Validering av RealAmp-metoden for diagnostisering av malaria i endemiske områder i Brasil

På verdensbasis lever omtrent 2 milliarder mennesker i områder med risiko for malaria med sykelighet som overgår 250 millioner tilfeller, med omtrent 800 000 dødsfall, per år. Av de fire artene av malariaparasitter som forårsaker infeksjon hos mennesker, er P. falciparum ansvarlig for flertallet av alvorlige malariatilfeller etterfulgt av P. vivax. Tidlig og nøyaktig diagnose er avgjørende for rask og riktig behandling, noe som kan redusere dødsraten og avbryte overføringen. For tiden inkluderer konvensjonelle metoder for diagnostisering av malaria mikroskopisk undersøkelse av tynne og tykke blodutstryk og raske diagnostiske tester (RDT). Lysmikroskopi i praksis oppdager typisk parasitemia så lavt som 100 parasitter/µl, og det kan skille arter. Fordelen med mikroskopi inkluderer muligheten til å estimere parasitemi, muligheten til å identifisere parasittstadier, inkludert gametocytter, og dens lave kostnader. Denne metoden er imidlertid arbeidskrevende, vanskelig å standardisere, og krever godt trente mikroskopister. Flertallet av RDT er basert på påvisning av P. falciparum histidinrikt protein 2 (HRP-2) antigen og oppdager ikke alle malariaarter. RDT-er som oppdager laktosedehydrogenase (LDH) og aldolase reagerer generelt med alle fire arter av malariaparasitter og kan derfor ikke skille mellom artene selv om det pågår anstrengelser for å forbedre ytelsen deres for artsdeteksjon. I omgivelser der flere malariaarter samsirkulerer, kan molekylære metoder være mer pålitelige enn mikroskopi og RDT for nøyaktig diagnostisering av arter av malariaparasitter med lave parasitter. Imidlertid er konvensjonelle molekylære metoder, som nestet polymerasekjedereaksjon (nested PCR) eller sanntids PCR, teknisk utfordrende og ressurskrevende og er generelt begrenset til referanselaboratorier på grunn av behovet for velutstyrte laboratorier. Nylig er det utviklet nye molekylære metoder som kan brukes i feltmiljøer, og dette åpner for nye muligheter for å utforske molekylære verktøy for malariadiagnose i endemiske land. Med mål om å lette bruken av molekylære verktøy for malariakontrollprogrammer, utviklet malarialaboratoriet ved Centers for Disease Control and Prevention (CDC) i Atlanta, USA en enkel isotermisk molekylær metode kalt Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp) ) for diagnostisering av malaria. For tiden eksisterer RealAmp-primere for påvisning av Plasmodium-slekten og påvisning av P. falciparum- og P. vivax-arter. RealAmp-metoden har et stort potensial som et molekylært verktøy for diagnostisering av malaria i felt (og andre infeksjoner med stor folkehelsepåvirkning, som HIV og tuberkulose). Det kan gi et alternativ til konvensjonelle PCR-baserte diagnostiske metoder for feltbruk i kliniske og operasjonelle programmer. Målet med dette forslaget er å validere sensitiviteten til RealAmp for påvisning av malariaparasitter i blodflekker fra pasienter med klinisk diagnose av malaria i to endemiske delstater i Brasil med samsirkulasjon av P. falciparum og P. vivax. I denne evalueringen vil RealAmp og mikroskopisk undersøkelse sammenlignes med en sanntids PCR-metode som referansetest.