Walidacja metody RealAmp do diagnozowania malarii na obszarach endemicznych Brazylii

Na całym świecie około 2 miliardy ludzi żyje na obszarach zagrożonych malarią, a zachorowalność przekracza 250 milionów przypadków i około 800 000 zgonów rocznie. Spośród czterech gatunków pasożytów malarii, które powodują infekcje u ludzi, P. falciparum jest odpowiedzialny za większość ciężkich przypadków malarii, a następnie P. vivax. Wczesna i dokładna diagnoza jest niezbędna do szybkiego i prawidłowego leczenia, które może zmniejszyć śmiertelność i przerwać transmisję. Obecnie konwencjonalne metody diagnozowania malarii obejmują badanie mikroskopowe cienkich i grubych rozmazów krwi oraz szybkie testy diagnostyczne (RDT). Mikroskopia świetlna w praktyce zazwyczaj wykrywa parazytemię już przy stężeniu 100 pasożytów/µl i umożliwia różnicowanie gatunków. Zaletą mikroskopii jest możliwość oszacowania parazytemii, możliwość identyfikacji stadiów rozwojowych pasożyta, w tym gametocytów, oraz niski koszt. Jednak ta metoda jest pracochłonna, trudna do standaryzacji i wymaga dobrze wyszkolonych mikroskopistów. Większość RDT opiera się na wykrywaniu antygenu białka bogatego w histydynę 2 (HRP-2) P. falciparum i nie wykrywa wszystkich gatunków malarii. RDT, które wykrywają dehydrogenazę laktozową (LDH) i aldolazę, zasadniczo reagują ze wszystkimi czterema gatunkami pasożytów malarii i dlatego nie mogą różnicować między gatunkami, chociaż trwają wysiłki mające na celu poprawę ich wydajności w wykrywaniu gatunków. W warunkach, w których współkrąży wiele gatunków malarii, metody molekularne mogą być bardziej niezawodne niż mikroskopia i RDT w dokładnym diagnozowaniu gatunków pasożytów malarii o niskiej parazytemii. Jednak konwencjonalne metody molekularne, takie jak zagnieżdżona reakcja łańcuchowa polimerazy (zagnieżdżona PCR) lub PCR w czasie rzeczywistym, są technicznie trudne i wymagają dużych zasobów i są generalnie ograniczone do laboratoriów referencyjnych ze względu na zapotrzebowanie na dobrze wyposażone laboratoria. Niedawno opracowano nowe metody molekularne, które można stosować w warunkach terenowych, co otwiera nowe możliwości badania narzędzi molekularnych do diagnozowania malarii w krajach endemicznych. Mając na celu ułatwienie wykorzystania narzędzi molekularnych do programów kontroli malarii, laboratorium malarii w Centers for Disease Control and Prevention (CDC) w Atlancie w USA opracowało prostą izotermiczną metodę molekularną zwaną Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp ) do diagnozowania malarii. Obecnie istnieją startery RealAmp do wykrywania rodzaju Plasmodium oraz wykrywania gatunków P. falciparum i P. vivax. Metoda RealAmp ma ogromny potencjał jako narzędzie molekularne do diagnozowania malarii w terenie (i innych infekcji o dużym wpływie na zdrowie publiczne, takich jak HIV i gruźlica). Może stanowić alternatywę dla konwencjonalnych metod diagnostycznych opartych na PCR do użytku w terenie w programach klinicznych i operacyjnych. Celem tej propozycji jest walidacja czułości RealAmp do wykrywania pasożytów malarii w plamkach krwi od pacjentów z kliniczną diagnozą malarii w dwóch endemicznych stanach Brazylii ze współkrążeniem P. falciparum i P. vivax. W tej ocenie RealAmp i badanie mikroskopowe zostaną porównane z metodą PCR w czasie rzeczywistym jako testem referencyjnym.