Validación del Método RealAmp para el Diagnóstico de Malaria en Áreas Endémicas de Brasil

En todo el mundo, aproximadamente 2 000 millones de personas viven en áreas de riesgo de paludismo con una morbilidad que supera los 250 millones de casos, con aproximadamente 800 000 muertes al año. De las cuatro especies de parásitos de la malaria que causan infección humana, P. falciparum es responsable de la mayoría de los casos de malaria grave, seguida por P. vivax. El diagnóstico temprano y preciso es esencial para un tratamiento oportuno y correcto, que puede reducir la tasa de mortalidad e interrumpir la transmisión. Actualmente, los métodos convencionales para el diagnóstico de la malaria incluyen el examen microscópico de frotis de sangre finos y gruesos y las pruebas de diagnóstico rápido (PDR). En la práctica, la microscopía óptica suele detectar parasitemias tan bajas como 100 parásitos/µl y puede diferenciar especies. La ventaja de la microscopía incluye la capacidad de estimar la parasitemia, la posibilidad de identificar etapas del parásito, incluidos los gametocitos, y su bajo costo. Sin embargo, este método es laborioso, difícil de estandarizar y requiere microscopistas bien capacitados. La mayoría de las PDR se basan en la detección del antígeno de la proteína 2 rica en histidina (HRP-2) de P. falciparum y no detectan todas las especies de paludismo. Las RDT que detectan la lactosa deshidrogenasa (LDH) y la aldolasa generalmente reaccionan ampliamente con las cuatro especies de parásitos de la malaria y, por lo tanto, no pueden diferenciar entre las especies, aunque se están realizando esfuerzos para mejorar su rendimiento para la detección de especies. En entornos donde co-circulan múltiples especies de malaria, los métodos moleculares pueden ser más confiables que la microscopía y las RDT para diagnosticar con precisión las especies de parásitos de la malaria con parasitemias bajas. Sin embargo, los métodos moleculares convencionales, como la reacción en cadena de la polimerasa anidada (PCR anidada) o la PCR en tiempo real, son técnicamente desafiantes y exigen muchos recursos y generalmente están restringidos a laboratorios de referencia debido a la necesidad de laboratorios bien equipados. Recientemente, se han desarrollado nuevos métodos moleculares que se pueden usar en entornos de campo y esto abre nuevas oportunidades para explorar herramientas moleculares para el diagnóstico de malaria en países endémicos. Con el objetivo de facilitar el uso de herramientas moleculares para los programas de control de la malaria, el laboratorio de malaria de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) en Atlanta, EE. UU., desarrolló un método molecular isotérmico simple llamado Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp ) para el diagnóstico de la malaria. Actualmente existen cebadores RealAmp para la detección del género Plasmodium y la detección de las especies P. falciparum y P. vivax. El método RealAmp tiene un gran potencial como herramienta molecular para el diagnóstico de la malaria en el campo (y otras infecciones de gran impacto en la salud pública, como el VIH y la tuberculosis). Puede proporcionar una alternativa a los métodos de diagnóstico convencionales basados ​​en PCR para uso de campo en programas clínicos y operativos. El objetivo de esta propuesta es validar la sensibilidad de RealAmp para la detección de parásitos de malaria en gotas de sangre de pacientes con diagnóstico clínico de malaria en dos estados endémicos de Brasil con co-circulación de P. falciparum y P. vivax. En esta evaluación, RealAmp y el examen microscópico se compararán con un método de PCR en tiempo real como prueba de referencia.