Convalida del metodo RealAmp per la diagnosi della malaria nelle aree endemiche del Brasile

In tutto il mondo, circa 2 miliardi di persone vivono in aree a rischio di malaria con una morbilità che supera i 250 milioni di casi, con circa 800.000 decessi all'anno. Delle quattro specie di parassiti della malaria che causano l'infezione umana, P. falciparum è responsabile della maggior parte dei casi gravi di malaria, seguito da P. vivax. Una diagnosi precoce e accurata è essenziale per un trattamento tempestivo e corretto, che può ridurre il tasso di mortalità e interrompere la trasmissione. Attualmente, i metodi convenzionali per la diagnosi della malaria includono l'esame microscopico di strisci di sangue sottili e spessi e test diagnostici rapidi (RDT). La microscopia ottica in pratica rileva tipicamente la parassitemia fino a 100 parassiti/µl e può differenziare le specie. Il vantaggio della microscopia include la capacità di stimare la parassitemia, la possibilità di identificare gli stadi del parassita, compresi i gametociti, e il suo basso costo. Tuttavia, questo metodo è laborioso, difficile da standardizzare e richiede microscopisti ben addestrati. La maggior parte degli RDT si basa sul rilevamento dell'antigene della proteina 2 ricca di istidina (HRP-2) di P. falciparum e non rileva tutte le specie di malaria. Gli RDT che rilevano il lattosio deidrogenasi (LDH) e l'aldolasi generalmente reagiscono ampiamente con tutte e quattro le specie di parassiti della malaria e pertanto non possono differenziarsi tra le specie sebbene siano in corso sforzi per migliorare le loro prestazioni per il rilevamento delle specie. In contesti in cui circolano più specie di malaria, i metodi molecolari possono essere più affidabili della microscopia e delle RDT nella diagnosi accurata delle specie di parassiti della malaria con basse parassitemie. Tuttavia, i metodi molecolari convenzionali, come la reazione a catena della polimerasi nidificata (PCR nidificata) o la PCR in tempo reale, sono tecnicamente impegnativi e ad alta intensità di risorse e sono generalmente limitati ai laboratori di riferimento a causa della necessità di laboratori ben attrezzati. Recentemente sono stati sviluppati nuovi metodi molecolari che possono essere utilizzati in contesti sul campo e questo apre nuove opportunità per esplorare strumenti molecolari per la diagnosi della malaria nei paesi endemici. Con l'obiettivo di facilitare l'uso di strumenti molecolari per i programmi di controllo della malaria, il laboratorio della malaria presso i Centers for Disease Control and Prevention (CDC) di Atlanta, USA, ha sviluppato un semplice metodo molecolare isotermico chiamato Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp ) per la diagnosi della malaria. Attualmente esistono primer RealAmp per il rilevamento del genere Plasmodium e il rilevamento delle specie P. falciparum e P. vivax. Il metodo RealAmp ha un grande potenziale come strumento molecolare per la diagnosi sul campo della malaria (e di altre infezioni di grande impatto sulla salute pubblica, come l'HIV e la tubercolosi). Può fornire un'alternativa ai metodi diagnostici convenzionali basati sulla PCR per l'uso sul campo nei programmi clinici e operativi. L'obiettivo di questa proposta è convalidare la sensibilità di RealAmp per il rilevamento di parassiti della malaria in macchie di sangue da pazienti con diagnosi clinica di malaria in due stati endemici del Brasile con co-circolazione di P. falciparum e P. vivax. In questa valutazione, RealAmp e l'esame microscopico saranno confrontati con un metodo PCR in tempo reale come test di riferimento.