Validação do Método RealAmp para o Diagnóstico de Malária em Áreas Endêmicas do Brasil

Em todo o mundo, aproximadamente 2 bilhões de pessoas vivem em áreas de risco para malária com morbidade superior a 250 milhões de casos, com aproximadamente 800.000 mortes, por ano. Das quatro espécies de parasitas da malária que causam infecção humana, o P. falciparum é responsável pela maioria dos casos graves de malária, seguido pelo P. vivax. O diagnóstico precoce e preciso é essencial para o tratamento rápido e correto, o que pode reduzir a taxa de mortalidade e interromper a transmissão. Atualmente, os métodos convencionais para o diagnóstico da malária incluem exame microscópico de esfregaços de sangue finos e grossos e testes de diagnóstico rápido (RDTs). A microscopia de luz na prática normalmente detecta parasitemia tão baixa quanto 100 parasitas/µl e pode diferenciar espécies. A vantagem da microscopia inclui a capacidade de estimar a parasitemia, a possibilidade de identificar estágios do parasita, incluindo gametócitos, e seu baixo custo. No entanto, este método é trabalhoso, difícil de padronizar e requer microscopistas bem treinados. A maioria dos RDTs é baseada na detecção do antígeno da proteína 2 rica em histidina (HRP-2) de P. falciparum e não detecta todas as espécies de malária. RDTs que detectam lactose desidrogenase (LDH) e aldolase geralmente reagem amplamente com todas as quatro espécies de parasitas da malária e, portanto, não podem diferenciar entre as espécies, embora esforços estejam em andamento para melhorar seu desempenho na detecção de espécies. Em locais onde co-circulam várias espécies de malária, os métodos moleculares podem ser mais confiáveis ​​do que a microscopia e os RDTs para diagnosticar com precisão as espécies de parasitas da malária com baixa parasitemia. No entanto, métodos moleculares convencionais, como reação em cadeia da polimerase aninhada (nested PCR) ou PCR em tempo real, são tecnicamente desafiadores e exigem muitos recursos e geralmente são restritos a laboratórios de referência devido à necessidade de laboratórios bem equipados. Recentemente, novos métodos moleculares que podem ser usados ​​em ambientes de campo foram desenvolvidos e isso abre novas oportunidades para explorar ferramentas moleculares para o diagnóstico da malária em países endêmicos. Com o objetivo de facilitar o uso de ferramentas moleculares para programas de controle da malária, o laboratório de malária do Centers for Disease Control and Prevention (CDC) em Atlanta, EUA, desenvolveu um método molecular isotérmico simples chamado Real-Time Fluorescence Loop-Mediated Isothermal Amplification (RealAmp ) para o diagnóstico da malária. Atualmente, existem primers RealAmp para detecção do gênero Plasmodium e detecção das espécies P. falciparum e P. vivax. O método RealAmp tem grande potencial como ferramenta molecular para o diagnóstico de malária no campo (e outras infecções de grande impacto na saúde pública, como HIV e tuberculose). Ele pode fornecer uma alternativa aos métodos convencionais de diagnóstico baseados em PCR para uso em campo em programas clínicos e operacionais. O objetivo desta proposta é validar a sensibilidade do RealAmp para detecção de parasitas da malária em amostras de sangue de pacientes com diagnóstico clínico de malária em dois estados endêmicos do Brasil com co-circulação de P. falciparum e P. vivax. Nesta avaliação, o RealAmp e o exame microscópico serão comparados a um método de PCR em tempo real como teste de referência.