A RealAmp módszer validálása a malária diagnosztizálására Brazília endemikus területein

Világszerte megközelítőleg 2 milliárd ember él malária által veszélyeztetett területeken, ahol a megbetegedések száma meghaladja a 250 milliót, és évente körülbelül 800 000 haláleset. Az emberi fertőzést okozó négy maláriás parazitafaj közül a P. falciparum a felelős a súlyos maláriás esetek többségéért, ezt követi a P. vivax. A korai és pontos diagnózis elengedhetetlen a gyors és helyes kezeléshez, amely csökkentheti a halálozási arányt és megszakíthatja a fertőzést. Jelenleg a malária diagnózisának hagyományos módszerei közé tartozik a vékony és vastag vérkenetek mikroszkópos vizsgálata, valamint a gyors diagnosztikai tesztek (RDT). A fénymikroszkópos vizsgálat a gyakorlatban jellemzően már 100 parazita/µl-nél is kimutatja a parazitémiát, és képes megkülönböztetni a fajokat. A mikroszkópia előnyei közé tartozik a parazitémia becslésének képessége, a parazita stádiumok azonosításának lehetősége, beleértve a gametocitákat, valamint alacsony költsége. Ez a módszer azonban munkaigényes, nehezen szabványosítható, és jól képzett mikroszkópos szakembereket igényel. Az RDT-k többsége a P. falciparum hisztidinben gazdag protein 2 (HRP-2) antigén kimutatásán alapul, és nem mutat ki minden maláriafajt. A laktóz-dehidrogenázt (LDH) és az aldolázt detektáló RDT-k általában széles körben reagálnak a maláriaparaziták mind a négy fajával, és ezért nem tudnak különbséget tenni a fajok között, bár erőfeszítések folynak a fajok kimutatására irányuló teljesítményük javítására. Olyan körülmények között, ahol több maláriafaj együtt kering, a molekuláris módszerek megbízhatóbbak lehetnek, mint a mikroszkópia és az RDT-k az alacsony parazitémiával rendelkező maláriás parazita fajok pontos diagnosztizálásában. Azonban a hagyományos molekuláris módszerek, mint például a beágyazott polimeráz láncreakció (beágyazott PCR) vagy a valós idejű PCR, technikailag kihívást jelentenek és erőforrásigényesek, és általában a referencialaboratóriumokra korlátozódnak, mivel jól felszerelt laboratóriumokra van szükség. A közelmúltban olyan új molekuláris módszereket fejlesztettek ki, amelyek terepi körülmények között használhatók, és ez új lehetőségeket nyit meg a malária diagnosztizálására szolgáló molekuláris eszközök feltárására endémiás országokban. A malária-ellenőrzési programok molekuláris eszközeinek használatának megkönnyítése érdekében az atlantai Betegségellenőrzési és Megelőzési Központ (CDC) malárialaboratóriuma kifejlesztett egy egyszerű izoterm molekuláris módszert, a Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp) nevet. ) a malária diagnosztizálására. Jelenleg RealAmp primerek léteznek a Plasmodium nemzetség kimutatására, valamint a P. falciparum és P. vivax fajok kimutatására. A RealAmp módszer nagy potenciállal rendelkezik, mint molekuláris eszköz a malária terepen történő diagnosztizálására (és más, jelentős közegészségügyi hatással bíró fertőzésekre, mint például a HIV és a tuberkulózis). Alternatívát jelenthet a hagyományos PCR-alapú diagnosztikai módszerekhez képest a klinikai és operatív programokban való helyszíni felhasználáshoz. E javaslat célja a RealAmp érzékenységének validálása a maláriás paraziták kimutatására olyan betegek vérfoltjaiban, akiknél Brazília két endémiás államában malária diagnosztizáltak, és a P. falciparum és a P. vivax együtt kering. Ebben az értékelésben a RealAmp és a mikroszkópos vizsgálatot egy valós idejű PCR-módszerrel hasonlítják össze referenciatesztként.