Validering av RealAmp-metoden för diagnos av malaria i endemiska områden i Brasilien

Över hela världen lever cirka 2 miljarder människor i områden med risk för malaria med en sjuklighet som överstiger 250 miljoner fall, med cirka 800 000 dödsfall, per år. Av de fyra arter av malariaparasiter som orsakar infektion hos människor är P. falciparum ansvarig för majoriteten av allvarliga malariafall följt av P. vivax. Tidig och korrekt diagnos är avgörande för snabb och korrekt behandling, vilket kan minska dödligheten och avbryta överföringen. För närvarande inkluderar konventionella metoder för diagnos av malaria mikroskopisk undersökning av tunna och tjocka blodutstryk och snabba diagnostiska tester (RDT). Ljusmikroskopi i praktiken detekterar typiskt parasitemi så lågt som 100 parasiter/µl och det kan differentiera arter. Fördelen med mikroskopi inkluderar förmågan att uppskatta parasitemi, möjligheten att identifiera parasitstadier, inklusive gametocyter, och dess låga kostnad. Denna metod är dock arbetsintensiv, svår att standardisera och kräver välutbildade mikroskopister. Majoriteten av RDT är baserade på detektion av P. falciparum histidinrikt protein 2 (HRP-2) antigen och detekterar inte alla malariaarter. RDT:er som upptäcker laktosdehydrogenas (LDH) och aldolas reagerar i allmänhet med alla fyra arterna av malariaparasiter och kan därför inte skilja mellan arterna även om ansträngningar pågår för att förbättra deras prestanda för artdetektering. I miljöer där flera malariaarter samcirkulerar kan molekylära metoder vara mer tillförlitliga än mikroskopi och RDT för att noggrant diagnostisera arter av malariaparasiter med låga parasitemier. Konventionella molekylära metoder, såsom kapslad polymeraskedjereaktion (kapslad PCR) eller realtids-PCR, är dock tekniskt utmanande och resurskrävande och är i allmänhet begränsade till referenslaboratorier på grund av behovet av välutrustade laboratorier. Nyligen har nya molekylära metoder som kan användas i fältmiljöer utvecklats och detta öppnar nya möjligheter för att utforska molekylära verktyg för malariadiagnos i endemiska länder. I syfte att underlätta användningen av molekylära verktyg för malariakontrollprogram utvecklade malarialaboratoriet vid Centers for Disease Control and Prevention (CDC) i Atlanta, USA en enkel isotermisk molekylär metod som kallas Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp) ) för diagnos av malaria. För närvarande finns RealAmp-primrar för att detektera Plasmodium-släktet och detektering av P. falciparum och P. vivax-arter. RealAmp-metoden har stor potential som ett molekylärt verktyg för diagnos av malaria i fält (och andra infektioner med stor folkhälsopåverkan, såsom HIV och tuberkulos). Det kan utgöra ett alternativ till konventionella PCR-baserade diagnostiska metoder för fältanvändning i kliniska och operativa program. Syftet med detta förslag är att validera RealAmps känslighet för detektion av malariaparasiter i blodfläckar från patienter med klinisk diagnos av malaria i två endemiska delstater i Brasilien med samcirkulation av P. falciparum och P. vivax. I denna utvärdering kommer RealAmp och mikroskopisk undersökning att jämföras med en realtids-PCR-metod som referenstest.