RealAmp-menetelmän validointi malarian diagnosoimiseksi Brasilian endeemisillä alueilla

Maailmanlaajuisesti noin 2 miljardia ihmistä asuu malariariskialueilla, joiden sairastuvuus ylittää 250 miljoonaa tapausta ja noin 800 000 kuolemaa vuodessa. Neljästä malarialoislajista, jotka aiheuttavat ihmisen tartunnan, P. falciparum on vastuussa suurimmasta osasta vakavia malariatapauksia, joita seuraa P. vivax. Varhainen ja tarkka diagnoosi on välttämätöntä nopean ja oikean hoidon kannalta, mikä voi vähentää kuolleisuutta ja keskeyttää leviämisen. Tällä hetkellä tavanomaisia ​​malarian diagnosointimenetelmiä ovat ohuiden ja paksujen verinäytteiden mikroskooppinen tutkimus ja pikadiagnostiset testit (RDT). Käytännössä valomikroskopia havaitsee tyypillisesti loisia jopa 100 loista/µl ja se pystyy erottamaan lajit. Mikroskoopin etuja ovat kyky arvioida parasitemia, mahdollisuus tunnistaa loisen vaiheet, mukaan lukien gametosyytit, ja sen alhaiset kustannukset. Tämä menetelmä on kuitenkin työvoimavaltainen, vaikeasti standardoitava ja vaatii hyvin koulutettuja mikroskooppeja. Suurin osa RDT:istä perustuu P. falciparumin histidiinirikkaan proteiini 2 (HRP-2) -antigeenin havaitsemiseen, eivätkä ne havaitse kaikkia malarialajeja. Laktoosidehydrogenaasia (LDH) ja aldolaasia havaitsevat RDT:t reagoivat yleensä laajalti kaikkien neljän malarialoislajin kanssa, eivätkä siksi voi erottaa lajeja toisistaan, vaikka ponnisteluja niiden suorituskyvyn parantamiseksi lajien havaitsemisessa on meneillään. Asetuksissa, joissa useita malarialajeja kiertää rinnakkain, molekyylimenetelmät voivat olla mikroskopiaa ja RDT:itä luotettavampia diagnosoimaan tarkasti malarialoislajit, joilla on vähän loisia. Perinteiset molekyylimenetelmät, kuten sisäkkäinen polymeraasiketjureaktio (nested PCR) tai reaaliaikainen PCR, ovat kuitenkin teknisesti haastavia ja resursseja vaativia, ja ne rajoittuvat yleensä vertailulaboratorioihin, koska tarvitaan hyvin varustettuja laboratorioita. Viime aikoina on kehitetty uusia molekyylimenetelmiä, joita voidaan käyttää kenttäolosuhteissa, ja tämä avaa uusia mahdollisuuksia tutkia molekyylityökaluja malarian diagnosointiin endeemisissä maissa. Helpottaakseen molekyylityökalujen käyttöä malarian torjuntaohjelmissa malarialaboratorio Centers for Disease Control and Preventionissa (CDC) Atlantassa, Yhdysvalloissa kehitti yksinkertaisen isotermisen molekyylimenetelmän nimeltä Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp). ) malarian diagnosointiin. Tällä hetkellä on olemassa RealAmp-alukkeita Plasmodium-suvun ja P. falciparum- ja P. vivax -lajien havaitsemiseen. RealAmp-menetelmällä on suuri potentiaali molekyyli-työkaluna kentällä esiintyvän malarian (ja muiden kansanterveydellisesti merkittävien infektioiden, kuten HIV:n ja tuberkuloosin) diagnosointiin. Se voi tarjota vaihtoehdon perinteisille PCR-pohjaisille diagnostisille menetelmille kenttäkäyttöön kliinisissä ja operatiivisissa ohjelmissa. Tämän ehdotuksen tavoitteena on validoida RealAmp:n herkkyys malarialoisten havaitsemiseksi veripisteistä potilailta, joilla on kliininen malariadiagnoosi Brasilian kahdessa endeemisessä osavaltiossa P. falciparumin ja P. vivaxin rinnakkaiskierrossa. Tässä arvioinnissa RealAmp- ja mikroskooppista tutkimusta verrataan vertailutestinä reaaliaikaiseen PCR-menetelmään.