Validatie van RealAmp-methode voor de diagnose van malaria in endemische gebieden van Brazilië

Wereldwijd leven ongeveer 2 miljard mensen in gebieden die risico lopen op malaria, met een morbiditeit van meer dan 250 miljoen gevallen en ongeveer 800.000 doden per jaar. Van de vier soorten malariaparasieten die menselijke infectie veroorzaken, is P. falciparum verantwoordelijk voor de meeste ernstige gevallen van malaria, gevolgd door P. vivax. Vroege en nauwkeurige diagnose is essentieel voor een snelle en correcte behandeling, die het sterftecijfer kan verminderen en de overdracht kan onderbreken. Momenteel omvatten conventionele methoden voor de diagnose van malaria microscopisch onderzoek van dunne en dikke bloeduitstrijkjes en snelle diagnostische tests (RDT's). Lichtmicroscopie detecteert in de praktijk typisch parasitemie vanaf 100 parasieten/µl en kan soorten onderscheiden. Het voordeel van microscopie omvat de mogelijkheid om parasitemie in te schatten, de mogelijkheid om parasitaire stadia te identificeren, inclusief gametocyten, en de lage kosten. Deze methode is echter arbeidsintensief, moeilijk te standaardiseren en vereist goed opgeleide microscopisten. De meeste RDT's zijn gebaseerd op de detectie van P. falciparum histidine-rijk eiwit 2 (HRP-2)-antigeen en detecteren niet alle malariasoorten. RDT's die lactosedehydrogenase (LDH) en aldolase detecteren, reageren over het algemeen breed met alle vier soorten malariaparasieten en kunnen daarom geen onderscheid maken tussen de soorten, hoewel er inspanningen worden geleverd om hun prestaties voor soortdetectie te verbeteren. In omgevingen waar meerdere malariasoorten samen circuleren, kunnen moleculaire methoden betrouwbaarder zijn dan microscopie en RDT's bij het nauwkeurig diagnosticeren van de soort malariaparasieten met lage parasitemie. Conventionele moleculaire methoden, zoals geneste polymerasekettingreactie (geneste PCR) of real-time PCR, zijn echter technisch uitdagend en arbeidsintensief en zijn over het algemeen beperkt tot referentielaboratoria vanwege de behoefte aan goed uitgeruste laboratoria. Onlangs zijn nieuwe moleculaire methoden ontwikkeld die in het veld kunnen worden gebruikt en dit opent nieuwe mogelijkheden voor het verkennen van moleculaire hulpmiddelen voor de diagnose van malaria in endemische landen. Met als doel het gebruik van moleculaire hulpmiddelen voor malariabestrijdingsprogramma's te vergemakkelijken, heeft het malarialaboratorium van de Centers for Disease Control and Prevention (CDC) in Atlanta, VS een eenvoudige isothermische moleculaire methode ontwikkeld, Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp ) voor de diagnose van malaria. Momenteel bestaan ​​er RealAmp-primers voor het detecteren van het geslacht Plasmodium en de detectie van P. falciparum- en P. vivax-soorten. De RealAmp-methode heeft een groot potentieel als moleculair hulpmiddel voor de diagnose van malaria in het veld (en andere infecties met een grote impact op de volksgezondheid, zoals hiv en tuberculose). Het kan een alternatief bieden voor conventionele op PCR gebaseerde diagnostische methoden voor gebruik in het veld in klinische en operationele programma's. Het doel van dit voorstel is het valideren van de gevoeligheid van RealAmp voor de detectie van malariaparasieten in bloedvlekken van patiënten met klinische diagnose van malaria in twee endemische staten van Brazilië met co-circulatie van P. falciparum en P. vivax. In deze evaluatie worden RealAmp en microscopisch onderzoek vergeleken met een real-time PCR-methode als referentietest.