Validation de la méthode RealAmp pour le diagnostic du paludisme dans les zones endémiques du Brésil

Dans le monde, environ 2 milliards de personnes vivent dans des zones à risque de paludisme avec une morbidité dépassant 250 millions de cas, avec environ 800 000 décès par an. Parmi les quatre espèces de parasites du paludisme qui causent l'infection humaine, P. falciparum est responsable de la majorité des cas de paludisme grave, suivi de P. vivax. Un diagnostic précoce et précis est essentiel pour un traitement rapide et correct, qui peut réduire le taux de mortalité et interrompre la transmission. Actuellement, les méthodes conventionnelles de diagnostic du paludisme comprennent l'examen microscopique de frottis sanguins fins et épais et les tests de diagnostic rapide (TDR). La microscopie optique dans la pratique détecte généralement une parasitémie aussi faible que 100 parasites/µl et peut différencier les espèces. L'avantage de la microscopie comprend la capacité d'estimer la parasitémie, la possibilité d'identifier les stades du parasite, y compris les gamétocytes, et son faible coût. Cependant, cette méthode demande beaucoup de travail, est difficile à standardiser et nécessite des microscopistes bien formés. La majorité des TDR sont basés sur la détection de l'antigène de la protéine 2 riche en histidine (HRP-2) de P. falciparum et ne détectent pas toutes les espèces de paludisme. Les TDR qui détectent la lactose déshydrogénase (LDH) et l'aldolase réagissent généralement largement avec les quatre espèces de parasites du paludisme et ne peuvent donc pas différencier les espèces, bien que des efforts soient en cours pour améliorer leurs performances de détection des espèces. Dans les milieux où plusieurs espèces de paludisme co-circulent, les méthodes moléculaires peuvent être plus fiables que la microscopie et les TDR pour diagnostiquer avec précision les espèces de parasites du paludisme à faible parasitémie. Cependant, les méthodes moléculaires conventionnelles, telles que la réaction en chaîne par polymérase nichée (PCR nichée) ou la PCR en temps réel, sont techniquement difficiles et gourmandes en ressources et sont généralement limitées aux laboratoires de référence en raison du besoin de laboratoires bien équipés. Récemment, de nouvelles méthodes moléculaires pouvant être utilisées sur le terrain ont été développées, ce qui ouvre de nouvelles opportunités pour explorer les outils moléculaires pour le diagnostic du paludisme dans les pays endémiques. Dans le but de faciliter l'utilisation d'outils moléculaires pour les programmes de lutte contre le paludisme, le laboratoire de lutte contre le paludisme des Centers for Disease Control and Prevention (CDC) d'Atlanta, aux États-Unis, a développé une méthode moléculaire isotherme simple appelée Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp ) pour le diagnostic du paludisme. Actuellement, des amorces RealAmp existent pour détecter le genre Plasmodium et la détection des espèces P. falciparum et P. vivax. La méthode RealAmp a un grand potentiel en tant qu'outil moléculaire pour le diagnostic du paludisme sur le terrain (et d'autres infections ayant un impact majeur sur la santé publique, telles que le VIH et la tuberculose). Il peut fournir une alternative aux méthodes de diagnostic conventionnelles basées sur la PCR pour une utilisation sur le terrain dans les programmes cliniques et opérationnels. L'objectif de cette proposition est de valider la sensibilité de RealAmp pour la détection des parasites du paludisme dans les taches de sang de patients présentant un diagnostic clinique de paludisme dans deux États endémiques du Brésil avec co-circulation de P. falciparum et P. vivax. Dans cette évaluation, RealAmp et l'examen microscopique seront comparés à une méthode PCR en temps réel comme test de référence.