温分子方法，称为实时荧光环介导等温扩增 (RealAmp) ) 用于疟疾的诊断。 目前，存在用于检测疟原虫属和检测恶性疟原虫和间日疟原虫种的 RealAmp 引物。 RealAmp 方法作为现场诊断疟疾（以及其他具有重大公共卫生影响的感染，如 HIV 和肺结核）的分子工具具有巨大潜力。 它可以替代传统的基于 PCR 的诊断方法，用于临床和操作程序的现场使用。 该提案的目的是验证 RealAmp 检测巴西两个流行州临床诊断为疟疾患者血斑中疟疾寄生虫的敏感性，同时存在恶性疟原虫和间日疟原虫。 在此评估中，RealAmp 和显微镜检查将与实时 PCR 方法进行比较，作为参考测试。